吳紅松

菏澤學(xué)院 生命科學(xué)系，菏澤 274015

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DEHP暴露對(duì)鯉魚腎腦生物標(biāo)志物的影響

吳紅松

菏澤學(xué)院 生命科學(xué)系，菏澤 274015

為探討鄰苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)對(duì)魚類腎、腦組織生物標(biāo)志物的影響，將鯉魚分別在濃度為5、20、80、160 mg·L-1的DEHP水體，暴露20 d，以水和吐溫-80為對(duì)照，測(cè)定腎腦組織中多種酶活性和丙二醛(MDA)含量的變化。結(jié)果表明：與水對(duì)照組相比，吐溫-80組所測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)，差異均不顯著。與水和吐溫-80對(duì)照組相比，各染毒組，腎臟中超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)活性和抗羥自由基、抗超氧陰離子的活力均顯著降低(P< 0.05或P< 0.01)。谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)酶活性呈現(xiàn)先升高后降低，在5、20、80 mg·L-1濃度組顯著升高(P<0.05)。丙二醛(MDA)含量在80、160 mg·L-1濃度下，顯著升高(P<0.05), 但腦組織中變化不顯著。腦中一氧化氮合酶(NOS)在各濃度組顯著升高(P<0.05或P<0.01)；乙酰膽堿酯酶(AChE)在80、160 mg·L-1時(shí)降低顯著(P< 0.05)；鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)呈先升高后降低的趨勢(shì)，在20 mg·L-1下，升高顯著(P< 0.01)，在80、160 mg·L-1濃度組，降低極顯著(P<0.01)；抗羥自由基、抗超氧陰離子活性均顯著下降(P<0.05或P<0.01)。可見，在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，DEHP對(duì)鯉魚具有一定免疫毒性和神經(jīng)毒性，進(jìn)一步的機(jī)理有待研究。

鄰苯二甲酸二乙基己酯；鯉魚；腎；腦；生物標(biāo)志物；免疫毒性；神經(jīng)毒性

鄰苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)全球年產(chǎn)量達(dá)300～400萬噸[1]。廣泛存在于各種PVC塑料制品中，如食品包裝材料、兒童玩具、吸管等[2-3]。為主要聚氯乙烯(PVC)塑料增塑劑，用于提高塑料的可塑性和易彎曲性[4]。DEHP與塑料分子間以氫鍵或范德華力結(jié)合不牢固，易釋放入大氣、食品、飲用水及其他物質(zhì)中造成污染[5-6]。美國(guó)、中國(guó)已先后將其列為優(yōu)先控制的污染物[7]。

2014年12月12日，歐盟化學(xué)品管理局(ECHA)宣布DEHP為一種廣泛使用的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，會(huì)干擾機(jī)體激素的合成、代謝、活動(dòng)等過程，影響自身生殖發(fā)育、神經(jīng)和免疫等功能。目前對(duì)于DEHP的生殖遺傳毒性[8-9]、心臟毒性[10-11]、肝臟毒性[12-13]等方面都有了相關(guān)報(bào)道，發(fā)現(xiàn)DEHP及其代謝產(chǎn)物MEHP可提前啟動(dòng)雄性小鼠生殖細(xì)胞的凋亡，從而導(dǎo)致睪丸萎縮[8]，引起生殖系統(tǒng)紊亂，降低繁殖率[9]；誘導(dǎo)肝細(xì)胞毒性[13]，明顯提高大、小鼠肝細(xì)胞癌發(fā)生率[12]；引發(fā)大鼠血壓升高，心臟、呼吸驟停等癥狀[11]。可抑制小鏘魚心率[10]，促進(jìn)雌性青鳉卵母細(xì)胞的發(fā)育[14]，并引發(fā)魚類肝損傷[14-15]，造成金鯽魚腎、腦組織脂質(zhì)過氧化[16]，并具有生殖毒性、神經(jīng)毒性[17]，對(duì)斑馬魚胚胎具有致死毒性和發(fā)育毒性[18]；并誘導(dǎo)果蠅腦組織基因呈現(xiàn)差異表達(dá)等[19]。但對(duì)于DEHP對(duì)鯉魚腎腦毒性相關(guān)報(bào)道較少。

