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用聚乙二醇-600(PEG-600)制作小鼠整體標(biāo)本

2016-11-15 12:46張?bào)阌?/span>羅繼龍白志坤
中國(guó)獸醫(yī)雜志 2016年4期
關(guān)鍵詞:福爾馬林塑化聚乙二醇

張?bào)阌?,陳 宇,高 瑩,徐 博,羅繼龍,白志坤

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)醫(yī)學(xué)學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150030)

用聚乙二醇-600(PEG-600)制作小鼠整體標(biāo)本

張?bào)阌辏愑?,高瑩,徐博,羅繼龍,白志坤

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)醫(yī)學(xué)學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150030)

為了探索替代福爾馬林制作標(biāo)本的基本方法,采用聚乙二醇(PEG)浸漬法制作經(jīng)久耐用、適于獸醫(yī)教學(xué)的解剖標(biāo)本。其基本方法是先將標(biāo)本在福爾馬林固定后,經(jīng)過(guò)流水沖洗,在梯度聚乙二醇-600中浸漬。通過(guò)使用這種方法制作出了小鼠整體標(biāo)本(PEG浸漬的標(biāo)本),可以存儲(chǔ)在塑料袋或箱子中,具有抵抗真菌和細(xì)菌的功效,而且不會(huì)對(duì)皮膚產(chǎn)生刺激性,已在獸醫(yī)解剖教學(xué)中成功地使用。

聚乙二醇(PEG);標(biāo)本;教學(xué);獸醫(yī)解剖

自甲醛的發(fā)明以來(lái),解剖標(biāo)本的永久的存儲(chǔ)幾乎沒(méi)有什么困難,只要將標(biāo)本儲(chǔ)存在大型儲(chǔ)罐內(nèi),蓋子擰緊,避免甲醛的蒸發(fā)就可。但由于甲醛的毒性和致癌作用,在使用標(biāo)本前標(biāo)本必須用流水沖洗24 h,這促使研究人員不斷地嘗試其他的無(wú)副作用的替代物質(zhì)[1-2]。目前,商業(yè)化生產(chǎn)耐用的解剖教學(xué)標(biāo)本的方法主要為生物塑化[3]。但由于其設(shè)備和所需藥品較為昂貴,許多解剖學(xué)教學(xué)機(jī)構(gòu)一直在尋找比生物塑化更便宜、耐用,可行、用于生產(chǎn)的解剖標(biāo)本制作方法。其中的一種替代方法就是聚乙二醇(PEG)保存法,其與生物塑化標(biāo)本相比因具有更容易制作又便宜。自20世紀(jì)七十年代以來(lái),已被越來(lái)越廣泛用于制作組織切片。

現(xiàn)介紹我們使用聚乙二醇(PEG)制成的小鼠整體解剖標(biāo)本的一點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)。

1 材料與方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明系小鼠由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,經(jīng)乙醚深度麻醉致死,并向腹腔內(nèi)注射少量福爾馬林溶液后,浸泡于5%福爾馬林溶液中數(shù)天或數(shù)周。反復(fù)研究表明,福爾馬林滲入組織的速度大約是每天1 cm,以此來(lái)估計(jì)固定的持續(xù)時(shí)間約為1周。取出小鼠用流水沖洗24 h后,根據(jù)教學(xué)需求仔細(xì)解剖,并使其暴露一側(cè)腹腔器官,并對(duì)器官清空和清洗。然后將小鼠放于3%過(guò)氧化氫溶液中漂白24 h。漂白后的標(biāo)本要再次用流水沖洗24 h之后,放于25%~100%梯度PEG-600(聚乙二醇-600),光復(fù)精細(xì)化工研究所,天津)中浸漬。為了達(dá)到更好的浸漬效果,可用不銹鋼吊籃將小鼠浸沒(méi)在PEG溶液中。在每種濃度中浸漬時(shí)間可以控制在7 d左右,直到100%PEG時(shí)可以延長(zhǎng)時(shí)間。當(dāng)沒(méi)有更多的水流動(dòng)時(shí),說(shuō)明完成脫水。浸漬時(shí),PEG溶液可更換數(shù)次。在完全飽和后,取出容器中的標(biāo)本,并小心地用吸水紙擦去過(guò)量的PEG溶液,將其放置在濾紙上,在避光房間干燥數(shù)天。

2 結(jié)果

圖1 小鼠整體PEG浸漬標(biāo)本

通過(guò)使用聚乙二醇-600浸漬法,高品質(zhì)的小鼠整體標(biāo)本被制作出來(lái),如圖1所示。小鼠標(biāo)本毛皮保持著原有的光滑色澤,內(nèi)臟清晰。干燥后,標(biāo)本變軟。如此浸漬的樣本外觀類(lèi)似于它們的天然狀態(tài),栩栩如生,適合在教學(xué)過(guò)程中使用。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間放置并未發(fā)現(xiàn)腐敗和蟲(chóng)蛀的現(xiàn)象,因而無(wú)需額外的保養(yǎng)。這種方法的另一大優(yōu)點(diǎn)是處理時(shí)間較短,標(biāo)本最快可以在2個(gè)月內(nèi)完成。生物塑化標(biāo)本的制作時(shí)間,則較長(zhǎng)。PEG標(biāo)本保存在一個(gè)開(kāi)放的環(huán)境中,一段時(shí)間后他們就會(huì)吸濕,所以它們不可能完全干燥。建議制作好的標(biāo)本放在塑料袋中儲(chǔ)存最合適,在標(biāo)本用于教學(xué)后,應(yīng)盡快重新包裝。

