孫 濤,張利峰,鄧明俊,王 群,鄭小龍,岳志芹
(1.山東出入境檢驗檢疫局,山東青島 266002;2.北京出入境檢驗檢疫局,北京 101100)
病毒性出血性敗血癥的傳入風(fēng)險分析
孫濤1,張利峰2,鄧明俊1,王群1,鄭小龍1,岳志芹1
(1.山東出入境檢驗檢疫局,山東青島266002;2.北京出入境檢驗檢疫局,北京101100)
迄今為止我國還未有病毒性出血性敗血癥(VHS)暴發(fā)的報道。VHS一旦隨進口貿(mào)易傳入,將給我國的水產(chǎn)養(yǎng)殖造成很大的經(jīng)濟損失。為評估病毒性出血性敗血癥病毒(VHSV)傳入的風(fēng)險,對導(dǎo)致病毒傳入的可能因素進行了風(fēng)險分析,并提出了相應(yīng)的風(fēng)險管理措施。風(fēng)險分析結(jié)果顯示:活的敏感動物(包括親魚、魚卵和魚苗)、冰凍和冰鮮的敏感魚類和用做鮮活餌料的魚類(野雜魚)傳入VHSV的風(fēng)險較高,應(yīng)禁止從疫區(qū)進口;敏感魚類的魚肉(除掉頭和內(nèi)臟的部分)、敏感魚加工后的產(chǎn)品、其它非敏感魚類傳入VHSV的風(fēng)險較低,可以自由貿(mào)易;通過運輸活魚的水、包裝、運輸工具和用具傳入VHSV的風(fēng)險不明,需要對其強制進行常規(guī)消毒。
病毒性出血性敗血癥;傳入風(fēng)險分析;風(fēng)險因素;風(fēng)險管理
病毒性出血性敗血癥(Viral Haemorrhagic Septicaemia,VHS)是由彈狀病毒科粒外彈狀病毒屬 病毒性出血性敗血病毒(VHSV)引起的鮭鱒魚、狗魚和大菱鲆等淡水、海水魚類的烈性傳染?。?]。該病毒宿主范圍廣,以引起出血性敗血癥為特征,致死率極高。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)、亞太水產(chǎn)養(yǎng)殖中心(NACA)將該病列入須通報的水生動物疫病名錄,我國將其列入二類進境動物檢疫疫病名錄。本病主要流行于歐洲及北美地區(qū),近年來擴散到日本和韓國[2-3]。北美洲太平洋沿岸地區(qū)已有海洋野生魚類由于感染此病而大量死亡的報道[4-6]。迄今為止我國還未有確證該病發(fā)生的報道。
本項目主要分析VHSV隨水生動物進入我國的可能性及其后果。其宿主在沒有新的資料前僅限定在水生動物,內(nèi)容限定在疾病方面的影響(不考慮進口品種對生態(tài)環(huán)境的影響問題)。
3.1病原因子
VHSV是有囊膜的單鏈負股RNA病毒,包含 三個血清亞型:1亞型(包括丹麥的F1和he dedam)、2亞型(包括23/75,DK-5131和DK-5276)、3亞型(包括DK-5151和DK-5422)。目前發(fā)現(xiàn)VHSV有4個基因型[8]:Ia型(主要分離自歐洲大陸?zhàn)B殖的虹鱒魚)、Ib型(主要分離自波羅的海、斯卡格拉克海峽、卡特加特海峽的海洋宿主,與Ia有一定關(guān)系)、II型(分離自波羅的海的海洋宿主,與Ib不同,與Ia的關(guān)系不大)、III型(主要分離自大不列顛群島)、IV型(分離自西北太平洋(北美)和日本)。盡管VHSV各亞型之間存在相同抗原決定簇,但通過核酸測序鑒定的基因型與血清型并無關(guān)聯(lián)。有資料顯示VSHV的基因型I毒株中既有在歐洲大陸導(dǎo)致虹鱒魚死亡的分離株,也有來源于野生海洋魚類的分離株,這顯示淡水和海洋魚類中的分離株具有相關(guān)性。
3.2 病原的穩(wěn)定性——在宿主體外的存活能力及滅活條件
VHSV在宿主體外的存活依賴于水體的物理化學(xué)條件和溫度:病毒在4 ℃比在20 ℃的生存時間更長。有記錄表明病毒在4 ℃的淡水中能夠存活28~35天,在44 ℃已過濾的淡水中1年內(nèi)還有感染性[9]。如果水中添加卵巢液或血液制品(如牛血清)等有機物質(zhì),病毒能存活更長的時間。在15℃的天然淡水中,13天后99.9%的病毒失活,但在海水中病毒4天內(nèi)滅活。其它研究發(fā)現(xiàn),在1 ℃海水中,10小時后病毒的傳染性減少50%,但40小時后仍可以分離出病毒[10]。
