李嬋,吳鐵軍,張麗娜,鄒秀麗,亢翠翠

(聊城市人民醫(yī)院，山東聊城 252000)

?

重度子癇前期患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群分布、HLA-DR陽性白細(xì)胞百分比變化

李嬋,吳鐵軍,張麗娜,鄒秀麗,亢翠翠

(聊城市人民醫(yī)院，山東聊城 252000)

目的 觀察重度子癇前期患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群分布、人類組織相容性抗原DR(HLA-DR)陽性白細(xì)胞百分比變化。方法 將30例重度子癇前期患者作為觀察組、30例正常妊娠婦女作為正常妊娠組、18例健康未孕婦女作為對照組，比較三組外周血CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比例及HLA-DR陽性白細(xì)胞百分比。結(jié)果 觀察組、正常妊娠組、對照組外周血CD4+T淋巴細(xì)胞比例比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。觀察組、正常妊娠組、對照組外周血CD8+T淋巴細(xì)胞比例分別為32.1%±7.4%、26.9%±7.7%、25.4%±7.6%，觀察組與正常妊娠組、對照組相比，P均<0.01。觀察組、正常妊娠組、對照組HLA-DR陽性白細(xì)胞百分比分別為43.7%±12.7%、58.3%±13.9%、70.41%±11.3%，觀察組與正常妊娠組、對照組相比，P均<0.01。結(jié)論 重度子癇前期患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞比例未見明顯變化，CD8+T淋巴細(xì)胞比例升高，HLA-DR陽性白細(xì)胞百分比降低。

妊娠并發(fā)癥；重度子癇前期；免疫功能；T淋巴細(xì)胞；人類組織相容性抗原

子癇前期/子癇屬于妊娠期高血壓疾病的范疇，多于孕期20周以后出現(xiàn)，以高血壓和蛋白尿為主要特征，也常累及肝、腎和胎盤等重要器官，是孕產(chǎn)婦及圍生兒發(fā)病及死亡的重要原因[1]，我國的發(fā)病率為2%～6%[2]，且隨著我國二胎政策的放開，子癇致孕產(chǎn)婦病死率持續(xù)升高[3,4]。子癇前期的病因和發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，比較公認(rèn)的病因有胎盤淺著床和氧化應(yīng)激[5,6]。目前的研究集中在免疫因素與子癇前期/子癇的相互關(guān)系上，發(fā)現(xiàn)T淋巴細(xì)胞亞群與人類組織相容性抗原DR(HLA-DR)與子癇前期發(fā)生發(fā)展有關(guān)[7,8]。因此，本研究觀察了重度子癇前期患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群分布、HLA-DR陽性白細(xì)胞百分比變化，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 將2014年3月～2015年12月入住聊城市人民醫(yī)院ICU的重度子癇前期患者30例作為觀察組，患者年齡(29.6±7.0)歲，孕(33.9±4.5)周。重度子癇前期診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2002年美國婦產(chǎn)科醫(yī)師學(xué)會(ACOG)公布的妊娠期高血壓疾病的診斷指南標(biāo)準(zhǔn)[9]。以同期入院的30例正常妊娠婦女作為正常妊娠組，年齡(29.2±5.3)歲，孕(37.1±3.9)周；同時選擇18例健康未孕婦女作為對照組，年齡(26.8±2.6)歲；兩組婦女均無產(chǎn)科并發(fā)癥，無高血壓、糖尿病、心臟病、腎功能不全，近期未服用任何藥物，無感染，無過敏性疾病，無自身免疫疾病，無腫瘤。三組年齡無統(tǒng)計學(xué)差異。觀察組與正常妊娠組均以剖宮產(chǎn)結(jié)束妊娠。本研究經(jīng)本院臨床倫理委員會批準(zhǔn)，所有入組對象均簽署知情同意書。

