張志山，朱樹人，安麗，張龍崗,李寧，董學颯，孟慶磊

(山東省淡水水產(chǎn)遺傳育種重點實驗室，山東省淡水漁業(yè)研究院，山東濟南250017 )

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丁香酚對翹嘴鲌的麻醉效果研究

張志山，朱樹人，安麗，張龍崗,李寧，董學颯，孟慶磊

(山東省淡水水產(chǎn)遺傳育種重點實驗室，山東省淡水漁業(yè)研究院，山東濟南250017 )

為了研究一種適合翹嘴鲌(Culteralburnus)測量、標記、親魚采卵、采血、活魚運輸?shù)仍囼灪蜕a(chǎn)操作的麻醉技術(shù)，在水溫24℃下進行了不同濃度丁香酚對翹嘴鲌麻醉以及復(fù)蘇效果的試驗。結(jié)果顯示，不同濃度的丁香酚對翹嘴鲌都有比較好的麻醉以及復(fù)蘇效果，20～120mg/L的丁香酚都能在5min中內(nèi)使翹嘴鲌進入麻醉期，并且都能在10min中內(nèi)完成麻醉魚的復(fù)蘇，復(fù)蘇率以及成活率均達到100%。麻醉和復(fù)蘇的時間除30、40、60mg/L 3組之間差異并不十分明顯外，其余的各組之間以及其他各組與30、40、60mg/L3組之間的差異均達到了顯著水平(P<0.05)。麻醉時間總體是隨著丁香酚的濃度上升而縮短，與濃度呈現(xiàn)較強的負相關(guān)。麻醉后的復(fù)蘇所需要的時間以20mg/L最短，隨濃度上升依次增加。30、40、60mg/L濃度的丁香酚均能達到3min麻醉5min蘇醒。同時,探討了在60mg/L濃度下麻醉的翹嘴鲌分別在空氣中暴露5、10、15、20、25min時間后對其復(fù)蘇的影響。結(jié)果表明，麻醉魚的復(fù)蘇率以及存活率均為100%，復(fù)蘇時間最長的為空氣暴露5min，隨暴露時間的增加，復(fù)蘇所需要的時間逐漸減短，差異并不是非常突出，暴露時間與復(fù)蘇時間并不是明顯的線性關(guān)系。由此可見，丁香酚是翹嘴鲌安全、有效的麻醉劑，40～60mg/L濃度的效果最佳，可滿足翹嘴鲌的常規(guī)實驗操作的需要。

翹嘴鲌(Culteralburnus)；丁香酚；麻醉；復(fù)蘇

翹嘴鲌(Culteralburnus)又名翹嘴巴、鲌魚、大白魚等,屬鯉形目(Cypriniformes)鯉科(Cyprinidae)鲌亞科(Culterinae)鲌屬(Culter)。它廣泛分布于我國長江中下游地區(qū)各水域，具有生長快、肉質(zhì)鮮美、蛋白質(zhì)含量高等特點，具有較高的經(jīng)濟價值和營養(yǎng)價值。隨著人工繁殖和養(yǎng)殖技術(shù)的逐步完善和推廣，翹嘴鲌的養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴大,已成為我國最為重要的淡水經(jīng)濟魚類之一。由于翹嘴鲌體型通常比較大(體重大約為2～2.5kg，最大的可重達15kg)，應(yīng)激反應(yīng)強烈，在進行人工繁殖、標記、測量和取血時很難操作，因此選擇一種安全、高效的魚用麻醉劑，對翹嘴鲌的人工操作十分必要。

