梁國霞傅洪拓，喬 慧白鴻坤張文宜李法君，蔣速飛熊貽偉龔永生金舒博吳 滟

（1. 南京農(nóng)業(yè)大學無錫漁業(yè)學院， 無錫 214081； 2. 中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心， 農(nóng)業(yè)部淡水漁業(yè)和種質(zhì)資源利用重點實驗室， 無錫 214081； 3. 濰坊科技學院， 壽光 262700）

青蝦精（卵）母細胞特有因子Gtsf1基因的克隆及其時空表達分析

梁國霞1傅洪拓1，2喬 慧2白鴻坤2張文宜2李法君1，3蔣速飛2熊貽偉2龔永生2金舒博2吳 滟2

（1. 南京農(nóng)業(yè)大學無錫漁業(yè)學院， 無錫 214081； 2. 中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心， 農(nóng)業(yè)部淡水漁業(yè)和種質(zhì)資源利用重點實驗室， 無錫 214081； 3. 濰坊科技學院， 壽光 262700）

為了研究青蝦性早熟現(xiàn)象， 在實驗室構(gòu)建的青蝦精卵巢表達譜中發(fā)現(xiàn)一個Gtsf1同源EST序列， 采用RACE技術克隆獲得青蝦Gtsf1基因cDNA序列長349 bp （GenBank登錄號: KR349325）， 開放閱讀框（Open reading frame， ORF）為240 bp， 編碼79個氨基酸。生物信息學分析預測青蝦Gtsf1蛋白包含1個zf-U11-48K結(jié)構(gòu)域，并發(fā)現(xiàn)該蛋白無信號肽， 屬于非分泌蛋白。系統(tǒng)進化樹分析表明青蝦Gtsf1蛋白與昆蟲綱的蝽類（Lygus hesperus）親緣關系最近。組織表達分析結(jié)果顯示， Gtsf1基因在性腺中表達很高， 特別是在卵巢中表達最高（為精巢的6倍）， 其他組織中表達極低。卵巢不同發(fā)育時期表達結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 發(fā)育初期Gtsf1基因表達水平較低， 隨著卵巢的發(fā)育， 該基因的表達水平呈現(xiàn)顯著上升趨勢（P＜0.05）， 在成熟期達到最高峰， 在消退期顯著下降并恢復到較低水平（P＜0.05）。胚胎和胚后不同發(fā)育時期結(jié)果顯示， Gtsf1基因在胚胎發(fā)育早期表達水平較高， 囊胚期時顯著升高并達到峰值（P＜0.05）， 從原腸期顯著下降直至變態(tài)后第10天該基因表達水平維持較低水平（P＜0.05）。以上研究結(jié)果表明Gtsf1基因與生殖密切相關， 特別是在卵巢發(fā)育過程中有關， 且呈正相關趨勢。同時， Gstf1基因可能主要參與青蝦胚胎早期發(fā)育的調(diào)控。研究首次在甲殼動物中克隆獲得Gtsf1基因， 并分析Gtsf1基因在青蝦中的時空表達模式， 研究結(jié)果將為進一步研究青蝦Gtsf1基因功能和青蝦性腺發(fā)育調(diào)控規(guī)律奠定基礎， 也為其他甲殼動物的生殖相關研究提供參考。

青蝦； Gtsf1； 卵巢發(fā)育； 性腺； 時空表達

Gametocyte-specific factor 1 （Gtsf1）基因是UPF224基因家族中的重要一員［1］， 在哺乳動物的小鼠（Mus musculus）、昆蟲中的果蠅（Drosophila melanogaster）中研究發(fā)現(xiàn)， 該基因與性腺和生殖細胞的生成密切相關［2，3］。Gtsf1基因具有U11-48K鋅指結(jié)構(gòu)域， 在進化中具有高保守性［4，5］。最新研究報道發(fā)現(xiàn)Gtsf1是PIWI蛋白復合物的重要組成部分［3，6］， PIWI蛋白是動物生殖細胞發(fā)育分化所必需的［7—9］， 該蛋白形成的復合物可通過控制轉(zhuǎn)座子元件的活動， 維持生殖細胞基因組穩(wěn)定性及完整性，從而調(diào)控性腺的正常發(fā)育。目前有關該基因的研究報道較少， 主要集中在小鼠和果蠅的生殖細胞的生長發(fā)育的研究， 以及介導Piwi蛋白參與抑制反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的功能研究［1—3］， 在其他物種未見相關報道。