1.2 外周血T淋巴細(xì)胞亞群比例、HLA-DR陽性白細(xì)胞百分比檢測 所有入組研究對象采集標(biāo)本前均未服用免疫抑制藥物，于清晨8點消毒后于肘正中靜脈采血2 mL并置于肝素抗凝管，所取血樣均于4 h內(nèi)進(jìn)行檢測。取抗凝全血100 μL加入CD3-FITC、CD4-FITC和CD8-PE單克隆熒光抗體各10 μL混勻后避光常溫染色15 min，裂解紅細(xì)胞后離心棄上清，PBS重懸細(xì)胞離心棄上清后加鞘液上機(jī)檢測，計算CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比例。取肝素抗凝血100 μL加入CD14-PE 10 μL和HLA-DR-FITC 10 μL避光常溫染色15 min，裂解紅細(xì)胞后離心棄上清，PBS重懸細(xì)胞離心棄上清后加鞘液上機(jī)檢測，計算外周血HLA-DR陽性白細(xì)胞百分比。

2 結(jié)果

三組外周血T淋巴細(xì)胞亞群分布比較見表1。觀察組、正常妊娠組、對照組HLA-DR陽性白細(xì)胞百分比分別為43.7%±12.7%、58.3%±13.9%、70.41%±11.3%，觀察組與正常妊娠組、對照組相比，P均<0.01。

表1 三組外周血T淋巴細(xì)胞亞群分布比較±s)

注：與正常妊娠組、對照組相比，▲P<0.05，★P<0.01。

3 討論

正常妊娠時，母體高度介導(dǎo)免疫耐受，母體外周血中淋巴細(xì)胞表達(dá)減少[10,11]。T淋巴細(xì)胞亞群是人體最重要的免疫防御系統(tǒng)組成部分之一，CD3+是T淋巴細(xì)胞表面表達(dá)的分化抗原，CD3+T細(xì)胞包括CD4+T淋巴細(xì)胞亞群(輔助性T淋巴細(xì)胞亞群)和CD8+T淋巴細(xì)胞亞群(抑制性T淋巴細(xì)胞亞群)。CD4+T淋巴細(xì)胞主要負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)活性,通過其分泌的淋巴因子增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答過程，誘導(dǎo)輔助性B細(xì)胞、殺傷性T淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞共同發(fā)揮作用。CD8+T淋巴細(xì)胞主要抑制B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，抑制細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的殺傷功能。正常機(jī)體中，CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞處于穩(wěn)定的動態(tài)平衡，維持機(jī)體的免疫穩(wěn)態(tài)，這種穩(wěn)態(tài)被打破將會導(dǎo)致各種免疫損傷和免疫相關(guān)疾病。大量研究[12,13]證實，T淋巴細(xì)胞亞群平衡偏向于適度免疫抑制狀態(tài)對維持正常妊娠期母胎界面免疫平衡具有重要意義。本研究結(jié)果顯示，重度子癇前期孕婦CD3+T淋巴細(xì)胞比例與正常妊娠孕婦相比無明顯差異，CD4+T淋巴細(xì)胞比例較正常妊娠孕婦稍下降，CD8+T淋巴細(xì)胞比例較正常妊娠孕婦明顯升高，與以往部分研究[14～16]結(jié)果一致，但與秦彩娟[17]、鐘曉紅等[18]的研究結(jié)果有差異。正常妊娠女性的CD8+T淋巴細(xì)胞占優(yōu)勢，使母體免疫系統(tǒng)被輕微抑制，子癇前期CD8+T淋巴細(xì)胞比例顯著增高、CD4+/CD8+降低，提示子癇前期的發(fā)病可能與T淋巴細(xì)胞亞群的平衡失調(diào)有關(guān)。CD4+/CD8+顯著下降異常激活B細(xì)胞,刺激體液免疫產(chǎn)生IgG等形成膜攻擊復(fù)合物,使補(bǔ)體系統(tǒng)處于激活狀態(tài)，裂解產(chǎn)物如C3a、C5a等增加，造成母體免疫平衡紊亂，對異體抗原的胎兒排斥反應(yīng)增強(qiáng)，防護(hù)反應(yīng)減弱。在大量異常細(xì)胞因子的作用下，母體血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生損傷，表現(xiàn)為高血壓、蛋白尿等。