環(huán)境脅迫，可引起免疫系統(tǒng)中相關(guān)酶活性和含量發(fā)生敏銳的變化，超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、抗羥自由基、抗超氧陰離子活性、MDA含量都與機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)密切相關(guān)[20]。一氧化氮合酶(NOS)、乙酰膽堿酯酶(AChE)、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)活性和丙二醛(MDA)含量的改變，可作為指示環(huán)境中污染物脅迫對(duì)腦組織損傷的指標(biāo)[21-25]。本文通過研究DEHP暴露對(duì)鯉魚腎腦組織中生物標(biāo)志物的影響，探討DEHP對(duì)魚類抗氧化系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的影響，以期為DEHP的環(huán)境安全性評(píng)價(jià)和生物標(biāo)志物篩選提供參考。

1 材料與方法 (Materials and methods)

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

鯉魚 (Cyprinus carpio Linnaeus)，購買自菏澤市牡丹區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)，質(zhì)量(62.74±4.16) g，體長(zhǎng)(13.81±0.94) cm，在室溫條件下馴養(yǎng)2周(馴養(yǎng)期間無死亡)。

1.2 儀器及主要試劑

主要試劑：鄰苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)、吐溫-80均為天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所分析純?cè)噭?/p>

實(shí)驗(yàn)儀器：低溫冷凍離心機(jī)(Eppendorf—5417R)、熒光分光光度計(jì)(日立F-4500)、自制玻璃缸(120 cm×80 cm×60 cm)等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)設(shè)置水、吐溫-80(80 mg·L-1) 2個(gè)對(duì)照組，DEHP用80 mg·L-1吐溫-80助溶后(參照中國(guó)藥典CP2005)，設(shè)5、20、80、160 mg·L-14個(gè)染毒組，每組設(shè)3個(gè)平行，每個(gè)缸內(nèi)處理液100 L，鯉魚36尾。每天8時(shí)投喂1次，每2 天用已配制稀釋的DEHP換掉缸內(nèi)三分之一的處理液，水均為曝氣2 d以上的自來水(T=13 ℃～17 ℃；OD>6 mg·L-1；pH=6.8～7.2)，充氧過濾泵持續(xù)充氧，水質(zhì)符合中國(guó)漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(GB 11607-89)，浸泡染毒20 d。

1.4 酶液的提取

染毒20 d后，隨機(jī)從每組取鯉魚6尾擦干、解剖，分離出腎臟、腦稱重。按m (g)：v (mL)=1：5的組織質(zhì)量與0.65%的生理鹽水體積之比混合,置于冰水中勻漿，在4 ℃，5 000 r·min-1，離心15 min，取上清，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫?4 h內(nèi)測(cè)定完。

1.5 酶活性的測(cè)定

SOD、CAT、GSH-Px、NOS、AChE、CaN、抑制羥自由基、抗超氧陰離子自由基的活性和MDA、組織蛋白含量的測(cè)定，均采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒，按照試劑盒說明操作，利用紫外分光法測(cè)出吸光值，根據(jù)公式計(jì)算出各樣本的酶活和MDA、組織蛋白含量。

1.5.1 SOD活力測(cè)定

1.5.2 CAT活力測(cè)定

在一定條件下CAT可以分解底物過氧化氫(H2O2)，使H2O2在反應(yīng)體系中的濃度逐漸降低，吸光度也逐漸降低，240 nm處測(cè)定光吸收值，計(jì)算出酶活力。酶活力定義為：在一定的反應(yīng)體系中，1 s中CAT分解吸光度為0.50～0.55的底物中的H2O2的摩爾量即為一個(gè)CAT的酶活單位。