青蝦， 學名日本沼蝦（Macrobrachium nipponense）， 隸屬于十足目（Decapoda）， 長臂蝦科（Palaemonidae）， 沼蝦屬 （Macrobrachium）， 是我國重要的淡水養(yǎng)殖經(jīng)濟蝦類［10］。但青蝦大規(guī)模的養(yǎng)殖中普遍出現(xiàn)了性早熟現(xiàn)象， 養(yǎng)殖過程中多代同堂， 嚴重制約了青蝦養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前有關青蝦性腺發(fā)育相關基因研究較多， 如gonad-inhibiting hormone［11］、gonadotropin-releasing hormone［12］、SUMO-conjugating enzyme［13］、MnvWD-Kazal［14］等。本課題組先后構(gòu)建了青蝦精巢文庫和精卵巢表達譜， 篩選了大量生殖相關基因并對部分基因進行了深入研究［15，16］。作者在本實驗室構(gòu)建的青蝦精卵巢表達譜中發(fā)現(xiàn)一個Gtsf1同源EST序列， 并發(fā)現(xiàn)其在精卵巢中的表達存在極顯著差異， 因此本文擬采用基因克隆和熒光定量表達方法研究Gtsf1基因在青蝦不同組織、卵巢不同發(fā)育時期以及胚胎和胚后發(fā)育過程中的作用， 以期為進一步研究青蝦Gtsf1基因功能和青蝦性腺發(fā)育調(diào)控規(guī)律奠定基礎，也為其他甲殼動物的生殖相關研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗用蝦

本實驗青蝦取自太湖湖區(qū)（120°13′44″E，31°28′22″N）， 挑選規(guī)格齊整青蝦約（4.0±0.5） g在室內(nèi)聚乙烯塑料白色桶（500 L）充氣暫養(yǎng)， 每天早晚定時投喂螺螄及配合飼料， 投喂量約占體重的3%—5%， 每兩天換水一次， 換水量為40%—50%，暫養(yǎng)一周。

1.2 實驗試劑

RNA提取試劑有DNA I Rnase Free和RNAiso Plus； 反轉(zhuǎn)錄試劑盒、5′-Full RACE 及3′-Full RACE試劑盒； PCR所用試劑: DL-2000 DNA Marker、LA TaqDNA聚合酶、dNTP 等。以上試劑（盒）均購自寶生物（TaKaRa Bio Inc. Japan）。所用到的試劑還有DH5α感受態(tài)細胞、pMD18-T載體， 購自全式金公司。實驗中用到的引物均由鉑尚生物技術（上海）有限公司合成； 自配試劑按照張文宜［17］的方法配制。

1.3 樣品采集

雌雄不同組織表達試驗用蝦為健康的成體青蝦， 將其置于冰上3—5min， 使其麻醉?；铙w解剖雌雄各取精巢、卵巢， 再分取肌肉、鰓、心臟、腦、肝臟、眼柄、腹神經(jīng)等7個組織， 每個組織取5個個體作為混合樣本。取樣后將其保存于RNA保存液中， 置于-20℃保存， 用于RNA提取。

挑選健康的成體雌蝦， 根據(jù)Qiao［11］分期標準判斷卵巢發(fā)育不同時期， 分別為: 卵巢增殖期、初級卵黃發(fā)生期、次級卵黃發(fā)生期、成熟期、消退期等5個不同發(fā)育時期。將蝦置于冰上3—5min， 使其麻醉， 活體解剖各時期卵巢， 每期取5個個體作為混合樣本。取樣后將其保存于RNA保存液中， 置于-20℃保存， 用于RNA提取。

