范 菲，楊會(huì)鴿，周 娜，鄭 妍

(西安市食品藥品檢驗(yàn)所，西安 710054)

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HPLC法同時(shí)測(cè)定多維元素片中維生素A和維生素E的含量

范 菲，楊會(huì)鴿，周 娜，鄭 妍

(西安市食品藥品檢驗(yàn)所，西安 710054)

目的 建立高效液相色譜(HPLC)法同時(shí)測(cè)定多維元素片中維生素A和維生素E的含量。方法 采用C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相為甲醇-水(98∶2);流速為1.0mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm;柱溫為25 ℃。結(jié)果 維生素A和維生素E的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(r)均大于0.999 9；專屬性強(qiáng)，維生素A、維生素E與藥品中其他成分之間均有良好的分離度；穩(wěn)定性和精密度良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD值)均小于1.0%；回收率良好，回收率在91.07%～92.85%之間；穩(wěn)定性能滿足實(shí)驗(yàn)要求。結(jié)論 該法可同時(shí)定性和定量分析多維元素片中的維生素A和維生素E，其方法的精密度、回收率和檢出限能滿足實(shí)際檢測(cè)要求，可用于該制劑中維生素A和維生素E的監(jiān)測(cè)。

維生素A；維生素E；HPLC；多維元素片

多維元素片臨床上主要應(yīng)用于預(yù)防和治療因維生素與礦物質(zhì)缺乏所引起的各種疾病，是一種由多種維生素和微量元素制成的復(fù)方制劑，由于活性成分種類多，其質(zhì)量控制方法也極為復(fù)雜[1]。高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定多維元素片中多種水溶性維生素的報(bào)道[1-2]較多，而同時(shí)測(cè)定其脂溶性維生素的方法較少[3-6]。多維元素片成分復(fù)雜，有報(bào)道用梯度洗脫法測(cè)定，但是梯度方法較為繁瑣，本實(shí)驗(yàn)建立在一個(gè)等度洗脫的色譜條件下同時(shí)測(cè)定多維元素片中維生素A和維生素E的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Ultimate3000高效液相色譜儀(美國(guó)戴安公司)，配有二極管陣列檢測(cè)器；BSA124S-CW萬(wàn)分之一電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；MS105十萬(wàn)分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2 試藥 多維元素片(由25種元素組成，貴州神奇藥業(yè)有限公司)；維生素A對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100061-201208)、維生素E對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100062-201110)；甲醇為色譜純(賽默飛世爾科技公司)；水為高純水；其他試劑均為分析純；輔料為淀粉、糊精、羧甲基淀粉鈉和硬脂酸鎂(貴州神奇藥業(yè)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取維生素A17.21mg，置于100mL量瓶中，加入異丙醇稀釋至刻度，搖勻；再精密稱取維生素E304.70mg，置于20mL量瓶中;精密吸取上述維生素A溶液1mL，置于裝有維生素E的 20mL量瓶中，加入異丙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備 取本品50片，除去薄膜衣，精密稱定，研細(xì)，稱取適量(約相當(dāng)于維生素E30單位)，加入20mL二甲基亞砜，在40～50 ℃超聲約20min，放冷至室溫，以3 000r·min-1離心10min；精密量取上清液10mL，置于分液漏斗中，用正己烷萃取4次，將萃取液定容至100mL量瓶中，搖勻，精密量取25mL，用氮?dú)獯蹈桑尤氘惐?mL使殘?jiān)芙?，混勻，即得?/p>

2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 根據(jù)多維元素片說(shuō)明書(shū)提供的制劑配方，配制不含維生素A和維生素E的陰性對(duì)照粉末，按照2.2項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。2.4 色譜條件 色譜柱：WelchUltimateXB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(98∶2)；流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20μL。

2.5 專屬性實(shí)驗(yàn) 精密量取陰性對(duì)照溶液、混合對(duì)照品溶液和供試品溶液，按照2.4項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見(jiàn)圖1，在此色譜條件下，維生素A和維生素E的保留時(shí)間分別為17.35和30.46min，與相鄰雜質(zhì)峰分離度大于1.67，峰形良好，理論塔板數(shù)大于12 658，樣品中其他成分不干擾維生素A和維生素E的測(cè)定。

2.6 線性關(guān)系和最低檢測(cè)限 分別精密量取對(duì)照品溶液1，2，4，6，8和10mL，置于20mL量瓶中，加異丙醇稀釋至刻度，按照2.4項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜數(shù)據(jù)，以峰面積X與質(zhì)量濃度Y做線性回歸。維生素A的回歸方程：Y=1.582 43 X-0.000 580，r=0.999 98，線性范圍為0.28～2.84μg·mL-1；維生素E的回歸方程：Y= 0.052 37 X +0.021 64，r=0.999 98，線性范圍為0.76～7.62mg·mL-1。維生素A和維生素E的最低檢測(cè)限分別為0.14和7.62μg·mL-1。

