王梓　遼寧省沈陽市中心血站檢驗(yàn)科?。ㄉ蜿枴?10000）

全自動(dòng)血型分析儀在血站血型檢測(cè)中的應(yīng)用

王梓遼寧省沈陽市中心血站檢驗(yàn)科（沈陽110000）

內(nèi)容提要： 目的：探討全自動(dòng)血型儀在血站血型工作中的應(yīng)用價(jià)值。方法：采用全自動(dòng)血型儀對(duì)11298例獻(xiàn)血者樣本進(jìn)行ABO、Rh（D）血型及鹽水不規(guī)則抗體鑒定，并與手工法對(duì)比。結(jié)果：11298份樣本全自動(dòng)血型儀ABO一次定型準(zhǔn)確率為99.9%（11287/11298），手工法ABO一次準(zhǔn)確定型率為99.7%（11268/11298），兩種方法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Rh（D）血型正確率均為100%；兩種方法比較O細(xì)胞凝集陽性率：0.08%、0.009%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：全自動(dòng)血型儀鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能永久保存；其實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)化，降低了人為錯(cuò)誤發(fā)生，并且更易于檢出不規(guī)則抗體，適于血站大批量血型檢測(cè)。

全自動(dòng)血型儀ABO血型Rh（D）鹽水不規(guī)則抗體

血型是血站檢測(cè)最重要的環(huán)節(jié)之一，血型鑒定的準(zhǔn)確與否直接關(guān)系到受血者的生命安全。本血站多年來一直采用紙片法鑒定ABO正反定型，檢測(cè)流程是由體采科檢驗(yàn)人員在采血前做正定型，檢驗(yàn)科標(biāo)本接收人員留取血袋樣本做正反定型，最后檢驗(yàn)科血型崗人員做血管樣本的ABO及Rh（D）血型鑒定。雖然三次血型檢測(cè)大大降低了血型鑒定的錯(cuò)誤率，但由于檢測(cè)過程人為操作且結(jié)果由人肉眼判斷，故人為因素不可避免地影響了最終鑒定結(jié)果。故本血站于2013年開始采用全自動(dòng)血型儀進(jìn)行血型檢測(cè)，并與傳統(tǒng)手工法平行試驗(yàn)比對(duì)。

1.材料與方法

1.1樣本來源

本站于2014年3月采集的11298份日常無償獻(xiàn)血者樣本。樣本用EDTA-K2抗凝。

1.2儀器與試劑

Hemotype全自動(dòng)血型分析儀（意大利GSG公司）；平板振蕩器（Heidolph公司）；一次性96孔U形板（北京漢泰旭和公司）；單克隆抗A抗B血型定型試劑（北京金豪）；人ABO反定型紅細(xì)胞試劑（北京金豪）；抗D（IgM+IgG）血型定型試劑（Dominion Biologcials Limited）；現(xiàn)代血站管理軟件檢驗(yàn)?zāi)K（唐山現(xiàn)代）；TECAN RSP 200全自動(dòng)加樣儀（瑞士TECAN公司）。

1.3方法

1.3.1ABO血型鑒定紙片法見《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》［1］；Rh（D）鑒定采用RSP加樣儀及96孔 U形板檢測(cè)。對(duì)于可疑、正反不符、O細(xì)胞凝集、Rh（D）陰性樣本送血型室用血型血清學(xué)方法確認(rèn)，方法參見文獻(xiàn)［2］。

1.3.2全自動(dòng)血型儀將紅細(xì)胞懸液30ul（在預(yù)稀釋微板孔內(nèi)加0.9%生理鹽水200ul，再加入6ul紅細(xì)胞混勻）和血漿30ul各3孔分配至96孔U形板內(nèi)，然后分別加入單克隆抗-A、抗-B血型試劑30ul、抗D血型試劑30ul以及ABO反定型紅細(xì)胞試劑30ul（每板可檢測(cè)16份樣本）；經(jīng)血型儀孵育、離心后震蕩兩次，然后放入判讀系統(tǒng)進(jìn)行拍照判讀；最后由軟件自動(dòng)匯總上傳結(jié)果到局域網(wǎng)。同樣對(duì)于可疑、正反不符、O細(xì)胞凝集、Rh（D）陰性樣本送血型室進(jìn)一步確認(rèn)。離心、振蕩、孵育參數(shù)設(shè)置見表1。

表1.離心、振蕩、孵育參數(shù)設(shè)置

1.4質(zhì)量控制每批樣本檢測(cè)前都用AB（+）、O（-）質(zhì)控血清（北京漢泰旭和公司）做ABO、Rh（D）血型試劑的符合性試驗(yàn)以控制試劑質(zhì)量。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行x2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

Hemotype全自動(dòng)血型儀與手工紙片法血型鑒定結(jié)果比較見表2、表3。由表2可見兩種方法比較ABO一次準(zhǔn)確定型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=8.35 P＜0.05）；由表3可見O細(xì)胞凝集差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=6.4 P＜0.05）。兩種方法Rh（D）鑒定都為100%。

表2.血型儀與手工法試驗(yàn)結(jié)果比較

表3.O細(xì)胞凝集與正反不符血型室鑒定結(jié)果比較

3.討論

血型鑒定的經(jīng)典方法是試管法，但此方法操作費(fèi)時(shí)費(fèi)力，難以大批量檢測(cè)樣本，故本血站一直采用紙片法檢測(cè)血型。雖然三次檢測(cè)以及在檢測(cè)過程中如遇任何疑難血型都必須送血型室做最終鑒定可以保證定型正確率，但紙片法結(jié)果的肉眼觀測(cè)，還是會(huì)給檢測(cè)帶來很大的錯(cuò)型風(fēng)險(xiǎn)。并且由于最終結(jié)果無法保存，也會(huì)給血型溯源帶來困難。