發(fā)育表達實驗用蝦的養(yǎng)殖條件同上， 待雌蝦和雄蝦交配抱卵后， 按陳瑛［10］發(fā)育分期標準， 取胚胎發(fā)育過程中的卵裂期、囊胚期、原腸期、無節(jié)幼體期、膜內(nèi)溞狀幼體期的蝦卵。幼體發(fā)育過程中取出膜后第1天、第4天、第7天、第10天幼體、第13天以及第16天幼體。幼體經(jīng)變態(tài)后發(fā)育到幼蝦階段， 取該階段第1天、第5天、第10天幼蝦的幼蝦個體的頭部組織。取樣后將其保存于RNA保存液中， 置于-20℃保存， 用于RNA提取。

1.4 青蝦Gsf1基因的引物

根據(jù)從本實驗室構(gòu)建的青蝦卵巢文庫中Gtsf1的EST序列， 遵循引物設計原則， 使用 Primer 5軟件設計特異性引物， 采用快速擴增cDNA末端技術（RACE技術）從青蝦卵巢中分別克隆出Gstf1基因的3′端和5′端， 并拼接成全長序列。在cDNA全長序列的基因上， 采用同樣的方法設計一對熒光定量引物。熒光定量引物已驗證其是有效的。熒光定量中所用到的β-actin 引物參考Zhang［18］設計， 并且廣泛應用在青蝦中［19，20］。引物列表見表 1。

1.5 青蝦Gtsf1基因的克隆

表 1 實驗所用引物列表Tab. 1 List of primers used in the current study

將青蝦卵巢的混合樣， 按Trizol reagent試劑的說明方法提取總RNA。所使用的RNA樣品A260/280值為1.9—2.1。按Takara RACE試劑盒的說明， 采用套式PCR對青蝦Gtsf1基因的3′， 5′端進行擴增。第一、二輪反應條件均如下: 94℃預變性1min， 隨后95℃ 30s， 55℃ 30s， 72℃ 1min進行30個循環(huán)， 最后72℃ 10min。

分別取PCR產(chǎn)物經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳20min后， 切取特異性目的條帶， 用生工膠回收試劑盒切膠回收純化。將純化的純化產(chǎn)物與pMD18-T載體進行連接， 反應體系為: 4 μL DNA， 1 μL pMD18-T，5 μL Solution I。混勻后PCR儀上16℃連接過夜。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到Trans DH5α大腸桿菌感受態(tài)細胞。在37℃過夜培養(yǎng)后， 將含有目的片段重組質(zhì)粒的菌液送往上海鉑尚生物工程技術服務有限公司進行測序。

1.6 青蝦Gtsf1基因時空表達分析

首先用不同發(fā)育時期樣品的總RNA作為cDNA第一鏈的合成模板， 嚴格按照BIO-RAD iScript cDNA Synthesis Kit試劑盒的說明進行cDNA第一鏈的合成。首先根據(jù)分光光度計所測量出樣品RNA的濃度， 分別取1 μg總RNA為模板， 分別進行獨立的反轉(zhuǎn)錄反應， 所有操作均在冰上進行， 產(chǎn)物-20℃保存?zhèn)溆?。使?BIO-RAD iQ5 熒光定量PCR儀進行PCR反應， 所用引物見表1， 反應過程如下: 首先95℃預變性1min， 然后進入40個循環(huán)， 每個循環(huán)中包括95℃變性10s， 55℃延伸30s兩個步驟，循環(huán)結(jié)束后， 從55℃緩慢升溫到95℃， 繪制熔解曲線。

每個樣本設置3個重復， 每次反應都以β-actin基因作為陰性對照， 最后由系統(tǒng)自動記錄熒光曲線和數(shù)據(jù)， 用于后期數(shù)據(jù)分析。PCR產(chǎn)物均須用1.2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測其是否為單一特異性擴增條帶， 以確保實驗結(jié)果的可靠性。

1.7 青蝦生物學信息分析和數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

在NCBI中用BLASTN對測序結(jié)果進行比對分析， ORF Finder軟件（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ gorf）分析開放閱讀框， 采用DNAMAN 5.0 軟件將中間序列、3′端序列、5′端序列進行拼接得到青蝦Gtsf1基因cDNA序列。用在線DNA和蛋白序列處理工具（http://www.91bio.com/SMS2/rev_comp. html）推導蛋白質(zhì)分子量。用SignalP3.0 Server*（http:// www.cbs.dtu.dk/services）進行信號肽預測。