在商用冷凍溫度下冰凍的受感染魚,解凍后病毒不會完全被殺滅,但病毒的感染性或病毒滴度會降低90%以上。Artkush等[12]指出余下的活病毒仍存留在魚組織,并不會從冰凍魚解凍的水中流失。
3.3 易感宿主
VHSV的儲存宿主是臨床感染的魚類、養(yǎng)殖或野生魚中的隱性病毒攜帶者。不同遺傳特性的虹鱒對VHSV的感染性有差異,魚齡對其影響較大,魚齡越小的敏感性越高。一般來說,從未接觸過該種疾病的魚即使魚齡較大,感染VHSV后也會導(dǎo)致高死亡率。VHSV以在易感魚的所有生命階段導(dǎo)致其發(fā)病和死亡。感染會在地方流行地區(qū)產(chǎn)生保護性免疫,因而疾病多發(fā)于幼魚或未感染過病毒的魚群。VHSV是否可感染魚卵目前仍不知曉。
過去二十年已經(jīng)從越來越多的海洋和淡水魚類身上分出VHSV。VHSV很可能流行于北半球溫帶大面積的魚類種群中。到目前為止,在整個北半球包括北美、亞洲和歐洲,已從82種魚類中分離出VHSV,包括鮭目、狗魚目、鯡形目、鱈形目、鰈形目、鯰形目、鱸形目等。VHSV宿主范圍大,對不同宿主的致病性有顯著差異。病毒可通過感染魚的尿液和生殖液傳播,也可以通過食魚鳥類作為轉(zhuǎn)移載體傳播。因此其傳播迅速,地理分布廣。
3.4 流行病學(xué)
病毒的主要傳播途徑是接觸被感染的魚類或污染的水,污染物如尿液等導(dǎo)致的水平傳播。通過攜帶指示基因的重組病毒傳染性造血壞死病毒(IHNV)人工感染活鱒魚,使用生物體發(fā)光成像,研究發(fā)現(xiàn)感染魚從皮膚釋放大量病毒[11],而IHNV與VHSV病毒非常相似。VHSV 感染魚的途徑仍需要研究,但預(yù)計從皮膚釋放病毒是該病毒的主要傳播途徑之一。病毒也可以通過食魚鳥類傳播。沒有任何跡象或證據(jù)表明VHSV能夠垂直傳播。
水溫是病毒傳播的重要環(huán)境因素。疾病通常易發(fā)生于4~14 ℃之間的水溫。水溫高于15 ℃病毒生長就會受到抑制。低溫通常會導(dǎo)致疾病大范圍暴發(fā)。水溫在15~18 ℃時,疾病病程較短并有中度的累積死亡率。疾病很少在較高的溫度發(fā)生,但實驗證明溫度高達 25 ℃時VHSV仍能復(fù)制。在低水溫(1~5 ℃)下,日死亡率通常較低,但累計死亡率較高。VHS暴發(fā)可能發(fā)生在任何季節(jié),但在水溫上升或容易波動的春季最常見。
3.5臨床癥狀和潛伏期
感染早期或急性期出現(xiàn)快速死亡、不活潑、皮膚發(fā)黑、眼球突出、貧血(鰓部蒼白色),鰭部、鰓部、眼睛、皮膚處出血,不正常游動,以及腹水引起的腹部脹大。該病的神經(jīng)癥狀主要表現(xiàn)為嚴重的異常游動,如持續(xù)浮出水面或者打轉(zhuǎn),這是病毒入侵大腦所致。與患細菌敗血病的魚不同,感染VHSV的魚被捕撈后不會嘗試逃跑。
3.6發(fā)病機理及病理變化
在疾病的敗血癥階段,包括皮膚和肌肉的所有組織中都含有大量病毒。腎、心和脾中病毒含量最大,為病毒的靶器官。在慢性階段,大腦會出現(xiàn)高滴度的病毒。
病理解剖學(xué)變化包括在皮膚、肌肉組織(尤其是背部肌肉)以及內(nèi)臟器官出現(xiàn)點狀出血。在急性階段,腎呈暗紅色,但瀕死的魚腎臟會出現(xiàn)嚴重的壞死。脾有一定程度的腫脹,肝通常呈灰白色或斑駁。胃腸道特別是后腸,呈灰白色并且缺少食物。VHS急性階段的紅細胞水平非常低,血液呈淺紅色并且透明。
免疫組織化學(xué)方法顯示,VHSV陽性內(nèi)皮細胞主要存在于血管系統(tǒng)。
3.7診斷