丁香酚又稱丁香子酚，是一種無色或蒼黃色的油狀天然化合物，有類似丁香的香味，對魚有較好的麻醉作用。近幾年來，丁香酚已經(jīng)被澳大利亞、芬蘭、智利、新西蘭等很多國家和地區(qū)認定為沒有藥物殘留的合法水產(chǎn)麻醉劑[1]，并且被廣泛的應(yīng)用在親魚采卵、活魚采血、活魚運輸以及手術(shù)過程中的麻醉[2]。目前已有丁香酚對鯉魚[3]、鯽魚[4]、羅非魚[5]、大黃魚[6]、半滑舌鰨[7]、大西洋鮭[8]、斑馬魚等[9]麻醉效果的研究，結(jié)果都證明丁香酚是一種有效的魚類麻醉劑。在生理生化指標方面，張朝暉等[10]進行了丁香酚對黃臘鲹耗氧影響的研究，莊平等[11]進行了丁香酚對中華鱘幼魚耗氧率與排氨率影響的研究，馮廣朋等[12]進行了丁香酚對西伯利亞鱘稚魚耗氧率與幼魚血液生化指標的影響研究，結(jié)果表明丁香酚麻醉能夠明顯降低魚類耗氧率和排氨率，對血液生化的影響相對較小，適合魚類采卵、運輸、手術(shù)以及取血等操作的要求。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗所用翹嘴鲌取自山東省淡水漁業(yè)研究院的戶外池塘，均為野生樣本。平均體長約10cm，體重約30g，健康無病，體表鱗片無明顯脫落。

試驗所用丁香酚為榮祥齒科材料有限公司產(chǎn)品，含丁香酚98%以上，相對濃度為1.05～1.08g/mL，使用前按丁香酚與無水乙醇1︰10的體積比配制成母液。預(yù)試驗與正式試驗所用不同濃度的丁香酚均為向水體中添加相應(yīng)劑量的母液配制而成。以向20L水體中加入20mL母液配制成濃度為100mg/L的試驗用麻醉濃度為標準進行換算后再行配制，配制完后于4℃冰箱中避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗用魚的預(yù)處理

試驗所用翹嘴鲌暫養(yǎng)于山東省淡水漁業(yè)研究院溫室的塑鋼池中，試驗前24h停止投喂，并不斷地向水池中充氣以保證水體中的氧氣充足。試驗魚的麻醉以及復(fù)蘇均在塑料箱中進行，實驗水體均為20L，水溫控制在24℃。試驗后將翹嘴鲌按照不同的麻醉濃度處理組分別放入500L塑鋼桶中暫養(yǎng)，繼續(xù)觀察72h，統(tǒng)計試驗用魚的存活率。

1.2.2 麻醉程度和復(fù)蘇過程的分期

設(shè)計10、30、60mg/L的丁香酚濃度梯度以及1.2mg/L的無水乙醇溶液進行對比試驗，每組用魚5尾，觀察各組麻醉和復(fù)蘇過程中的行為特征，并進行界定、分期。

1.2.3 不同濃度丁香酚的麻醉效果試驗

配制20、30、40、60、80、100、120mg/L濃度梯度的丁香酚進行麻醉效果試驗，每組用魚5尾。當魚體麻醉程度達到麻醉期(A3)時，記錄下秒表顯示的入麻時間，并立即將入麻魚轉(zhuǎn)移到清水中進行復(fù)蘇，記錄秒表顯示的實驗魚達到完全復(fù)蘇期(R2)所耗時間。

1.2.4 空氣暴露時間對復(fù)蘇用時的影響

為了研究麻醉后試驗魚離水操作的可行性，取25尾翹嘴鲌以濃度為60mg/L丁香酚進行麻醉，待所有個體全體麻醉后，將試驗魚擺放在濕紗布上分別在空氣中暴露5、10、15、20、25min，然后轉(zhuǎn)入清水中復(fù)蘇，記錄復(fù)蘇達到完全復(fù)蘇期(R2)時所用時間，每組用魚5尾。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗所得數(shù)據(jù)以平均值±標準差的表示形式進行表示，使用SPSS 17.0軟件進行單因素方差分析，當顯著性水平小于0.05的時候，使用LSD多重比較法來檢驗組間差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 麻醉程度與復(fù)蘇過程的分期