1.5.3 GSH-Px活力測(cè)定

GSH-Px可以促進(jìn)過氧化氫與還原型谷胱甘肽(GSH)反應(yīng)生成H2O及氧化型谷胱甘肽，GSH-Px的活力以催化GSH的反應(yīng)速度來表示，以412 nm下的光密度值計(jì)算酶活性。酶活力定義為：每毫克蛋白，每分鐘扣除非酶反應(yīng)的作用，使反應(yīng)體系中GSH濃度降低1 μmol·L-1為1個(gè)酶活力單位。

1.5.4 MDA含量測(cè)定

用TAB法，在532 nm處進(jìn)行比色測(cè)定。單位為nmol·mg prot-1。

1.5.5 抗超氧陰離子自由基能力測(cè)定

1.5.6 抑制羥自由基能力測(cè)定

H2O2的量和Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的·OH-量成正比關(guān)系，當(dāng)給予電子受體后，用gress試劑顯色，形成紅色物質(zhì)，其呈色與·OH-的多少成比例關(guān)系，在550 nm處進(jìn)行比色測(cè)定。酶活力定義為：每毫克組織蛋白在37 ℃下反應(yīng)1 min，使反應(yīng)體系中H2O2的濃度降低1 mmol·L-1為1個(gè)抑制羥自由基能力單位。

1.5.7 一氧化氮合酶(NOS)活性測(cè)定

NOS催化L-Arg和分子氧反應(yīng)生成NO，NO與親核性物質(zhì)生成有色化合物，在530 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，即可計(jì)算出NOS活力。酶活力定義為：每毫克組織蛋白每分鐘生成1 nmol NO為1個(gè)酶活力單位。

1.5.8 AChE活力測(cè)定

乙酰膽堿酯酶水解乙酰膽堿生成膽堿及乙酸，膽堿可以與巰基顯色劑反應(yīng)生成TNB黃色化合物，根據(jù)顏色深淺進(jìn)行比色定量，412 nm處測(cè)定吸光度。酶活力定義為：37 ℃每毫克組織蛋白在37 ℃保溫6 min，水解反應(yīng)體系中1 μmol基質(zhì)為1個(gè)活力單位。

1.5.9 CaN活力測(cè)定

酶活力定義為：每小時(shí)每毫克蛋白的鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶分解底物PNPP產(chǎn)生1 μmol無機(jī)磷的量為1個(gè)CaN的活力單位。

1.5.10 蛋白質(zhì)測(cè)定

用考馬斯亮藍(lán)法，蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果用于酶活性計(jì)算。

1.6 數(shù)據(jù)處理

求出各實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(n=6)。并利用SPSS軟件，在2個(gè)對(duì)照組之間，2個(gè)對(duì)照組和4個(gè)實(shí)驗(yàn)組間進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)，兩兩比較采用最小顯著差數(shù)法(LSD)，取顯著性水平0.05為差異顯著，0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果(Results)

2.1 DEHP對(duì)鯉魚腎臟中生物標(biāo)志物的影響

從圖1、2可以看出，與空白對(duì)照組相比，吐溫80對(duì)照組SOD、CAT、GSH-Px、抗羥自由基、抗超氧陰離子的活力和MDA 含量都變化不顯著，可見吐溫80的添加對(duì)鯉魚腎臟中6種生物標(biāo)志物的影響可以忽略。與對(duì)照組相比，鯉魚腎臟中SOD、CAT酶活性和抗羥自由基、抗超氧陰離子的活力都明顯地受到DEHP抑制。SOD酶活性情況：在DEHP各染毒組濃度下，都表現(xiàn)為顯著下降(P<0.05)。CAT酶活性情況：5 mg·L-1濃度組表現(xiàn)為受誘導(dǎo)，升高不顯著；在20、80、160 mg·L-1濃度下，均被抑制，最小值降低了77.7%，且80、160 mg·L-1濃度下下降極為顯著(P<0.01)。抑制羥自由基活力：各染毒組隨著DEHP濃度的增加而不斷降低，均被抑制，且降低顯著(P<0.05)?？钩蹶庪x子活力：5 mg·L-1濃度組被抑制，下降不顯著；20、80、160 mg·L-1各濃度組均被顯著抑制(P<0.05)，且在80、160 mg·L-1濃度下，下降極為顯著(P<0.01)，最小值降低了89.8%。GSH-Px酶活性在各染毒組隨著DEHP濃度的升高表現(xiàn)為先升高后降低。5 mg·L-1濃度組被誘導(dǎo)達(dá)到最大值113.6 U·mg·prot-1，差異顯著(P<0.05)，20、80 mg·L-1濃度組均被顯著誘導(dǎo)(P<0.05)，在160 mg·L-1濃度下被抑制，但降低不顯著。鯉魚腎臟組織MDA含量在DEHP脅迫下表現(xiàn)為逐漸升高。5、20 mg·L-1濃度組的變化與對(duì)照差異不顯著；在80、160 mg·L-1濃度下，升高顯著(P<0.05)，分別升高了33.0%、76.9%。

