高富紅，周德剛，高艷艷，李召斌

（國家獸用藥品工程技術研究中心，河南 洛陽 471003）

戊二醛苯扎溴銨溶液對雞新城疫病毒的殺滅效果研究

高富紅，周德剛，高艷艷，李召斌

（國家獸用藥品工程技術研究中心，河南 洛陽 471003）

考察戊二醛苯扎溴銨溶液消毒劑對新城疫病毒的殺滅效果。參考中華人民共和國農(nóng)業(yè)部《獸用消毒劑技術規(guī)范》（1992年版），采用懸浮殺滅試驗，以雞胚感染法，將其通過不同稀釋倍數(shù)（800、1600、3 200）、在不同時間段（5、10、15、30、60 min）觀察其對新城疫病毒的殺滅效果。結(jié)果：戊二醛苯扎溴銨溶液在20℃水浴中，1 600倍稀釋，作用5 min，對雞新城疫病毒的滅活率在80%以上。結(jié)論：戊二醛苯扎溴銨溶液在20℃水浴中，對雞新城疫病毒的最低有效濃度為1 600倍稀釋，該濃度對新城疫病毒的最快有效時間為5 min。

戊二醛苯扎溴銨溶液；雞新城疫病毒；殺滅效果

新城疫（ND）是由副黏病毒科禽腮腺炎病毒屬新城疫病毒引起的雞高度接觸性、急性傳染病。對養(yǎng)雞業(yè)有著巨大的威脅。目前國內(nèi)外對本病的控制仍沒有完全解決，由于對雞群用藥的限制及其存在的弊端，消毒劑的應用已成為養(yǎng)殖場對新城疫等病毒防控的有效途徑［1］。

戊二醛苯扎溴銨溶液是由洛陽惠中獸藥有限公司研制生產(chǎn)的新型復方消毒液，主要成分為戊二醛、苯扎溴銨。為了科學評價戊二醛苯扎溴銨溶液對雞新城疫病毒的定性殺滅效果，參考中華人民共和國農(nóng)業(yè)部《獸用消毒劑技術規(guī)范》（1992年版），國家獸用藥品工程技術研究中心考察了其對雞新城疫病毒的定性殺滅效果試驗，現(xiàn)將試驗報告總結(jié)如下。

1　試驗材料

毒株：雞新城疫（ND）病毒LaSota株，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

主要儀器：電子分析天平，生物安全柜，移液器，水浴鍋，旭升全自動電腦孵化機。

試劑：戊二醛苯扎溴銨溶液，批號20110901，洛陽惠中獸藥有限公司生產(chǎn)。

滅菌生理鹽水：中和劑（甘氨酸0.5%+吐溫-80 4%）；磷酸鹽緩沖液（0.03 mol/L，pH值為7.28）。

SPF雞胚：由普萊柯股份有限公司孵化室提供。

2　試驗內(nèi)容及方法

2.1中和劑、消毒劑及中和產(chǎn)物對雞胚的安全性試驗將中和劑原液、800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液、800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液與中和劑作用后的中和產(chǎn)物分別接種5枚雞胚，0.1 mL/胚，以驗證中和劑、消毒劑及中和產(chǎn)物對雞胚是否安全。

2.2中和劑和中和產(chǎn)物對新城疫病毒的影響

將中和劑與病毒作用液、中和產(chǎn)物與病毒作用液分別用PBS進行10倍系列稀釋，分別取10-2、10-3、10-4稀釋度各接種5枚雞胚，0.1 mL/胚。將接種過的雞胚置37℃培養(yǎng)，24 h以內(nèi)死亡的雞胚去掉，24 h以后死亡的雞胚及時取出，并記錄死亡情況，至120 h全部取出。取尿囊液進行血凝（HA）試驗。同時設病毒液對照組。以驗證中和劑和中和產(chǎn)物對雞新城疫病毒有無影響。

2.3對新城疫病毒的定性殺滅試驗方法［2］分別取800、1 600、3 200倍稀釋戊二醛苯扎溴銨溶液各2.5 mL，分別加入2.5 mL（含2×105EID50）雞新城疫病毒液中，混勻。

在水浴20℃±1℃的條件下，分別于5、10、15、30、60 min時取上述溶液1 mL，加入9 mL中和劑，混勻，作用10 min。立即分別取各混合液接種9日齡易感雞胚，0.1 mL/胚，各濃度組各作用時間分別接種5枚雞胚，將接種的雞胚置37℃繼續(xù)孵化120 h。同時設陽性對照組和陰性對照組。

每日照蛋，棄去24 h以前死亡的雞胚，取24～120 h的死亡雞胚和活胚，逐個取尿囊液做紅細胞凝集（HA）試驗［5］，凝集價≥1∶16（微量法）者判為感染（HA陽性）。HA陰性表示雞胚未被感染。根據(jù)感染數(shù)計算EID50并計算病毒滅活率。