參照孟慶磊等[13]的麻醉分期，根據(jù)麻醉過程的行為特征將整個麻醉過程拆分為A1(鎮(zhèn)靜期)、A2(輕度麻醉期)和A3(麻醉期)3個不同時期。剛進入麻醉水體的翹嘴鲌?zhí)幱谡Ｆ?，此時翹嘴鲌各項身體狀況正常，能夠正常呼吸、游動。一段時間后會出現(xiàn)觸覺略失，表現(xiàn)為對外界刺激反應(yīng)緩慢，同時呼吸頻率減慢并努力將頭伸出水外，此時的翹嘴鲌進入鎮(zhèn)靜期。持續(xù)下去試驗魚身體會發(fā)生倒翻，且呼吸、尾部擺動均不規(guī)律，這個時期定義為輕度麻醉期。當翹嘴鲌鰓蓋張合停止、尾部擺動停止、觸覺完全喪失，表明已進入麻醉期。不同時期的行為特征見表1。

根據(jù)預(yù)試驗復(fù)蘇過程中翹嘴鲌的行為特征可將復(fù)蘇過程拆分為R1(部分復(fù)蘇期)和R2(完全復(fù)蘇期)2個時期，2個時期的行為特征詳見表2。

表1 翹嘴鲌麻醉程度的分期

表2 翹嘴鲌復(fù)蘇過程的分期

復(fù)蘇過程分期 行為特征 R1(部分復(fù)蘇期)身體倒翻,觸覺部分恢復(fù),鰓蓋緩慢張合,尾部開始擺動。 R2(完全復(fù)蘇期)身體恢復(fù)平衡,觸覺恢復(fù),鰓蓋張合恢復(fù)正常,游動恢復(fù)。

2.2 乙醇對丁香酚麻醉效果的影響

由于丁香酚屬于油性液體，與水相容性差，因此考慮到實際生產(chǎn)操作的方便可行，需要無水乙醇作為媒介[14]?？紤]到乙醇本身有一定的麻醉作用，可能對丁香油的麻醉效果及麻醉結(jié)果有影響，本試驗設(shè)立了1.2mg/L的無水乙醇溶液(約120mg/L的丁香酚試驗組中的無水乙醇含量)進行對比試驗。結(jié)果顯示，加入1.2mg/L的無水乙醇溶液組中的5尾翹嘴鲌均未出現(xiàn)麻醉或者輕度麻醉現(xiàn)象，由此可見母液中無水乙醇的存在對丁香酚的麻醉效果及麻醉結(jié)果并無明顯的影響。

2.3 不同濃度丁香酚對翹嘴鲌麻醉效果的影響

如表3所示，當丁香酚的濃度在20～120mg/L之間時，翹嘴鲌經(jīng)過一段時間后都能進入麻醉期(A3)，并且經(jīng)不同濃度丁香酚麻醉過的翹嘴鲌都能夠在水體中達到100%的復(fù)蘇率，飼養(yǎng)72h后存活率達到100%。翹嘴鲌的入麻時間隨著丁香酚的濃度上升而呈現(xiàn)遞減，當丁香酚的濃度在20mg/L時平均麻醉時間最長，達到平均348.60s；當丁香酚的濃度升為40mg/L以上時，翹嘴鲌進入麻醉期(A3)的平均時間有逐漸減少的趨勢，這種趨勢一直延續(xù)到丁香酚的濃度達到120mg/L，這時候翹嘴鲌的平均入麻時間降低至50.40s，達到最低值。多重比較顯示，不同的濃度組之間翹嘴鲌需要的入麻時間，除了60mg/L與40、80、100mg/L濃度之間的差異不顯著以及80、100、120mg/L 3組不同濃度之間的差異也不顯著外，其他各個不同丁香酚濃度組之間的差異都達到顯著水平(P<0.05)。

表3 翹嘴鲌在不同濃度丁香酚的入麻以及復(fù)蘇時間

丁香酚濃度/(mg/L)麻醉所用時間/s范圍均值復(fù)蘇所用時間/s范圍均值復(fù)蘇率/%72h存活率/%20231～510348.60±50.73a50～225128.40±31.76b10010030140～347243.00±37.99b91～270167.80±35.04ab1001004080～245166.60±33.17bc84～290179.80±38.82c1001006066～200128.80±24.53d100～189132.80±15.35ad1001008051～16581.20±21.15cd125～412262.00±52.18a10010010035～11765.60±16.18c135～476285.20±60.23d10010012027～8950.40±10.93ac131～483278.60±64.28bc100100