標準的VHS監(jiān)測方法(監(jiān)測魚群帶毒情況)基本是直接檢測方法。例如用細胞培養(yǎng)分離VHSV,再通過基于抗體的方法(IFAT或ELISA)或基于核酸的方法(RT-PCR)來鑒定。由于直接使用免疫學(xué)方法來檢測感染魚組織中的VHSV抗原(用標記抗體方法)靈敏性不高,因此只能在懷疑VHS感染(根據(jù)臨床表型,流行病學(xué)數(shù)據(jù)和組織病理學(xué))的情況下使用。用于直接檢測感染魚組織中VHSV基因組的PCR技術(shù)還在研究中。該技術(shù)可用于魚群感染發(fā)病的確證,但能否作為判定VHSV無疫狀態(tài)的檢測方法仍需驗證。
國際標準:《OIE水生動物手冊》推薦的病毒檢測方法主要有病毒分離、ELISA、間接熒光抗體試驗、RT-PCR等方法。
國內(nèi)標準:《魚類檢疫方法》(GB /T 15805.3—2008)第3部分:病毒性出血性敗血癥病毒(VHSV)。
3.8防治
該病目前沒有可行的治療方法。
常規(guī)管理措施:在缺乏抗病毒制劑的情況下,目前控制VHS的方法主要是官方衛(wèi)生監(jiān)測計劃。在疾病流行地區(qū)減少感染養(yǎng)殖場數(shù)量、防止再感染方面,據(jù)報道,有很多成功的做法,比如捕殺和休漁措施。
4.1 危害因素的確定—風(fēng)險識別
確定一切可能攜帶VHSV進入我國的各種因素,并逐一評估這些因素的風(fēng)險大?。▊魅朐u估)。根據(jù)對病原和流行病學(xué)的分析,可能導(dǎo)致VHSV進入我國的可能因素有:
敏感動物包括活的(親魚、魚苗、食用魚、魚卵)、冰鮮的、冷凍的,半熟制品,已加工制品;非敏感動物也包括活的(親魚、魚苗、食用魚、魚卵)、冰鮮的、冷凍的,半熟制品,已加工制品;水、包裝物、運載工具、操作工具和人員等。
4.2 敏感動物(親魚、魚苗、食用魚、魚卵)
4.2.1傳入評估。VHSV在4 ℃淡水中1年后還有感染性。在15 ℃的天然淡水中,病毒失活時間為13天。在15 ℃海水中10小時,病毒的傳染性減少50%,但40小時后仍可以恢復(fù)。在商用冷凍溫度下,冰凍的受感染魚解凍后會降低病毒滴度效價90%以上,但余下的活病毒仍存留在魚組織中。因此進境魚卵、魚精液、魚苗、成魚、冰鮮冷凍易感魚及攜帶的水體、載體容器等具有極大的導(dǎo)致病毒傳入的可能性。如果有傳播途徑及易感宿主,還有定殖傳播的可能性。已有研究發(fā)現(xiàn)VHSV的宿主范圍逐漸擴大。除了在傳統(tǒng)的宿主虹鱒中發(fā)現(xiàn)VHSV引起疾病的嚴重暴發(fā)外,其他幾種海洋魚類也容易受到這種疾病的侵襲。養(yǎng)殖大菱鲆、養(yǎng)殖或野生牙鲆已經(jīng)發(fā)現(xiàn)自然感染病例。同樣,VHS疫情也在美國五大湖野生淡水物種中發(fā)生。VHSV對不同宿主的致病性有顯著差異。在挪威,發(fā)現(xiàn)了基因型III的VHSV導(dǎo)致虹鱒魚發(fā)病,而之前認為海洋基因型對虹鱒魚不致病。這表明海洋毒株并非對虹鱒養(yǎng)殖業(yè)無影響。VHSV對海水魚、淡水魚都有威脅,一旦傳入,會對我國易感魚養(yǎng)殖業(yè)造成很大的經(jīng)濟損失。
4.2.2 發(fā)生評估。這里所指活的虹鱒魚是可被養(yǎng)殖的,包括暫養(yǎng)的,能和養(yǎng)殖用水接觸的。如果魚帶有VHSV,可以通過水傳播,引發(fā)疫病,因此存在很高的暴發(fā)風(fēng)險。由于該病毒屬于虹彩病毒科,對環(huán)境有較高的抵抗力,所以傳播到遠方水域,引起其它地方的虹鱒或者鱸魚發(fā)病是完全可能的。我國地域遼闊,氣溫和水溫相差很大,大多數(shù)地區(qū)都有水溫在10~21 ℃的最適發(fā)病溫度的季節(jié)。只要病毒擴散到某一地區(qū),只要有虹鱒或者鱸魚養(yǎng)殖,就可暴發(fā)VHS疫情。
4.2.3 后果評估。VHS是由病毒感染引起的,導(dǎo)致虹鱒、鱸魚等敏感魚類死亡的系統(tǒng)性疾病,屬于OIE的法定通報疫病,也是我國規(guī)定的二類動物疫病和禁止進入的二類動物傳染性疫病。一旦某個地區(qū)被劃為VHS疫區(qū),不僅會嚴重影響當(dāng)?shù)厮a(chǎn)養(yǎng)殖業(yè),水產(chǎn)品出口也會受到限制。