人類白細(xì)胞抗原(HLA)是由HLA基因復(fù)合物所編碼的一組調(diào)理特殊反應(yīng)和異體排斥高多態(tài)性基因復(fù)合體，是反映機(jī)體免疫功能的敏感指標(biāo)，抗原提呈細(xì)胞(APC)將異體抗原提呈給CD4+T淋巴細(xì)胞，表達(dá)于單核細(xì)胞、活化T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等細(xì)胞的表面，通過不同機(jī)制啟動機(jī)體適應(yīng)性免疫應(yīng)答。妊娠是成功的“半自體”移植，從受精起5周左右即開始表達(dá)HLA抗原，胚胎20周免疫系統(tǒng)形成，通過合成免疫球蛋白發(fā)揮細(xì)胞免疫功能，誘導(dǎo)母體與胎兒之間產(chǎn)生免疫耐受，使胎兒躲避母體B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的免疫排斥，阻斷母胎之間的淋巴細(xì)胞通路，進(jìn)而阻斷淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用和移植物抗宿主反應(yīng)，從而維持正常妊娠。HLA-DR表達(dá)率過低會引發(fā)免疫功能紊亂，更甚者發(fā)生免疫麻痹。正常妊娠時HLA-DR適當(dāng)表達(dá)，在胎盤著床過程中增強(qiáng)滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤作用，誘發(fā)免疫耐受，以利于滋養(yǎng)細(xì)胞免受母體的識別及攻擊，完成血管重塑。而子癇前期孕婦不能利用封閉抗體的保護(hù)作用，易遭受細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的攻擊，使胎兒遭受排斥[19]。HLA的表達(dá)不良參與了子癇患者的胎盤形成障礙，引起子宮螺旋小動脈血管重塑異常，導(dǎo)致胎盤缺血缺氧。故HLA-DR是與子癇前期發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的因素之一。Ogge等[20]研究表明子癇前期外周血單核細(xì)胞HLA-DR的水平與健康孕婦無明顯差異。呂連崢等[21]研究顯示子癇前期孕婦中間型單核細(xì)胞HLA-DR陽性表達(dá)率顯著高于健康孕婦。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，重度子癇前期患者外周血中HLA-DR陽性白細(xì)胞百分比顯著降低，說明子癇前期時母體免疫耐受能力下降，在母胎界面產(chǎn)生炎癥反應(yīng)造成病理妊娠。滋養(yǎng)細(xì)胞耐受免疫識別及免疫攻擊的能力減弱，從而異常浸潤子宮螺旋動脈，造成胎盤淺植入，引起子癇的一系列病理生理變化。以往的研究多集中在母胎間HLA-D、HLA-G抗原共享率與子癇前期發(fā)生發(fā)展的關(guān)系上，對子癇前期患者單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)情況的研究較少，我們推測造成HLA-DR水平低下的原因主要為入選研究對象病情較重，且一部分研究對象入ICU前已發(fā)生多器官功能障礙綜合征，體內(nèi)免疫平衡已嚴(yán)重失衡。

綜上所述，重度子癇前期患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞比例未見明顯變化，CD8+T淋巴細(xì)胞比例升高，HLA-DR占白細(xì)胞百分比降低。

[1] Lindheimer MD, Taler SJ, Cunningham FG. ASH position paper: hypertension in pregnancy[J]. J Clin Hypertens (Greenwich), 2009,11(4):214-225.

[2] 喬寵,楊小梅,林其德.子癇前期的流行病學(xué)研究進(jìn)展[J].中國計劃生育和婦產(chǎn)科,2013,32(6):5-8.

[3] 丁紅,周力學(xué),張建平,等.三十年子癇的變化趨勢[J].中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志,2003,6(1):10-12.