圖1 不同濃度的DEHP 對(duì)鯉魚腎臟中SOD、CAT、GSH-Px、抗羥自由基、抗超氧陰離子活性的影響 注：與水對(duì)照組相比，a表示差異顯著(P<0.05)，A表示差異極顯著(P<0.01)；與吐溫80組相比，b表示差異顯著(P<0.05)，B表示差異極顯著(P<0.01)；濃度單位為mg·L-1；下同。Fig. 1 Effect of different concentration of DEHP on the activities of SOD, CAT, GSH-Px, resisting superoxide anion ) and scavenging hydroxyl free radical (·OH-) in kidney of carp Note: Compared with the water control, “a” represents significant difference (P<0.05), “A” represent extremely significant difference (P<0.01); Compared with the tween-80 group, “b” represents significant difference (P<0.05), “B” represent extremely significant difference(P<0.01); the concentration unit is mg·L-1; The same applies bellow.

圖2 不同濃度的DEHP 對(duì)鯉魚腎臟中MDA含量的影響Fig. 2 Effect of different concentration of DEHP on the content of MDA of kidney in carp

2.2 DEHP對(duì)鯉魚腦組織中生物標(biāo)志物的影響

如圖3、4、5所示，與空白對(duì)照組相比，吐溫80對(duì)照組NOS、CaN、AChE、抗羥自由基、抗超氧陰離子活性和MDA含量均變化不顯著，可見，添加吐溫80對(duì)鯉魚腦組織中6種生物標(biāo)志物的影響可以忽略。與對(duì)照組相比，各染毒組NOS酶活性都明顯地受到了DEHP誘導(dǎo)，且各組都升高顯著(P<0.05)。AChE酶活性在各染毒組分別被抑制降低了31.8%、38.1%、40.6%、43.5%，在80、160 mg·L-1濃度組，表現(xiàn)為降低顯著(P<0.05)。CaN酶活性與對(duì)照組相比表現(xiàn)為先受誘導(dǎo)升高后抑制降低。5 mg·L-1濃度組升高不顯著；在20 mg·L-1濃度下，被誘導(dǎo)極顯著(P<0.01)，最大值達(dá)到0.647 U·mg·prot-1；在80、160 mg·L-1高濃度下，降低極顯著(P<0.01)。鯉魚腦組織中抑制羥自由基、抗超氧陰離子自由基活力變化與腎臟中的相似：各DEHP染毒組均被抑制，顯著降低(P<0.05)，且在160 mg·L-1濃度下，均下降極為顯著(P<0.01)，分別比對(duì)照組下降了38.7%、30.3%。在DEHP脅迫下鯉魚腦組織MDA含量表現(xiàn)為升高，但與對(duì)照組相比，變化不顯著(P>0.05)，染毒組間差異也不明顯(P>0.05)。腎臟組織中MDA 含量在80、160 mg·L-1下顯著升高，可見在DEHP脅迫下腦組織受到的脂質(zhì)過氧化作用不如腎臟組織明顯，DEHP脅迫產(chǎn)生的氧自由基在腦組織內(nèi)可被抗氧化防御酶體系有效的清除，鯉魚正常代謝未受到嚴(yán)重影響。