4.2.4風(fēng)險預(yù)測。綜上所述,VHSV隨虹鱒等敏感動物進入我國的風(fēng)險很高,一旦進入會迅速擴散,在更多地區(qū)造成疫病流行。由于該病毒環(huán)境抵抗力強,會長期存在,影響正常養(yǎng)殖,而且會逐漸擴散,宿主范圍甚廣,因此會對其他養(yǎng)殖魚類造成毀滅性打擊,不僅危害水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè),而且會對出口帶來不利的影響。因此,綜合評估屬于高風(fēng)險因素,必須加以嚴格控制。
4.3 冰凍和冰鮮敏感魚類
4.3.1傳入評估。由于冰凍和冰鮮魚死亡之前的狀況未知,有可能是已經(jīng)死亡的魚,所以這部分魚攜帶VHSV的風(fēng)險較大。而VHSV對環(huán)境的抵抗力較強,能在死魚體內(nèi)長期存在,再由于水產(chǎn)品的來源很難追溯,所以有很高的傳入風(fēng)險。
4.3.2發(fā)生評估。由于冰凍和冰鮮魚一般都用于食用或加工,和養(yǎng)殖水域接觸機會相對較少,所以對于僅僅用于人類食用的敏感魚類,由其引發(fā)疫情的風(fēng)險相對較低。對于用來加工成產(chǎn)品的敏感魚類,其風(fēng)險主要來自加工后的廢水和廢棄物。如果廢棄物流入養(yǎng)殖水域,則同樣會有傳播疫病的風(fēng)險,需要對其進行管理。該類產(chǎn)品屬于中等程度的風(fēng)險。
4.3.3后果評估。相對活的敏感魚類,冰凍和冰鮮的敏感魚類造成養(yǎng)殖虹鱒等敏感魚類損失的機會要少,屬于中等風(fēng)險。
4.3.4風(fēng)險預(yù)測。由于冰凍和冰鮮的敏感魚類接觸水域機會少,接觸到敏感養(yǎng)殖魚的可能性更少,因此通常造成重大損失的可能性不是很大,屬于中等風(fēng)險,需要適當(dāng)進行管理。
4.4 用做鮮活餌料的魚類(野雜魚)
4.4.1傳入評估。用于做鮮活餌料的野雜魚通常種類復(fù)雜,難以保證不摻帶對VHSV敏感的魚種。如果來自疫區(qū),則存在帶入病原的風(fēng)險。由于該病的特殊性,漏檢的可能性很大,再加上疫區(qū)的實際范圍要比已知的大很多,因此存在中等程度的傳入風(fēng)險。
4.4.2發(fā)生評估。如果這些野雜魚來自疫區(qū),在喂魚的過程中會引起病毒的傳播,具有較高的發(fā)生疫病風(fēng)險。
4.4.3后果評估。同發(fā)生評估。主要后果是將VHSV帶入該水域,可能會擴散到養(yǎng)殖虹鱒的漁場,造成疫病流行,因此后果很嚴重,屬于較高風(fēng)險因素。
4.4.4風(fēng)險預(yù)測。綜上所述,當(dāng)魚被直接用來作為養(yǎng)殖魚的鮮活餌料時,由于可能攜帶病毒,會導(dǎo)致病毒擴散,存在傳播病原的較大風(fēng)險,因此屬于風(fēng)險較高的因素,亟需加強管理。
4.5敏感魚類的魚肉(除掉頭和內(nèi)臟)
4.5.1傳入評估。據(jù)報道,VHSV主要感染敏感魚的肝、腎、脾、腦等,在魚肉中沒有病毒。OIE在法典中明確指出,不管出口魚片或魚排(冷藏或冷凍)的國家和區(qū)域內(nèi)VHSV的狀況如何,主管部門都不需要了解有關(guān)VHSV的任何情況。因此,此類魚肉沒有攜帶病毒的可能性,傳入風(fēng)險很低。
4.5.2發(fā)生評估。不攜帶病原,發(fā)生的風(fēng)險很低。
4.5.3后果評估。低風(fēng)險,原因同上述。
4.5.4風(fēng)險預(yù)測。這些魚雖然對VHSV敏感,但因為去掉了頭和內(nèi)臟,僅僅留下不帶有病毒的魚肉,且是直接食用,因此傳播疫病的風(fēng)險處于可接受的低水平。
4.6 敏感魚加工后的產(chǎn)品