數(shù)值計算參考2-ΔΔCt方法進行［21］。數(shù)據(jù)用平均值±標準差（X±SE）表示， 運用SPSS 17.0進行統(tǒng)計分析， 運用One-Way ANOVA進行顯著性檢驗及多重比較（P＜0.05）。用Excel繪制青蝦Gtsf1基因的相對表達量直方圖。

2 結(jié)果

2.1 青蝦Gtsf1基因序列特征

青蝦卵巢總RNA經(jīng)第一鏈cDNA合成試劑盒反轉(zhuǎn)錄為第一鏈cDNA， 以此為模板依據(jù)文庫中Gtsf1基因cDNA的部分序列， 設計3′端、5′端進行PCR擴增。PCR產(chǎn)物經(jīng)切膠回收、純化、克隆和測序， 用DNAMAN 5.0拼接后獲得了349 bp的DNA片段， 序列已提交至GenBank上， 登錄號為KR349325。其中開放閱讀框ORF （Open Reading Frame， ORF）為240 bp， 共編碼79個氨基酸， 從第16個氨基酸到第42個氨基酸為zf-U11-48K保守結(jié)構(gòu)域。BLAST分析顯示與魚虱（Caligus rogercresseyi）Gtsf1基因（ACO10875.1）最為相似， 相似度達48%。用在線DNA和蛋白序列處理工具推導蛋白質(zhì)分子量為9.49 kD， 等電點pI為9.86； 信號肽預測結(jié)果表明此蛋白無信號肽。利用DNAMAN對輪蟲和昆蟲類的動物等十個物種的Gstf1基因進行氨基酸序列比對發(fā)現(xiàn)青蝦zf-U11-48K保守結(jié)構(gòu)域中的谷氨酰胺變異成了丙氨酸。

2.2 青蝦Gtsf1基因系統(tǒng)進化分析

利用MEGA 5.0軟件對青蝦Gtsf1基因的氨基酸序列和昆蟲類等其他物種Gtsf1基因的氨基酸序列進行系統(tǒng)進化分析， 計算方法采用Bootstrap法重復計算1000次。從圖 1可以看出， 與青蝦的親緣關系最近的是昆蟲綱的一種蝽類（Lygus hesperus）。

2.3 青蝦Gtsf1基因的組織分布

使用實時熒光定量PCR分別檢測Gtsf1基因在雌性青蝦和雄性青蝦9個成體不同組織中的表達模式和分布情況如圖 2所示。Gtsf1基因在性腺中表達很高， 特別是在卵巢中表達最高， 為精巢的6倍，在其他組織中的表達極低， 與性腺中相比存在顯著差異（P＜0.05）。Gtsf1基因在雄性青蝦各個組織中與在雌性青蝦各個組織中的表達情況類似。

2.4 不同卵巢發(fā)育時期Gtsf1基因的表達規(guī)律

為了研究Gtsf1基因在性腺中的作用， 本研究使用實時熒光定量PCR檢測Gtsf1基因在青蝦不同卵巢發(fā)育時期的表達模式和分布情況（圖 3）。Gtsf1基因在卵巢發(fā)育過程中有先升高后降低的表達趨勢。在卵巢發(fā)育初期該基因的表達水平較低， 隨著卵巢的發(fā)育該基因的表達水平顯著升高（P＜0.05），在成熟期其表達量達到最高值。在卵巢消退期其表達水平顯著降低（P＜0.05）， 恢復到較低水平。

2.5 青蝦Gtsf1基因在胚胎和胚后發(fā)育過程中的表達規(guī)律

使用實時熒光定量PCR檢測Gtsf1基因在青蝦胚胎發(fā)育和胚后發(fā)育不同發(fā)育時期的表達模式和分布情況如圖 4所示。從卵子到受精卵發(fā)育的第一天， Gtsf1基因的表達量顯著增加。在胚胎發(fā)育早期該基因的表達水平較高， 在囊胚期顯著升高， 出現(xiàn)了表達高峰， 接著在原腸胚期其表達水平顯著下降，此后維持在較低表達水平直到整個胚胎發(fā)育的完成。在胚胎后發(fā)育過程中Gtsf1基因的表達水平持續(xù)較低。