Hemotype全自動(dòng)血型儀的檢測(cè)原理即為試管法，使用U形微板代替試管，樣本和試劑分配完后離心，經(jīng)過第一次快速振蕩可使沒有凝集的紅細(xì)胞在微板孔內(nèi)均勻分布，再經(jīng)過第二次慢速振蕩，可使弱凝集微小顆粒再次聚攏至中央凝集點(diǎn)，以達(dá)到充分凝集的效果。Hmotype全自動(dòng)血型儀從加樣到最終判讀全部由電腦控制，實(shí)現(xiàn)了操作標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化，避免了人為錯(cuò)誤發(fā)生［3］。且其結(jié)果與實(shí)驗(yàn)室軟件系統(tǒng)連接，可自動(dòng)匯總、保存于計(jì)算機(jī)內(nèi)，便于核對(duì)，提高了工作效率和準(zhǔn)確率。

從表2看，全自動(dòng)血型儀對(duì)11298份樣本進(jìn)行ABO一次定型準(zhǔn)確率為99.9%，高于手工法99.7%，并且本研究全自動(dòng)血型儀法結(jié)果高于國(guó)內(nèi)許多文獻(xiàn)報(bào)道［4］，也高于國(guó)外一些文獻(xiàn)報(bào)道［5］［6］。Rh（D）血型一次定型準(zhǔn)確率均為100%。故全自動(dòng)血型儀做血型鑒定可靠性好。從表3看全自動(dòng)血型儀檢出的O細(xì)胞凝集經(jīng)血型室確認(rèn)后，其陽性率高于手工法（0.08%＞0.009%），說明全自動(dòng)血型儀做鹽水不規(guī)則抗體初篩更易發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體。而紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體是引起血型鑒定、交叉配血困難、輸血不良反應(yīng)的主要原因之一［7］。故檢出鹽水不規(guī)則抗體大大增加了輸血安全性。

全自動(dòng)血型儀法無法一次準(zhǔn)確定型有11例，重新經(jīng)血型儀鑒定后有8例樣本正反不符，3例為正常血型，其無法一次通過檢測(cè)的原因都是因?yàn)檫@3個(gè)血樣管內(nèi)有細(xì)小凝塊。故用全自動(dòng)血型儀進(jìn)行血型鑒定，血樣管須充分抗凝，未充分抗凝的樣本不僅會(huì)造成結(jié)果假陽性，還會(huì)使加樣針堵塞，給檢測(cè)工作帶來困難。［8］另外表3中手工法30例正反不符最后全部送血型室鑒定，其中只有一例是亞型，可見手工法中即使工作人員肉眼無法完全肯定結(jié)果即送血型室確認(rèn)，仍舊有2例亞型被漏檢，此時(shí)只有通過醫(yī)院交叉配血被發(fā)現(xiàn)［9］。而全自動(dòng)血型儀法正反不符經(jīng)血型室確認(rèn)有5例為正常血型，假陽性率占62.5%，歸納其原因有以下幾點(diǎn)：①微板有污染。②血樣未充分抗凝。③樣本溶血或脂血。④紅細(xì)胞抗原弱或丟失。⑤血清定型減弱或無反應(yīng)［10］。故使用血型儀時(shí)需注意以上幾點(diǎn)。

Hemotype全自動(dòng)血型儀每小時(shí)可檢測(cè)144例樣本，由于每個(gè)微形板上有16例樣本，故每1～16例樣本的檢測(cè)時(shí)間大概為7分鐘。對(duì)于少量樣本，血型儀在時(shí)間上是不具有優(yōu)勢(shì)的，但是目前本血站每天檢測(cè)量平均為300例血樣，所以使用全自動(dòng)血型儀可明顯提高本站工作人員的檢測(cè)效率。值得一提的是，無論是血樣還是試劑，全自動(dòng)血型儀的加樣量都遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于手工操作，這不僅便于本科室進(jìn)行血樣的其他檢測(cè)、留樣，而且在一定程度上節(jié)約了試劑成本。

當(dāng)然全自動(dòng)血型儀的結(jié)果圖片還是需要人工核對(duì)，所以在使用血型儀過程中仍需工作人員嚴(yán)格按照SOP操作，認(rèn)真核對(duì)，維護(hù)好儀器，提高責(zé)任心，避免因血型錯(cuò)誤而造成的輸血事故。

［1］葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.3版.南京:東大學(xué)出版社，2006:246.

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The Application of Hemotype Fully Automatic Blood Type Instrument in Blood Station Blood Type

WANG ZiShenyang Central Blood Station， Liaoning（Shenyang110000）

Objective: To discuss the application of Hemotype fully automatic blood type instrument in blood station blood type identification value. Methods: The 11298 specimens of blood donors was taken to conduct the ABO/Rh（D） blood typing and brine irregular antibody indentification by using the Hemotype fully automatic blood type instrument， and then compared with the manual method. Results: The accuracy rate of ABO blood type one time of the two methods was compared. The rate of the two methods were 99.9%（11287/11298）and 99.7%（11268/11298） respectively， The difference was statistically significant（P＜0.05）； The correct rate for Rh（D） type was 100%； The positive rate of O cell agglutination was 0.08%、0.009%respectively.The difference was statistically significant（P＜0.05）.Conclusion: The results ofthe fully automatic blood type instrument were accurate and reliable， and were able to last forever. It’s standard and automated in the operation process which might eliminate human error. Important， it’s easier to find the brine irregular antibodies. So the fully automatic blood type instrument applied to blood type batch testing for blood station.

fully automatic blood type instrument， abo blood typing， Rh（D）blood typing，brine irregular antibody

1006-6586（2016）10-0061-04

TH776

A

2016-05-24