李　佳　李慢中　鄧曉露　鄒海艷

(中醫(yī)絡(luò)病研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，北京，100069)

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不同產(chǎn)地珠子參的生藥學(xué)鑒別和含量測定

李佳李慢中鄧曉露鄒海艷

(中醫(yī)絡(luò)病研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，北京，100069)

目的：對云南、貴州、甘肅產(chǎn)的珠子參藥材進(jìn)行鑒別和含量測定。方法：應(yīng)用性狀、顯微及薄層色譜方法對不同產(chǎn)地珠子參藥材進(jìn)行鑒別，顯微鑒別方面采用石蠟切片及粉末臨時(shí)制片進(jìn)行顯微特征觀察；采用高效液相色譜法測定了藥材中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量。結(jié)果：不同產(chǎn)地珠子參藥材形狀、顏色和晶體數(shù)量等特征具有一定差異，云南、貴州和甘肅產(chǎn)3個(gè)批次藥材的含量分別為5.55%、1.98%和1.96%。結(jié)論：3個(gè)產(chǎn)地的珠子參藥材的性狀、顯微特征及竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量差異較大，其中以云南產(chǎn)藥材的質(zhì)量較好。

珠子參；性狀鑒別；顯微鑒別；含量測定

珠子參來源于五加科(Araliaceae)植物珠子參PanaxjaponicusC.A.Mey.var.major(Burk.)C.Y.Wu et K.M.Feng 或羽葉三七PanaxjaponicusC.A.Mey.var.bipinnatifidus(Seem.)C.Y.Wu et K.M.Feng的干燥根莖，為歷版《中華人民共和國藥典(以下簡稱《中國藥典》)和《云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》收載品種。珠子參別名紐子七、疙瘩七、野三七等[1]，其味苦，性甘、微寒，歸肝、肺、胃經(jīng)，具有補(bǔ)肺養(yǎng)陰，祛癖止痛，止血等功效[2]，主要在我國少數(shù)民族地區(qū)使用，為苗族、彝族、白族等多民族共用藥。現(xiàn)代研究表明，珠子參能增強(qiáng)機(jī)體造血功能和免疫功能[3-4]，具有鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜[5]、抗腫瘤、抗實(shí)驗(yàn)性潰瘍，抗心肌缺血[6-7]等活性，日益受到研究者的關(guān)注。珠子參藥材主產(chǎn)于云南，在陜西、四川、甘肅、貴州、西藏等地均有分布[8]，不同地區(qū)所產(chǎn)藥材質(zhì)量差異較大，本文分析了珠子參的本草記載，并采用2010版《中國藥典》方法，對云南、貴州和甘肅3個(gè)產(chǎn)地的珠子參藥材進(jìn)行了鑒別和HPLC含量測定，為保證藥材質(zhì)量和臨床療效提供了參考。

1　藥用歷史

珠子參因其根莖呈串珠狀或類圓球形而得名，始見于明代蘭茂所著的《滇南本草》：“珠子參，味甘、微苦，性溫、平。止血生肌，……。故土方：用珠子參為末，捻刀傷瘡，收口甚速”[9]。此后，《本草從新》，《本草綱目拾遺》及《天寶本草》等本草中均有記載。珠子參在本草考證上一直存在爭議，歷代本草中記載的珠子參原植物主要有兩類，除人參屬植物外，桔?？泣h參屬植物蓮座狀黨參CodonopsisrosulataW.W.Sm和雞蛋參CodonopsisconvolvulaceaKurz.及其變種也做珠子參使用[10]，目前整理出版的《滇南本草》中珠子參植物附圖源于《植物名實(shí)圖考》中記載的“珠子參”，也為桔?？泣h參屬植物雞蛋參。但余慶遠(yuǎn)著《維西見聞紀(jì)》中稱珠子參：“莖葉皆類人參……味苦而性燥，遠(yuǎn)不及人參也”；《本草綱目拾遺》中記載：“《救生苦?！氛f‘血癥用之，可代三七’”，而桔?？齐u蛋參類植物主要有滋補(bǔ)強(qiáng)壯的功效，不具有活血化瘀作用，因此，有學(xué)者認(rèn)為，《滇南本草》歷經(jīng)各代的增訂、補(bǔ)注與傳抄，有可能出現(xiàn)原植物錯誤，其所記載的珠子參應(yīng)為五加科人參屬植物[10]。