3 討論

動(dòng)物尸體在動(dòng)物醫(yī)學(xué)及人醫(yī)教學(xué)中有著不可替代的作用,但教學(xué)人員和學(xué)生一直受到防腐劑甲醛的侵害,因此找到好的可替代的方法是人們長(zhǎng)期的期望[4-5]。PEG浸漬標(biāo)本和生物塑化標(biāo)本是保存標(biāo)本的兩種不同方法,兩者有區(qū)別又有共同之處。這兩種技術(shù)之間的差別是由不同材料確定的。PEG是用醇(聚乙二醇),而生物塑化則用硅膠;PEG浸漬過(guò)程中,醇不會(huì)發(fā)生聚合反應(yīng),因此標(biāo)本是軟的,而硅膠會(huì)發(fā)生聚合反應(yīng),在塑化中會(huì)變硬;使用哪種方法很大程度上決定于標(biāo)本制作的目的。在一般情況下,當(dāng)需要比較靈活或制備可以擴(kuò)大的中空器官時(shí),可以使用PEG,例如PEG浸漬關(guān)節(jié)標(biāo)本,使其靈活,可移動(dòng)。同時(shí),出于教學(xué)目的以及更好表現(xiàn)鄰近結(jié)構(gòu),可以用水彩或油畫(huà)顏料上色。PEG浸漬的中空臟器可以被打開(kāi),這樣你就可以看一下里面的成分,尤其對(duì)于展示狗、貓、豬或馬的腹腔的黏膜的不同外觀特別有用。此外,由于PEG-浸漬樣品可切片,可以用于組織學(xué)研究觀察[6]。如果在浸漬前,做各種不同的預(yù)處理,可以使樣品滿足各種使用目的。例如,血管和淋巴管可填充有顏色的樹(shù)脂,使血管和神經(jīng)的分布可以清晰可見(jiàn)。不同的體腔可以注入不同顏色,以更好的展示其分布方向。如果PEG浸漬標(biāo)本被妥善處理的話,是可能長(zhǎng)期使用的,因?yàn)樗鼈兡艿挚拐婢图?xì)菌的能力。PEG浸漬標(biāo)本在外觀和形狀上與生物塑化標(biāo)本相同,但PEG技術(shù)比生物塑化標(biāo)本便宜得多,并且需要較少的技術(shù)設(shè)備。一瓶為500 mL PEG-600成本僅為32元,而且PEG液體可循環(huán)使用。要想回收PEG的話,只需要將混合物加熱到90℃,排出水蒸汽即可。

4 小結(jié)

PEG和生物塑化方法都有自己的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。相較于生物塑化技術(shù),PEG-浸漬更有資金優(yōu)勢(shì),標(biāo)本有更大的靈活性;更為有利的是PEG浸漬的標(biāo)本沒(méi)有毒性[7-8],并具有較高的皮膚親和性[9]。因此PEG浸漬標(biāo)本制作技術(shù)是一種非常有用的保存動(dòng)物尸體和器官的方法,使用可達(dá)數(shù)年。

志謝:本實(shí)驗(yàn)是在小組成員共同配合下完成的。東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院家畜解剖學(xué)教研室梁建廣高級(jí)實(shí)驗(yàn)師給予幫助。

[1]李紅霞,黃厚今.甲醛的毒性研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè)),2006,02:114-117.

[2]謝穎.甲醛的生殖毒性[J].工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病,2002,02:118-120.

[3]張紹祥,劉正津,何光箎.生物塑化技術(shù)(Plastination)[J].中國(guó)臨床解剖學(xué)雜志,1996,01:67-70.

[4]白志坤.尸體解剖作為教學(xué)方法:過(guò)去、現(xiàn)在和將來(lái)[J].四川解剖學(xué)雜志,2008,02:44-46.

[5]白志坤,曹允考,羅繼龍,等.學(xué)生期望的家畜解剖學(xué)教學(xué)方法[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2010,15:171-172.

[6]朱洪亮,劉向東,盧永根,等.研究植物胚囊中微管的PEG切片法的改進(jìn)[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2001,04:52-54.

[7]張偉,劉琳婕,何仲貴.聚乙二醇在藥物制劑中的應(yīng)用[J].中國(guó)藥劑學(xué)雜志,2007,02:67-74.

[8]李?lèi)?ài)貴,鄧聯(lián)東,董岸杰.聚乙二醇在新型藥物制劑中的應(yīng)用[J].高分子通報(bào),2004,04:96-101.

[9]呂邵娃,葉揚(yáng)帆,趙權(quán)濤,等.新型聚乙二醇穴位藥貼的制備工藝研究[J].哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2012,05:520-522.

S859.79+7

A

0529-6005(2016)04-0042-02

2014-10-26

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心開(kāi)放項(xiàng)目(06600023c);黑龍江省高等教育學(xué)會(huì)規(guī)劃課題(14G043)

張?bào)阌辏?993-),女,本科生,就讀于動(dòng)物醫(yī)學(xué)專業(yè),E-mail:raining931014@hotmail.com

陳宇(1992-),女,本科生,就讀于動(dòng)物醫(yī)學(xué)專業(yè),E-mail:1373768879@qq.com

陳宇與張?bào)阌陮?duì)本文具有同等貢獻(xiàn)

白志坤,E-mail:baizhikun@neau.edu.cn

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