包括:加熱消毒的密封魚產(chǎn)品(即121 ℃加熱處理至少3.6分鐘或任何等效的時間/溫度,如魚罐頭,魚粉等);經(jīng)過加熱處理的魚產(chǎn)品(或證實已經(jīng)滅活VHSV的任何等效時間/溫度,如烤魚,煎魚,魚丸子等);魚油。
由于這類產(chǎn)品都經(jīng)過一定條件的處理,其環(huán)境條件(主要是溫度)已經(jīng)達到了滅活VHSV的條件,即便在加工前帶有病毒,在加工后也不存在攜帶VHSV的任何可能性。因此無論是傳入病原,還是發(fā)生疫病和發(fā)生后果都屬于低風(fēng)險,完全在可以接受的水平。
4.7 其它非敏感魚類(包括活的和其它形式的產(chǎn)品)
4.7.1傳入風(fēng)險。非敏感魚類體內(nèi)不會帶有VHSV,攜帶病毒主要以機械傳播的形式進行。如果來自非疫區(qū),不可能帶有病原。如果來自疫區(qū),需要對隨魚運輸?shù)乃M行消毒,對魚的體表進行相應(yīng)地消毒。這樣就可以把攜帶病原的風(fēng)險降低到可以接受的水平。而冰凍、冰鮮魚,由于其攜帶病毒的可能性本來就很少,而且是用來食用,和養(yǎng)殖水域接觸的可能性很少,傳入風(fēng)險很低,所以非敏感魚類的魚肉和加工后的產(chǎn)品同樣屬于低風(fēng)險。
4.7.2發(fā)生評估。屬于低風(fēng)險。
4.7.3后果評估。屬于低風(fēng)險。
4.7.4風(fēng)險預(yù)測。除了從疫區(qū)來的水和活魚有較低的風(fēng)險外,其它如冰凍、冰鮮魚類,魚肉和加工后的產(chǎn)品風(fēng)險都極低,達到了可接受的水平。
4.8運輸活魚的水、包裝、運輸工具和用具等
4.8.1傳入評估。來自疫區(qū)的隨魚運輸?shù)乃?、包裝、運輸工具和用具是可能攜帶病毒的。而且VHSV對環(huán)境的耐受力比較強,存活時間很長,所以有可能作為傳染源進入我國。來自非疫區(qū)的風(fēng)險較小,所以其傳入風(fēng)險不確定。
4.8.2發(fā)生評估。同上所述,來自疫區(qū)的進口魚可能會引起所在水域的敏感魚發(fā)病。
4.8.3后果評估??偟恼f屬于較低風(fēng)險。
4.8.4風(fēng)險預(yù)測。由于總的風(fēng)險不是很高,只要對水和包裝物等進行消毒,即可把風(fēng)險降低到可以接受的水平。
4.9風(fēng)險評估小結(jié)
通過對上述幾種情況分別進行風(fēng)險評估,綜合分析后認為,活魚和用做鮮活餌料魚類的風(fēng)險預(yù)測結(jié)果較高(表1)。
表1 不同進口種類和產(chǎn)品的風(fēng)險評估結(jié)果
按照《OIE水生動物衛(wèi)生法典》的規(guī)定,進口對該病易感的活魚或其配子體時,輸出國在對易感魚實施官方魚類衛(wèi)生監(jiān)測計劃進行檢疫和實驗室檢驗的基礎(chǔ)上,其水生動物衛(wèi)生證書必須證明該批貨物來自官方宣布的無VHS國家、地區(qū)或養(yǎng)殖場。
官方宣布為無VHS國家的官方機構(gòu)應(yīng)要求從有VHS國家進口的死魚在過境前去內(nèi)臟。
5.1 國家條件
過去的20年,VHSV已從整個北半球溫帶地區(qū)淡水和海洋水域的野生魚類中被分離到。養(yǎng)殖虹鱒的VHS疫情雖然只在歐洲暴發(fā),但仍然被認為是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)最嚴重的一種病毒性疾病。在美洲,VHSV主要引起野生魚類死亡。在亞洲,有報道稱日本的養(yǎng)殖牙鲆暴發(fā)該病以及從野生魚類中分到該病毒。因此從上述國家進口易感魚及其產(chǎn)品時,疫情發(fā)生的風(fēng)險很高,必須采取有效的管理措施,防止該病傳入。
5.2商品的衛(wèi)生要求及基本風(fēng)險管理方案