2.4結(jié)果判定標準血凝（HA）陰性表示病毒滅活，HA陽性表示病毒未滅活，消毒劑對照組和消毒劑中和產(chǎn)物對照組應無雞胚死亡。

以10次結(jié)果中以80%雞胚均為陰性的消毒液最低濃度為滅活NDV有效濃度，以該濃度消毒劑滅活病毒的最短時間為最快有效時間。

3　試驗結(jié)果

3.1中和劑、消毒劑及中和產(chǎn)物對雞胚的安全性試驗結(jié)果中和劑、消毒劑和中和產(chǎn)物通過進行雞胚尿囊腔接種，觀察120 h均未見雞胚死亡，表明中和劑濃度為0.5%甘氨酸+4%吐溫-80、800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液以及800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液同中和劑的作用產(chǎn)物對雞胚是安全的。

3.2中和劑及中和產(chǎn)物對雞新城疫病毒的影響試驗結(jié)果中和劑及中和產(chǎn)物與雞新城疫病毒作用后測得的病毒含量均與病毒對照組測得的病毒含量一致，表示中和劑和中和產(chǎn)物對雞新城疫病毒無影響。

3.3戊二醛苯扎溴銨溶液對雞新城疫病毒滅活測定結(jié)果根據(jù)表1中結(jié)果及結(jié)果判定標準，戊二醛苯扎溴銨溶液在1 600倍稀釋，作用5 min，10次結(jié)果中有6次對新城疫病毒的滅活率達80%，其余4次滅活率達100%。說明戊二醛苯扎溴銨溶液對新城疫病毒的最低有效濃度為1 600倍稀釋，該濃度對新城疫病毒的最快有效時間為5 min。

表1　戊二醛苯扎溴銨溶液對雞新城疫病毒滅活測定結(jié)果

4　結(jié)論

戊二醛苯扎溴銨溶液在20℃水浴中，對雞新城疫病毒的最低有效濃度為1 600倍稀釋，該濃度對新城疫病毒的最快有效時間為5 min。

5　討論

5.1本試驗中濃度為0.5%甘氨酸+4%吐溫-80的中和劑、800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液，經(jīng)雞胚尿囊腔內(nèi)接種0.1 mL，雞胚不發(fā)生死亡，且發(fā)育正常，這與武衛(wèi)平［4］等的研究結(jié)果一致。同時800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液與中和劑作用后中和產(chǎn)物對雞胚也是安全的。

5.2在消毒學研究中，除消毒劑性質(zhì)不同所致滅活差別外，就同一消毒劑而言，其有效使用濃度與接種時間乃是決定消毒成敗的關鍵所在［5］。采用懸浮殺滅試驗，通過雞胚感染研究表明，戊二醛苯扎溴銨溶液在同一作用時間點，隨著作用濃度的升高，殺滅率也隨之增強。在同一濃度條件下，隨著作用時間的延長，殺滅率也隨之提高。這同多數(shù)消毒劑對細菌的殺菌效果一樣［6-10］，戊二醛苯扎溴銨溶液對病毒的殺滅效果也是隨著濃度的增加、作用時間延長而增強。

［1］劉艷華，溫芳，王學偉，等.獸用消毒劑二氧化氯檢測方法的研究進展［J］.中國獸藥雜志，2011，45（2）：51-54.

［2］中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.獸用消毒劑鑒定技術規(guī)范［S］.北京：（1992）農(nóng)（牧藥）字第101號，1992.

［3］中華人民共和國國家標準，新城疫診斷技術［M］.GB/T 1 6550-2008.

［4］武衛(wèi)平，禚寶山，李富金，等.復方戊二醛消毒劑對雞禽流感病毒（H9N2株）殺滅效果的研究［J］.中國獸藥雜志，2005；39（12）：25-27.

［5］韓友圻.消毒劑滅活病毒影響因素的研究進展［J］.中國消毒學雜志，1993；10（3）：168-169.

［6］趙春蘭，喬玫，宋嘵紅，等.復方強化戊二醛消毒液對細菌芽孢的殺菌效果觀察［J］.中國消毒學雜志，2006；23（3）：233.

［7］李綏晶，王莉.復方戊二醛消毒劑殺菌效果的試驗觀察［J］.中國消毒學雜志，2003；20（3）：171.

［8］韓艷淑，劉繼敏，董輝，等.戊二醛復方消毒劑性能的試驗觀察［J］.中國消毒學雜志，2002；19（3）：184.

［9］張亞尼，宋暉，張福娥，等.5種含氯消毒劑殺菌效果及能量試驗研究［J］.中國消毒學雜志，2005；22（2）：147.

［10］徐燕，王玲，談智，等.復方過氧化氫消毒劑殺滅微生物效果的試驗研究［J］.中國消毒學雜志，2005；22（2）：361.

S852.65+9.5

B

0529-6005（2016）04-0105-02

2015-03-04

高富紅（1980-），女，獸醫(yī)師，碩士，從事新獸藥研發(fā)工作，E-mail：dkxgfh@sohu.com