注：同列數(shù)據(jù)不同上標字母表示組間差異顯著(P<0.05)。

2.4 不同濃度丁香酚對入麻翹嘴鲌復(fù)蘇時間的影響

試驗結(jié)果表明，當丁香酚的濃度在20～120mg/L之間時，入麻的翹嘴鲌都能在水體中復(fù)蘇。同時，翹嘴鲌所需要的復(fù)蘇時間隨著丁香酚的濃度增加而逐漸增長。其中，當丁香酚的濃度在20mg/L時翹嘴鲌所需要的復(fù)蘇時間最短，僅為128.40s；當丁香酚的濃度上升到120mg/L時，入麻的翹嘴鲌所需要的平均復(fù)蘇時間達到最大值，為278.60s。經(jīng)多重比較，不同丁香酚濃度對入麻翹嘴鲌的復(fù)蘇平均時間各組之間差異顯著(P<0.05)。

2.5 空氣中暴露時間對翹嘴鲌復(fù)蘇用時的影響

將用60mg/L的丁香酚麻醉的實驗魚暴露在空氣中，結(jié)果顯示：在空氣中暴露5min左右，就會有個別翹嘴鲌個體的鰓蓋恢復(fù)正常的張合頻率；當暴露時間達到10min左右時，絕大部分的入麻翹嘴鲌個體鰓蓋恢復(fù)正常的張合頻率；當暴露時間達到15min左右時，個別入麻的翹嘴鲌的尾部開始翹起、擺動，隨時間的延長擺動和翹起的幅度及次數(shù)逐漸增加；當暴露時間達到25min以上時，大部分入麻的翹嘴鲌尾部開始有比較緩慢但有一定規(guī)律的擺動。

如表4所示，入麻的翹嘴鲌分別在空氣中暴露的時間為5、10、15、20、25min，然后放回到水體中都能夠達到100%的復(fù)蘇率以及成活率。在水體中所需要的平均復(fù)蘇時間以空氣中暴露5min為最長，達到302.60s，而當暴露時間升為25min時，平均復(fù)蘇所需要的時間降為195.60s，達到最低值。同時入麻的翹嘴鲌隨著在空氣中暴露時間的增加在清水中復(fù)蘇所需要的平均時間逐漸減少(P<0.05)。多重比較的結(jié)果顯示，空氣中暴露時間為5min組與其余組的差異達到了顯著水平，其他各組之間的差異性則不顯著。

表4 空氣暴露對翹嘴鲌復(fù)蘇的影響

空氣中暴露時間/min復(fù)蘇所用時間/s范圍均值復(fù)蘇率/%72h存活率/%5255～359302.60±17.96a10010010229～312263.80±15.28c10010015201～331252.60±21.87ab10010020174～261222.20±16.65b10010025127～277195.60±26.13c100100

3 討論

3.1 不同濃度丁香酚對翹嘴鲌所需麻醉時間的影響

在已知的魚類麻醉試驗報道中，除了澳洲長鰭鰻[15]等個別魚類之外，絕大多數(shù)魚類的麻醉時間都是隨著麻醉劑濃度增加而逐漸縮短，本研究中丁香酚對翹嘴鲌的麻醉也不例外。當丁香酚的濃度在10mg/L時，翹嘴鲌的入麻是個極其漫長的過程，甚至可達數(shù)小時；當丁香酚的濃度升至20mg/L時，翹嘴鲌所需要的入麻時間大幅減少，縮短至數(shù)分鐘；隨著丁香酚的濃度逐漸升至120mg/L翹嘴鲌所需要的平均入麻時間緩慢減少，以至于降至1min之內(nèi)。由此可見，麻醉劑的濃度對翹嘴鲌麻醉時間的影響顯著。