圖 1 Gtsf1的系統(tǒng)進化樹Fig. 1 Phylogenetic tree of Gtsf1 among different species

圖 2 熒光定量PCR檢測青蝦各組織中Gtsf1 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平（n≥3， P＜0.05）Fig. 2 Gtsf1 mRNA level in various tissues of M. nipponense by real-time qPCR （n≥3， P＜0.05）

圖 3 熒光定量PCR檢測青蝦卵巢不同發(fā)育時期的Gtsf1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平（n≥3， P＜0.05）Fig. 3 Gtsf1 mRNA level in the different ovary development stages of M. nipponense by real-time qPCR （n≥3， P＜0.05）

3 討論

在小鼠Gtsf1基因中發(fā)現(xiàn)了兩個串聯(lián)的zf-U11-48K保守結(jié)構(gòu)域， 有研究報道該結(jié)構(gòu)域可能與RNA的識別有關， 從而發(fā)揮其相應的作用［5］。本研究也在青蝦Gtsf1基因中發(fā)現(xiàn)了zf-U11-48K這個保守結(jié)構(gòu)域， 但數(shù)量是一個。推測是因為小鼠比青蝦具有較長的Gtsf1基因序列， 它具有167個氨基酸， 而在青蝦中只有79個氨基酸。此外， 所推斷的氨基酸序列不含信號肽， 具有分子作為非分泌型蛋白在細胞中行使功能特征。所構(gòu)建的Gtsf1基因分子系統(tǒng)進化樹顯示， 青蝦Gtsf1基因與昆蟲綱的蝽類（Lygus hesperus）互為姐妹群， 這對于在分子進化水平上研究Gtsf1基因提供了一些背景材料。本文結(jié)果也為研究甲殼動物Gtsf1基因提供了背景材料。

圖 4 熒光定量PCR檢測青蝦不同發(fā)育時期Gtsf1 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平（n≥3， P＜0.05）Fig. 4 Gtsf1 mRNA level in different developmental stages of M. nipponense by real-time qPCR （n≥3， P＜0.05）

有研究表明， 果蠅Gtsf1基因能在轉(zhuǎn)錄后水平抑制轉(zhuǎn)座元件活性， 從而維持生殖細胞的正常發(fā)育分化， 促進性腺正常發(fā)育［6］。Krotz等［4］將Gtsf1蛋白定位在小鼠卵泡細胞的細胞質(zhì)和精原細胞中， 均表明Gtsf1與生殖細胞的形成密切相關。本研究在青蝦中也發(fā)現(xiàn)Gtsf1基因承擔類似功能， 在各組織表達模式中發(fā)現(xiàn)在卵巢和精巢中表達很高， 在其他組織中基本不表達， 且在卵巢中的表達量遠高于精巢， 由此可推測青蝦Gtsf1基因與生殖密切相關， 特別與卵巢發(fā)育相關。

卵巢的直接關系著動物的生長發(fā)育、繁殖性能等重要生命活動。本研究在青蝦卵巢不同發(fā)育時期研究發(fā)現(xiàn)， 隨著卵巢的發(fā)育， Gtsf1基因的表達水平顯著升高（P＜0.05）， 在卵巢的消退期又恢復到較低水平， 由此可說明Gtsf1基因與卵巢發(fā)育呈正相關。卵巢成熟的過程同時也是卵子發(fā)生的過程［22，23］。Bai等［24］報道卵黃蛋白原基因參與青蝦卵子的發(fā)生過程， 隨著卵巢的發(fā)育， 該基因的表達規(guī)律與Gtsf1基因一致， 也出現(xiàn)了上升趨勢。由此可推測Gtsf1基因與青蝦卵子的生成關系密切。

本文進一步從轉(zhuǎn)錄水平上具體分析Gtsf1基因

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本研究首次在甲殼動物中克隆獲得青蝦Gtsf1基因cDNA序列， 該基因長349 bp， 其中開放閱讀框為240 bp， 共編碼79個氨基酸。該蛋白進行信號肽預測， 發(fā)現(xiàn)無信號肽， 可推測其為非分泌蛋白。系統(tǒng)進化樹分析結(jié)果顯示與青蝦的親緣關系最近的是昆蟲綱的一種蝽類（Lygus hesperus）。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示Gtsf1基因在各組織表達水平中， 在性腺中表達顯著較高（P＜0.05）， 其他組織基本不表達， 其中在卵巢中的表達量最高， 且與卵巢發(fā)育呈現(xiàn)正相關的規(guī)律， 這預示著Gtsf1基因在青蝦性腺發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用， 具體作用機理還有待進一步研究。由此本研究為進一步研究青蝦Gtsf1基因功能和青蝦性腺發(fā)育調(diào)控規(guī)律奠定基礎， 也為其他甲殼動物的生殖相關研究提供參考。tional silencing complex ［J］. Genes & Development，2013， 27（15）: 1693—1705