圖3 不同濃度的DEHP對(duì)鯉魚腦組織NOS、CaN、AChE活性的影響Fig. 3 Effect of different concentration of DEHP on the activities of NOS, CaN, AChE of brain in carp

圖4 不同濃度的DEHP對(duì)鯉魚腦組織抗羥自由基、抗超氧陰離子活性的影響Fig. 4 Effect of different concentration of DEHP on resisting superoxide anion ) and scavenging hydroxyl free radical (·OH-) activities of brain in carp

圖5 不同濃度的DEHP對(duì)鯉魚腦組織MDA含量的影響Fig. 5 Effect of different concentration of DEHP on the content of MDA in brain of carp

3 討論(Discussion)

3.1 DEHP對(duì)鯉魚腎臟的免疫毒性

污染物進(jìn)入水生動(dòng)物體內(nèi)，能夠直接或間接誘導(dǎo)產(chǎn)生活性氧自由基，主要包括超氧陰離子、羥自由基和過氧化氫等。在正常的生理?xiàng)l件下，生物體內(nèi)產(chǎn)生的活性氧自由基在生物體內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)控制下，濃度極低，且具有抗菌、消炎等作用。但在污染物刺激下，活性氧自由基可以快速增加，導(dǎo)致氧化應(yīng)激和抗氧化防御間平衡失調(diào)，引起多種器官功能異?；蚪M織病變。酶活性被認(rèn)為是一種能夠快速而靈敏地反映環(huán)境脅迫對(duì)生物體產(chǎn)生影響的生化指標(biāo)[26]。

CAT在抗氧化防御系統(tǒng)內(nèi)與SOD緊密聯(lián)系，可通過清除·OH-，催化H2O2，生成H2O和O2，解除H2O2形成的氧化脅迫，阻止其對(duì)組織的侵害。因此，CAT活性與SOD活性的變化趨勢(shì)有一定的相關(guān)性。本文中鯉魚在80、160 mg·L-1濃度DEHP脅迫下，腎臟中SOD、CAT酶活性受到顯著抑制，引起體內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)失衡，降低生物體的免疫力。陳劍杰等[27]也報(bào)道過高濃度的氟可通過降低鯉魚鰓中SOD、CAT活性，抑制其免疫能力。這與張貴生[28]發(fā)現(xiàn)的DEHP對(duì)鯉魚具有一定免疫毒性的結(jié)果一致。

在DEHP實(shí)驗(yàn)濃度脅迫下，鯉魚腎組織內(nèi)MDA含量表現(xiàn)為升高，在80、160 mg·L-1升高顯著。這可能是由于脅迫剛開始，機(jī)體產(chǎn)生的活性氧自由基還可以被抗氧化防御系統(tǒng)控制，保持相對(duì)平衡，但當(dāng)體內(nèi)各種抗氧化酶活性開始下降時(shí)，大量的活性氧自由基無法及時(shí)清除，導(dǎo)致了脂質(zhì)過氧化，MDA含量相應(yīng)升高。說明了水環(huán)境中DEHP會(huì)引起鯉魚腎組織的脂質(zhì)過氧化，造成其細(xì)胞損傷。這與張宜奎等[29]發(fā)現(xiàn)的文蛤鰓組織中SOD、CAT活性和MDA含量，經(jīng)過96 h的不同質(zhì)量濃度的Cd2+脅迫后，SOD、CAT酶活性受抑制，MDA含量升高的結(jié)果相似。與趙偉等[30]、Yokota等[31]的研究結(jié)果也相符。但鯉魚在DEHP脅迫下腦組織受到的脂質(zhì)過氧化作用不如腎臟組織明顯，在各濃度組，MDA含量均表現(xiàn)為不顯著升高。這與逯曉波等[32]用l0、100、1 000 mg·kg-1·d-1DEHP連續(xù)灌胃30 d，通過測(cè)定MDA含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DEHP未能引起初斷乳大鼠腦的脂質(zhì)過氧化水平升高的結(jié)果相似；與陳莉等[33]通過體外培養(yǎng)腦細(xì)胞染毒，觀察到DEHP可導(dǎo)致金鯽魚腦細(xì)胞DNA 損傷，呈劑量-效應(yīng)關(guān)系的結(jié)果不一致。這可能是因?yàn)镈EHP不能通過動(dòng)物體血腦屏障，也可能是DEHP進(jìn)入體內(nèi)后被分解，在腦組織中含量較低。而體外培養(yǎng)腦細(xì)胞由于沒有其他免疫系統(tǒng)的參與保護(hù)，才更加敏感。