2　實(shí)驗(yàn)材料

2.1儀器與材料Agilent 1200高效液相色譜儀(配有四元泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱和DAD檢測器)；HW SY11-K電熱恒溫水浴(北京市長風(fēng)儀器儀表公司)；101-OAB型電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司)；TK-218型恒溫?cái)偲酒瑱C(jī)(湖北泰維醫(yī)療科技有限公司)；Thermo SHANDON FINESSE 325(北京宏嘉泰業(yè)科技發(fā)展有限公司)、OLYMPUS偏光顯微鏡(BX61+DP72)，萬分之一電子天平(德國Sartorius公司)。

2.2受試藥物竹節(jié)參皂苷Ⅵa對照品(含量測定用，批號111861-201001)，購于中國食品藥品檢定研究院，人參皂苷R0對照品(含量測定用，批號14033108)購于成都普瑞法科技開發(fā)有限公司；三批珠子參藥材分別購于云南昆明新螺獅灣藥材市場，四川荷花池藥材市場和蘭州黃河藥材市場，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院張貴君教授鑒別為五加科植物珠子參PanaxjaponicusC.A.Mey.var.major(Burk.)C.Y.Wu et K.M.Feng的干燥根莖。乙腈為色譜純(美國fisher scientific公司)，其他試劑為分析純，水為娃哈哈純凈水。

3　實(shí)驗(yàn)方法

3.1組織橫切制片取珠子參藥材按常規(guī)石蠟法切片，經(jīng)固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、烘干、脫蠟步驟后，以番紅和快綠染色，制成永久石蠟切片，顯微鏡下觀察。

3.2粉末制片將珠子參藥材粉碎，過60目篩，取適量粉末于載玻片上，水合氯醛透化，顯微鏡下觀察。

3.3薄層色譜分別取3個(gè)產(chǎn)地的珠子參藥材粉末1.0 g，加甲醇30 mL，超聲處理40 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL加熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3次(20 mL，15 mL，15 mL)、合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL加熱使溶解，作為供試品溶液。另取竹節(jié)參皂苷Ⅳa對照品、人參皂苷R0對照品，加甲醇制成每1 mL各含2 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述3種溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(5∶10∶0.5∶0.3∶3.5)上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365 nm)下檢視。

3.4含量測定色譜條件：Agilent zorbax XDB C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈-0.2%磷酸水溶液(35∶65)為流動相；檢測波長203 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量20 μL。對照品溶液的制備：取竹節(jié)參皂苷Ⅳa對照品適量，精密稱定，加60%乙醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得。供試品溶液的制備：分別取三批竹節(jié)參藥材粉末約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL稱定重量，超聲提取40 min，補(bǔ)足減失的重量，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，既得。

4　結(jié)果

4.1藥材性狀云南產(chǎn)珠子參呈圓錐形和扁圓球形，混有節(jié)間碎段。長0.5～2 cm，直徑0.5～2.5 cm。表面淡黃白色、淡黃色至黃棕色，有明顯的溝槽狀縱皺紋，膨大部分的一側(cè)或兩側(cè)有殘存細(xì)的節(jié)間或有細(xì)小的不定根痕，偶有圓形凹陷的莖痕。質(zhì)堅(jiān)硬，斷面較平坦，黃白色，有黃色點(diǎn)狀樹脂道。氣微，味苦微甘。

貴州和甘肅產(chǎn)珠子參藥材性狀與云南產(chǎn)藥材相似，主要區(qū)別在于藥材多呈不規(guī)則菱角形，大小懸殊，表面顏色較深，為棕褐色或黃褐色，疣狀突起明顯，除有溝槽狀縱紋外，有明顯的皺縮狀紋理。