[4] Lu L, Qu Y, Tang J, et al. Risk factors associated with late preterm births in the underdeveloped region of China: A cohort study and systematic review[J]. Taiwan J Obstet Gynecol, 2015,54(6):647-653.

[5] Lamarca B. The role of immune activation in contributing to vascular dysfunction and the pathophysiology of hypertension during preeclampsia[J]. Minerva Ginecol, 2010,62(2):105-200.

[6] 羅欣,漆洪波.子癇前期發(fā)病機(jī)制分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J].中國實用婦科與產(chǎn)科雜志,2012,28(4):309-311.

[7] 林莉,熊慶,李幼平,等.人類白細(xì)胞抗原D族與子癇前期/子癇相關(guān)性研究的系統(tǒng)評價[J].中國循證醫(yī)學(xué)雜志,2006,6(2):117-123.

[8] Cornelius DC, Amaral LM, Harmon A, et al. An increased population of regulatory T cells improves the pathophysiology of placental ischemia in a rat model of preeclampsia[J]. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol, 2015,309(8):884-891.

[9] ACOG practice bulletin. Diagnosis and management of preeclampsia and eclampsia[J]. Obstet Gynecol, 2002,99(1):159-167.

[10] 李穎豐,周華輝.妊娠高血壓綜合征孕婦血清C反應(yīng)蛋白、胱抑素C水平的變化及意義[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011,20(2):156-157.

[11] 劉慧琳,劉桂花,田兆興.膿毒癥患者血中淋巴細(xì)胞水平的變化[J].中華危重病急救醫(yī)學(xué),2014,26(3):148-152.

[12] 張建平,陳立斌,劉穎琳,等.妊娠中晚期外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的觀察[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2002,14(2):125-127.

[13] 王秋偉,許培箴,虞斌,等.妊娠高血壓綜合征患者T淋巴細(xì)胞亞群測定的臨床意義[J].實用臨床醫(yī)藥雜志,2003,7(4):367-369.

[14] 孫黎,劉春霞,程建貞,等.妊高征患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的測定[J].張家口醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2000,17(1):13-14.

[15] 周東霞.妊高征患者血清瘦素水平與外周血B細(xì)胞和T細(xì)胞亞群檢測的臨床意義[J].放射免疫學(xué)雜志,2007,20(6):519-520.

[16] Darmochwal-Kolarz D, Saito S, Rolinski J, et al. Activated T lymphocytes in pre-eclampsia[J]. Am J Reprod Immunol, 2007,58(1):39-45.

[17] 秦彩娟.妊娠高血壓綜合征D-二聚體、T淋巴細(xì)胞亞群與C反應(yīng)蛋白的相關(guān)性研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2012,9(17):22-25.

[18] 鐘曉紅.妊娠高血壓綜合征孕婦圍產(chǎn)期血漿D-二聚體、T淋巴細(xì)胞亞群與C-反應(yīng)蛋白的動態(tài)變化及其關(guān)系研究[J].實用預(yù)防醫(yī)學(xué),2015,22(7):866-868.

[19] Biggar RJ, Poulsen G, Ng J, et al. HLA antigen sharing between mother and fetus as a risk factor for eclampsia and preeclampsia[J]. Hum Immunol, 2010,71(3):263-267.

[20] Ogge G, Romero R, Chaiworapongsa T, et al. Leukocytes of pregnant women with small-for-gestational age neonates have a different phenotypic and metabolic activity from those of women with preeclampsia[J]. J Matern Fetal Neonatal Med, 2010,23(6):476-487.

[21] 呂連崢,藺昕,錢雷,等.子癇前期外周血中間型單核細(xì)胞HLA-DR的表達(dá)及其臨床意義[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2015,25(6):482-490.

山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計劃項目(2015WS0390)。

吳鐵軍(E-mail: tiejunwu@hotmail.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.35.027

R714.25

B

1002-266X(2016)35-0080-03

2016-06-12)