GSH-Px能清除體內(nèi)活性氧，減輕和阻止活性氧的過氧化作用。GSH-Px酶活性隨著DEHP濃度的升高表現(xiàn)為先升高后降低。在5、20、80 mg·L-1濃度組均被顯著誘導(dǎo)(P<0.05)，在160 mg·L-1下被抑制降低。可能由于低濃度下的DEHP刺激機(jī)體產(chǎn)生大量活性氧，GPX-Px為能清除體內(nèi)過多活性氧而顯著升高；在高濃度下，因GSH-Px過量消耗致使其活性下降。

生命活動(dòng)產(chǎn)生的超氧陰離子自由基在SOD的保護(hù)作用下，不會(huì)破壞組織細(xì)胞的成分。文中鯉魚腎、腦組織中的抗羥自由基、抗超氧陰離子的活力都明顯地受到了DEHP抑制降低，可見抗氧化系統(tǒng)受損，機(jī)體內(nèi)消除超氧陰離子自由基、羥自由基的能力減弱。過多的超氧陰離子自由，使細(xì)胞產(chǎn)生遺傳突變，還能在 Fe3+或鐵的復(fù)合物催化下，生成對(duì)生物體毒性最強(qiáng)、危害最大的羥自由基，造成細(xì)胞內(nèi)脂類、糖類、蛋白質(zhì)、核酸等的氧化性損傷，細(xì)胞出現(xiàn)壞死現(xiàn)象。陳文婕等[34]、Pngribny等[35]認(rèn)為DEHP可能是一種過氧化物酶類的增值劑，能夠降低抗氧化酶類的活性，打破機(jī)體內(nèi)活性氧等自由基的動(dòng)態(tài)平衡，造成細(xì)胞和組織的毒性損傷。

3.2 DEHP對(duì)鯉魚腦的神經(jīng)毒性

AChE被稱為有毒物質(zhì)存在的生物標(biāo)志物[36]，一個(gè)經(jīng)典的毒理指標(biāo)[37-38]，是生物神經(jīng)傳導(dǎo)中的一種關(guān)鍵性的酶，劉曉宇等[22]認(rèn)為，可以魚腦乙酰膽堿酯酶作為指示酶或敏感材料。AChE主要存在于魚類的神經(jīng)系統(tǒng)，以腦中的活性為最高，朱小山等[39]指出，大多數(shù)硬骨魚腦組織中只有AChE的存在。它主要在膽堿能突觸間催化乙酰膽堿水解，終止神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)突觸后膜的興奮作用，防止乙酰膽堿在突觸后膜上的積累，保證神經(jīng)信號(hào)在生物體內(nèi)的正常傳遞?，F(xiàn)在的研究普遍認(rèn)為，AchE活性抑制超過20%，說明污染物暴露作用的存在，超過50%說明污染物對(duì)生物的生存有危害作用，文中鯉魚長(zhǎng)期暴露于不同濃度DEHP 20 d，各染毒組AChE酶活性分別抑制31.8%、38.1%、40.6%、43.5%，可見DEHP直接影響突觸間隙神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的降解，損害中樞神經(jīng)系統(tǒng)的膽堿能，產(chǎn)生神經(jīng)毒性。這與Guimaraes等[40]發(fā)現(xiàn)百敵蟲脅迫下羅非魚腦組織AChE活性被抑制的結(jié)果相同。與秦潔芳等[41]研究的鄰苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)脅迫下紅鰭笛鯛出現(xiàn)的AChE先受抑制后被誘導(dǎo)的結(jié)果不同。