圖1　珠子參藥材圖

4.2顯微鑒別

4.2.1根莖橫切面云南產(chǎn)珠子參為木栓層為5～6層細(xì)胞。皮層稍窄，外側(cè)為數(shù)列厚角細(xì)胞。維管束為無限外韌型，7～10束斷續(xù)呈環(huán)狀排列，射線寬。韌皮部有多數(shù)樹脂道存在，呈類圓形。形成層明顯。木質(zhì)部束呈放射狀排列，導(dǎo)管類圓形及類多角形。中央有髓，約占橫切片的1/2，薄壁細(xì)胞含有草酸鈣簇晶，并含淀粉粒。見圖1-A。

與云南產(chǎn)珠子參比較，貴州和甘肅產(chǎn)藥材根莖橫切片主要區(qū)別在于，貴州產(chǎn)珠子參藥材木栓層為5～8層細(xì)胞，維管束常7束斷續(xù)呈環(huán)狀排列，髓部較小，約占橫切片的1/3；甘肅產(chǎn)珠子參木栓層為6～10層細(xì)胞，維管束10～12束斷續(xù)呈環(huán)狀排列，髓部較小，約占橫切片的1/2～2/3；草酸鈣簇晶眾多，尤其是皮層及射線部位較多。見圖1-B和1-C。

4.2.2粉末特征云南產(chǎn)珠子參藥材粉末呈淡黃白色；木栓細(xì)胞表面觀呈多角形，壁薄，草酸鈣簇晶較多，棱角多寬鈍，少數(shù)較尖。厚角細(xì)胞長圓形或類多角形，無色。樹脂道呈長方形或細(xì)管狀，內(nèi)含淡黃至棕黃色分泌物。淀粉粒眾多，多為單粒，類球形、卵形或橢圓形，臍點(diǎn)點(diǎn)狀、裂隙狀，層紋不明顯，復(fù)粒由2～8個(gè)分粒組成，導(dǎo)管多為網(wǎng)紋，可見螺紋及梯紋導(dǎo)管。見圖3。

與云南產(chǎn)珠子參相比，貴州產(chǎn)珠子參草酸鈣簇晶較少，棱角多寬鈍，淀粉粒復(fù)粒由2～4個(gè)分粒組成，甘肅產(chǎn)珠子參草酸鈣簇晶眾多，棱角多寬鈍，淀粉粒復(fù)粒由2～4個(gè)分粒組成。

圖2　3個(gè)產(chǎn)地珠子參藥材根莖橫切面圖

注：A云南;B貴州;C甘肅。1.木栓層；2.皮層；3.韌皮部；4.形成層；5.木質(zhì)部；6.髓部；7.樹脂道；8.草酸鈣簇晶。

4.2.3薄層鑒別上述3個(gè)產(chǎn)地的竹節(jié)參藥材薄層色譜圖見圖4，由圖可知，3個(gè)批次的藥材的供試品色譜中，在與人參皂苷R0(Rf=0.20)和竹節(jié)參皂苷Ⅳa(Rf=0.48)對照品相應(yīng)的位置上，均顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

圖3　珠子參粉末圖

注：1.草酸鈣簇晶；2.厚角細(xì)胞；3.導(dǎo)管；4.樹脂道；5.木栓細(xì)胞；6.淀粉粒。

圖4　珠子參的薄層色譜圖

注：1.竹節(jié)參皂苷Ⅳa對照品；2.人參皂苷R0對照品；3.貴州產(chǎn)藥材；4.甘肅產(chǎn)藥材；5.云南產(chǎn)藥材。

4.2.4含量測定采用2010版《中國藥典》方法測定并計(jì)算3批珠子參藥材中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量，云南、貴州和甘肅產(chǎn)藥材的含量分別為5.55%、1.98%和1.96%，根據(jù)2010版《中國藥典》規(guī)定，珠子參中含竹節(jié)參皂苷Ⅳa不得少于3.0%，結(jié)果表明，除云南產(chǎn)藥材外，其余兩批藥材質(zhì)量均未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。

5　討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，云南、貴州和甘肅所產(chǎn)珠子參藥材從性狀在形狀、表面顏色上差別較大，不同產(chǎn)地珠子參顯微特征的差異主要體現(xiàn)在木質(zhì)部所占的面積和草酸鈣簇晶數(shù)量，其中甘肅產(chǎn)藥材約占橫切片的1/2～2/3；草酸鈣簇晶較多。