圖1 高效液相色譜圖

A.陰性對(duì)照溶液；B.混合對(duì)照品溶液；C.供試品溶液；1.維生素A；2.維生素E

Fig.1HPLCchromatograms

A.negativecontrol;B.combinedstandards;C.analyticalsample; 1.vitaminA; 2.vitaminE

2.7 精密度實(shí)驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液，按照2.4項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，維生素A和維生素E的RSD值分別為0.42%和0.19%。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品5份，按照2.4項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，維生素A和維生素E的標(biāo)示量分別為91.27%(RSD=1.0%)和92.05%(RSD=0.8%)，表明重復(fù)性良好。

2.9 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液(140203)，按照2.4項(xiàng)下色譜條件在0，1，2，4，8和12h進(jìn)樣測(cè)定峰面積，RSD值均小于1.0%，結(jié)果表明，維生素A和維生素E在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知含量的供試品(140203)粉末適量，分別加入適量的混合對(duì)照溶液，按照2.2項(xiàng)下規(guī)定制備高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度(相當(dāng)于供試品溶液75%，100%和125%)的供試品溶液，每個(gè)質(zhì)量濃度制備3份，按照2.4項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1，各成分的回收率在91.07%～92.85%之間。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.1 Results of recovery test(n=3)

2.11 樣品含量測(cè)定 精密稱取3份不同批號(hào)的多維元素片，按照2.4項(xiàng)下色譜條件每批測(cè)定5次，維生素A和維生素E的平均含量在91.31%～92.00%之間。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)比較了流動(dòng)相水-甲醇(15∶85)、水-甲醇(2∶98)及梯度洗脫等條件，比較維生素A和維生素E的色譜峰形及分離情況，梯度洗脫雖然色譜峰形及分離效果也不錯(cuò)，但比較麻煩，最后確定采用水-甲醇(2∶98)作為流動(dòng)相，在此條件下，維生素A和維生素E的峰形及分離度均理想，且未見(jiàn)其他成分干擾。該方法簡(jiǎn)便快速，準(zhǔn)確可靠，能同時(shí)測(cè)定維生素A和維生素E的含量。

[1] 姜文清,金鵬飛,朱峰,等.HPLC同時(shí)測(cè)定多維元素片中維生素B1、維生素C、維生素B6和煙酰胺的含量[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志, 2011, 46(14):1122-1125.

[2] 田穎,黃挺,劉軍,等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定多維元素片中9種水溶性維生素[J].分析實(shí)驗(yàn)室, 2010, 29 (11):52-56.

[3] 朱姜,張鵬,楊嘉,等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定奶粉中的維生素A、維生素D、維生素E[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2015, 25(11):1733-1739.

[4] 宋金春,李韻秋,曾俊芬.HPLC法測(cè)定注射用12種復(fù)合維生素中維生素D2、維生素A與維生素E的含量[J]. 中國(guó)藥房, 2007, 18(31):2456-2457.

[5] 柳小秦,尹琳,吳少平.八維鈣鋅片中維生素D2含量測(cè)定方法的改進(jìn)[J]. 西北藥學(xué)雜志, 2011,26(5):349-350.

[6] 徐長(zhǎng)根,柳小秦,吳昊,等.HPLC法測(cè)定復(fù)方炔雌醇甲羥孕酮膠囊中3種維生素的含量[J]. 西北藥學(xué)雜志, 2013, 28(6):580-583.

Simultaneous determination of vitamin A and vitamin E in Vitamins with Minerals Tablets by HPLC

FANFei,YANGHuige,ZHOUNa,ZHENGYan

(Xi′anInstituteforFoodandDrugControl,Xi′an710054,China)

ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthesimultaneousdeterminationofvitaminAandvitaminEinVitaminswithVineralsTablets.MethodsTheHPLCmethodwascarriedonaC18column(250mm×4.6mm，5μm),methanol-water(98∶2)asthemobilephaseanddetectedat265nm.Theflowratewas1.0mL·min-1,andcolumntemperaturewassetat25 ℃.ResultsGoodlinearrelationshipbetweenthepeakareaandsamplevolumewasfoundforvitaminAandvitaminEwithallcorrelation(r)greaterthan0.999 9.ThespecificitystudyshowedsatisfactoryresolutionsbetweenvitaminAandvitaminEwithotheringredients.Themethodproposedshowedgoodstabilityandprecisionwithallrelativestandarddeviations(RSD)lowerthan1.0%,andtherecoveriesrangedfrom91.07%to92.85%forthetwocompounds.ConclusionThemethodcanbeusedforthequalitativeandquantitativeanalysisofvitaminAandvitaminEinVitaminswithMineralsTablets.Precision,recoveryanddetectionlimitofthemethodcanmeetthepracticalrequirementsofdetection.ItcanbeusedformonitoringthevitaminAandvitaminEcontentinthepreparation.

vitaminA；vitaminE;HPLC；VitaminswithMineralsTablets

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.06.012

R

A

2016-05-04)