3.2 不同濃度丁香酚對翹嘴鲌復(fù)蘇所需時間的影響

在已有的魚類麻醉試驗報道中，絕大多數(shù)魚類麻醉后復(fù)蘇所需要的時間隨著麻醉劑濃度的增加而逐漸增長，本研究中翹嘴鲌也不例外，丁香酚濃度在20～120mg/L范圍內(nèi)，翹嘴鲌成魚的平均復(fù)蘇所需時間隨著丁香酚濃度的增加而以較小幅度逐漸增加(P<0.05)。

3.3 空氣中暴露時間對翹嘴鲌復(fù)蘇時間的影響

研究空氣中入麻的翹嘴鲌暴露時間對復(fù)蘇所需要時間長短的影響，對于魚類離水進行活體采血、采精、采卵等一系列的實驗操作具有一定的指導(dǎo)意義。本研究結(jié)果表明，用60mg/L的丁香酚將翹嘴鲌麻醉后，在5～25min時間的范圍內(nèi)，隨著入麻翹嘴鲌在空氣中暴露時間的延長，試驗魚體入水后復(fù)蘇所需要的時間總體上呈現(xiàn)逐漸減少的趨勢(P<0.05)。其原因有可能是入麻試驗魚隨著空氣中暴露時間的延長，魚體進行新陳代謝會逐漸分解體內(nèi)麻醉劑，從而導(dǎo)致在空氣中暴露期間試驗魚實際上已經(jīng)進入復(fù)蘇的R1期或者麻醉A2期，這也就是為什么能夠快速復(fù)蘇的原因。另外，麻醉的翹嘴鲌后在空氣中暴露時間長達25min后，轉(zhuǎn)入水體后復(fù)蘇率仍達100%，72h內(nèi)存活率100%，這表明丁香酚作為麻醉劑能夠滿足常規(guī)魚類活體離水實驗操作的要求。

3.4 丁香酚麻醉翹嘴鲌的最佳濃度

對于麻醉劑有效濃度的定義，因麻醉劑種類、魚的種類和使用用途而異，帶有一定的主觀性。Marking等[7]認為，理想的麻醉濃度需要同時滿足2個條件：(1)3min之內(nèi)麻醉；(2)5min之內(nèi)蘇醒。本研究結(jié)果表明，丁香酚對翹嘴鲌來說是一種安全、有效的麻醉劑，其安全邊界較寬，20～120mg/L的丁香酚都可以使翹嘴鲌成魚達到麻醉A3期，并且可以完全復(fù)蘇；40～60mg/L濃度的丁香酚都可以在3min內(nèi)使其麻醉，麻醉后翹嘴鲌可在5min內(nèi)完成復(fù)蘇，完全可以滿足常規(guī)實驗操作對翹嘴鲌麻醉的需要。

3.5 不同水溫對麻醉效果的影響

水溫是影響麻醉劑作用效果的一個重要環(huán)境因素。隨著溫度的升高，魚體代謝旺盛，心跳和呼吸加快，麻醉藥液經(jīng)鰓絲滲透的速率亦加大，在相同的麻醉劑含量下，魚體達到各麻醉階段的時間均縮短[16]。在低水溫時，魚體對麻醉藥物的吸收率低，麻醉所需劑量高或者浸泡時間長。本研究為了避免水溫對實驗產(chǎn)生的不良影響，所有試驗水體的溫度都控制在24℃。后續(xù)研究將進一步探討不同水溫條件下丁香酚對翹嘴鲌進行麻醉以及復(fù)蘇所需時間。

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2016-07-11

山東省農(nóng)業(yè)良種工程項目；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系魚類創(chuàng)新團隊項目(SDAIT-12-01)。

張志山(1981-)，男，助理研究員，主要從事魚類遺傳育種研究。通信作者：孟慶磊，qingleimeng@126.com。

Q959.46+8

A

1673-1409(2016)27-0039-05

[引著格式]張志山，朱樹人，安麗，等.丁香酚對翹嘴鲌的麻醉效果研究[J].長江大學學報(自科版)，2016，13(27)：39～43.