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MOLECULAR CHARACTERIZATION AND EXPRESSION ANALYSIS OF GTSF1 IN THE ORIENTAL RIVER PRAWN MACROBRACHIUM NIPPONENSE

LIANG Guo-Xia1， FU Hong-Tuo1，2， QIAO Hui2， BAI Hong-Kun2， ZHANG Wen-YI2， LI Fa-Jun1，3， JIANG Su-Fei2，XIONG Yi-Wei2， GONG Yong-Sheng2， JIN Shu-Bo2and WU Yan2
（1. Wuxi Fisheries College， Nanjing Agricultural University， Wuxi 214081， China； 2. Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Germplasm Resources Utilization， Ministry of Agriculture， Freshwater Fisheries Research Center， Chinese Academy of Fishery Sciences， Wuxi 214081， China； 3. Weifang University of Science and Technology， Shouguang 262700， China）

Gametocyte-specific factor 1（Gtsf1） is involved in gonadal development and plays an important role in maintaining normal proliferation of germ cells in Mus musculus and Drosophila melanogaste. In order to study sexual precocity in Macrobrachium nipponense， the homologous cDNA sequence of Gtsf1 was screened from the ovary and testis differentially gene expression profile， and the full-length cDNA sequence was cloned by RACE technique （KR349325）. The length of its cDNA sequence was 349 bp， containing a 240 bp open reading frame （ORF）， encoded a 79-amino acid protein. MnGtsf1 protein contained a zf-U11-48K domain that shared highly with its homologues in other vertebrates. The sequence did not contain signal peptide， indicating it is a non-secreted protein. According to the phylogenetic tree analysis， MnGtsf1 has the closest evolutionary relationship with its homologous in Lygus hesperus. MnGtsf1 was exclusively expressed in the gonads， especially in ovary， which is 6 times higher than that in testis. The MnGtsf1 expression showed an increased trend with the ovarian development. MnGtsf1 expression in the early embryonic development was higher than that in the late embryonic development. The MnGtsf1 expression showed the highest in blastula stage，and its expression stayed at a low level from gastrula stage to the 10thday after metamorphosis. These results indicate that MnGtsf1 might be involved in gonadal development and early embryonic development.

Macrobrachium nipponense； Gtsf1； Development of ovary； Gonad； Expression profiles

10.7541/2016.36

Q344+.1

A

1000-3207（2016）02-0261-07

2015-06-09；

2015-12-01

國家“十二五”科技支撐計劃（2012BAD2604-05）； 中央級基本科研業(yè)務費專項（2015JBFM05）； 江蘇省水產(chǎn)三新工程（D2013-6， D2015-16）； 江蘇省科技支撐計劃-農(nóng)業(yè)部分； 江蘇省基礎研究計劃（自然科學基金）青年基金資助 ［Supported by the National Science & Technology Supporting Program of the 12th Five Year Plan of China （2012BAD2604-05）； China Central Governmental Research Institutional Basic Special Research Project from the Public Welfare Fund （2015JBFM05）； the Three Aquatic Projects of Jiangsu Province （D2013-6， D2015-16）； the Science & Technology Supporting Program of Jiangsu Province （BE2012334）； the Natural Science Foundation of Jiangsu Province （BK2012091）］

梁國霞（1990—）， 女， 湖南耒陽人； 碩士研究生； 研究方向為水產(chǎn)動物遺傳育種。E-mail: liangguoxia_2009@126.com

傅洪拓（1964—）， 男， 湖南長沙人； 研究員， 博士； 主要研究方向為水產(chǎn)動物遺傳育種。E-mail: fuht@ffrc.cn