3個(gè)產(chǎn)地的竹節(jié)參藥材薄層色譜圖無明顯差異，但竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量差異較大，其中以云南產(chǎn)藥材含量較高，質(zhì)量較好。珠子參在我國民間藥用歷史悠久，長期以來主要依賴于野生資源，隨著資源的枯竭，近年來，在云南、貴州等地區(qū)開始人工栽培[11]，目前市場上，不同產(chǎn)地以及野生和栽培藥材品種并存，亟需對藥材質(zhì)量進(jìn)行控制，以有效地利用和開發(fā)該藥材。

[1]云南中草藥整理組.實(shí)用中草藥隨身手冊—云南中草藥[M].云南:云南人民出版社,2011:284.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:254-255.

[3]段徑云,陳瑞明.珠子參對血液和造血功能的影響[J].西北藥學(xué)雜志,1996,11(2):72-73.

[4]朱新華,后文俊,李存德.珠子參總皂甙對脾細(xì)胞增殖效應(yīng)影響的研究[J].昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1994,15(1):65-67.

[5]賀海波,石孟瓊,陳濤,等.珠子參水提物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2010,32(20):2224-2227.

[6]趙仁,趙毅,李東明,等.珠子參研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代中藥,2008,10(7):3-6.

[7]劉愛華,石孟瓊,楊文雁,等.珠子參總皂苷對大鼠心肌缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2013,18(11):1224-1232.

[8]Zhang S，Wang R，Zeng W，et al.Resource investigation of traditional medicinal plant Panax japonicus(T.Nees)C.A.Mey and its varieties in China[J].J Ethnopharmacol，2015(166):79-85.

[9]蘭茂著,于乃義,于蘭馥.《滇南本草》[M].云南:云南科技出版社,2004:513-514.

[10]張志清,曹蕾,宋亮,等.珠子參類藥物歷史沿革與應(yīng)用展望[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2012,33(9):68-71.

[11]趙毅,趙仁,宋亮,等.珠子參藥材品種概述及資源現(xiàn)狀調(diào)查[J].中國現(xiàn)代中藥,2011,13(1):11-17.

(2016-01-22收稿責(zé)任編輯：張文婷)

Pharmacognostical Study and Content Determination in Largeleaf Japanese Ginseng Rhizomes in Different Producing Areas

Li Jia，Li Manzhong,Deng Xiaolu,Zou Haiyan

(Beijing Key Lab of TCM Collateral Disease Theory Research,School of traditionalChineseMedicine,CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China)

Objective:To provide macroscopic and microscopic identification basis for the Largeleaf Japanese Ginseng Rhizomes in the main producing areas such as Yunnan,Guizhou and Gansu and determine some contents in them.Methods:Macroscopic and microscopic observation and TLC were used to authenticate the crude drugs,the content of chikusetsusaponin IVa in the materials were determined with HPLC.Results:The macroscopic and microscopic characteristics of the three batches of Largeleaf Japanese Ginseng Rhizome were different in shapes colors of surface,and numbers of the crystals.And the contents of chikusetsusaponin IVa were 5.55%(Yunnan),1.98%(Guizhou) and 1.96%(Gansu) respectively.Conclusion:The Largeleaf Japanese Ginseng Rhizomes from three producing areas showed different characteristics in macroscopic and microscopic identification,and the content of chikusetsusaponin IVa in the sample from Yunnan province is higher than the others.

Largeleaf Japanese Ginseng Rhizomes; Macroscopic Identification; Microscopic Identification；Determination

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號：81403095)；北京市屬高校青年拔尖人才培育項(xiàng)目(編號：CIT&TCD201404175；CIT&TCD201404184)；首都中醫(yī)藥護(hù)理專項(xiàng)(編號：14ZY15)

李佳(1974—)，女，副教授，博士，主要研究方向：中藥鑒定方法學(xué)，E-mail：yueliang2683@sina.com

鄒海艷(1974—)，女，副教授，博士，主要研究方向：中藥質(zhì)量控制，E-mail：bwzhy@sina.com

R284.1

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.09.061