在進行VHSV易感親魚和魚卵貿(mào)易時,病原體通過這些動物及其產(chǎn)品傳入的風(fēng)險極高。因此,在引進相關(guān)易感魚及其產(chǎn)品時,必須要有齊全的原產(chǎn)地證、衛(wèi)生證書等。不同進口產(chǎn)品的具體風(fēng)險管理措施見表2。
表2 不同產(chǎn)品的風(fēng)險管理措施
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(責(zé)任編輯:朱迪國)
Risk Analysis on the Entry of Viral Haemorrhagic Septicaemia
Sun Tao1,Zhang Lifeng2, Deng Mingjun1, Wang Qun1, Zheng Xiaolong1, Yue Zhiqin1
(1. Shandong Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Qingdao,Shandong 266002;2. Beijing Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Beijing 101100)
In China,reports about outbreak of viral hemorrhagic septicemia(VHS)have not been seen yet. Once VHS entering to China through the import trade,the great economic loss would be caused. In order to guarantee healthy development of Chinese aquaculture industry,analysis on risk factors of VHS importation was made and the risk management measures were put forward. The results showed that imported risk of VHS through the trade of sensitive live fi sh,frozen and chilled sensitive fi sh and fresh fi sh used for baits was high,hence the entry of such products from epidemic areas must be prohibited. In contrast,the imported risk by sensitive fi sh meat(without heads and internal organs),processed products of sensitive fish and other non-sensitive fish was lower,free trade of these kinds of products might be allowed. At last,the routine disinfection of water,packing,transportation facilities and tools used in live fi sh transportation should be conducted compulsively,because of their ambiguity for the imported risk of VHS.
viral haemorrhagic septicaemia;invasion risk analysis;risk factors;risk management
S852.65
B
1005-944X(2016)11-0031-06
10.3969/j.issn.1005-944X.2016.11.010
國家“十二五”科技支撐計劃(2013BAD12B02)
岳志芹