NOS在機(jī)體各組織器官中廣泛存在，與精氨酸相互作用產(chǎn)生親脂性很強(qiáng)的NO，自由通過細(xì)胞膜，參與機(jī)體防御機(jī)制。本文中NOS酶活性在各染毒組均被誘導(dǎo)，且升高顯著?？赡苁荖OS作為CaN的底物，被CaN去磷酸化，升高了催化活性，同時(shí)增加NO生成量，機(jī)體的免疫力提高，呈現(xiàn)出一種機(jī)體對(duì)外來異物的免疫應(yīng)答反應(yīng)。王廣軍等[42]發(fā)現(xiàn)，斜帶石斑魚體內(nèi)注射副溶血弧菌后，NOS活力會(huì)被誘導(dǎo)升高。

CaN是目前唯一受Ca2+/鈣調(diào)素(CaM)調(diào)節(jié)的絲/蘇氨酸蛋白磷酸酶，從酵母到人其分子結(jié)構(gòu)高度保守。DEHP脅迫下，鯉魚腦內(nèi)CaN酶活性表現(xiàn)為先升高后降低。在20 mg·L-1，升高顯著；在80、160 mg·L-1，降低顯著?？赡苁堑蜐舛鹊腄EHP刺激下，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高，與CaM結(jié)合相應(yīng)也增多，很大程度上激活CaN，促進(jìn)T細(xì)胞增殖活化，增強(qiáng)機(jī)體免疫力。范曉梅等[43]證實(shí)，活化的CaN可通過去磷酸化胞漿中的T細(xì)胞核因子，調(diào)控正常心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)。高濃度的DEHP下調(diào)了腦中CaN活性，抑制了CaN mRNA和PCNA(細(xì)胞核中DNA聚合酶的附屬蛋白)的表達(dá)，表現(xiàn)為CaN受抑制，降低了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。王靜等[44]曾證明，二苯乙烯苷可通過抑制CaN 活性及其蛋白合成來降低SD大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖。

DEHP暴露可引起魚的抗氧化系統(tǒng)障礙和神經(jīng)機(jī)能紊亂，使魚的腎、腦組織中細(xì)胞受到不同程度的損傷。但DEHP對(duì)鯉魚免疫毒性和神經(jīng)毒性的影響機(jī)理，與助溶劑吐溫-80是否存在協(xié)同，還有待進(jìn)一步的研究。魚類腎臟中SOD、CAT、GSH-Px、抗羥自由基、抗超氧陰離子活性和MDA含量和腦組織中NOS、CaN、AChE、抗羥自由基、抗超氧陰離子活性變化可作為檢測(cè)水體中酞酸酯類物質(zhì)污染的毒理學(xué)指標(biāo)。

致謝：感謝山東省菏澤學(xué)院張貴生副教授、朱道玉教授在實(shí)驗(yàn)中給予的幫助。

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Effect of Diethyl Phthalate on the Biochemical Markers of Kidney and Brain inCyprinuscarpioLinnaeus

Wu Hongsong

Department of Life Science, Heze University, Heze 274015, China

Received 23 November 2015 accepted 26 January 2016

di-(2-ethylhexyl)phthalate; Cyprinus carpio Linnaeus; kidney; brain; biochemical marker; immunotoxicity; neurotoxicity

10.7524/AJE.1673-5897.20151123001

山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(ZR2010CM046)；山東省十二五動(dòng)物生理生化與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目(201106)

吳紅松(1977-)，女，講師，研究方向?yàn)閯?dòng)物生態(tài)毒理學(xué)，E-mail: hellowhs@163.com

2015-11-23 錄用日期：2016-01-26

1673-5897(2016)2-732-10

X171.5

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