華雨薇，李春陽*，王 帆，劉曉林（.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，江蘇 南京 2004；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，江蘇 南京 20095；.徐州林泉綠色食品飲料廠，江蘇 徐州 227）

藍(lán)莓葉多酚對高脂小鼠血脂及肝臟組織的影響

華雨薇1,2，李春陽1,*，王 帆1，劉曉林3
（1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，江蘇 南京 210014；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，江蘇 南京 210095；3.徐州林泉綠色食品飲料廠，江蘇 徐州 221711）

目的：通過給小鼠灌胃不同劑量的藍(lán)莓葉多酚，研究藍(lán)莓葉多酚對小鼠血脂及肝臟組織的影響。方法：60 只健康昆明小鼠隨機(jī)分為6 組，基礎(chǔ)組、高脂模型組、藍(lán)莓葉多酚低劑量組（50 mg/（kg·d））、藍(lán)莓葉多酚中劑量組（150 mg/（kg·d））、藍(lán)莓葉多酚高劑量組（300 mg/（kg·d））、立普妥陽性對照組（3 mg/（kg·d）），連續(xù)灌胃30 d，眼球取血，取出肝臟，測定血脂及肝臟指標(biāo)。結(jié)果：灌胃50 mg/（kg·d）的藍(lán)莓葉多酚，小鼠血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平較高脂模型組顯著降低（P＜0.05），且肝臟中谷草轉(zhuǎn)氨酶（glutamic oxalacetic transaminase，AST）活力較高脂模型組的（329.57±15.06） U/g pro下降了26.7%；當(dāng)藍(lán)莓葉多酚的劑量增加至150 mg/（kg·d）時，小鼠血清總膽固醇、甘油三酯（triglyceride，TG）、LDL-C水平顯著低于高脂模型組（P＜0.05），高密度脂蛋白膽固醇水平（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）顯著高于高脂模型組（P＜0.05），且肝臟中谷草轉(zhuǎn)氨酶的含量較高脂模型組顯著降低（P＜0.05）；當(dāng)藍(lán)莓葉多酚的劑量增加至300 mg/（kg·d）時，小鼠血清總膽固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白膽固醇水平較高脂模型組顯著降低（P＜0.05），高密度脂蛋白膽固醇水平較高脂模型組顯著升高（P＜0.05），且肝臟指數(shù)由高脂模型組的（4.98±0.33）%降至（4.19±0.14）%，肝臟中的谷草轉(zhuǎn)氨酶及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase，ALT）的活力分別比高脂模型組的（329.57±15.06）、（354.31±23.31） U/g pro下降了32.15%和22.96%。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藍(lán)莓葉多酚具有調(diào)節(jié)血脂及保護(hù)肝臟的功效。

藍(lán)莓葉多酚；血脂；肝臟

目前，高血脂、脂肪肝的發(fā)病率逐年上升，根據(jù)社區(qū)慢性疾病調(diào)查發(fā)現(xiàn)高血脂、冠心病的發(fā)病率分別為33.1%和10.7%[1]；根據(jù)全國健康普查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大城市的脂肪肝的發(fā)病率高達(dá)15%，在全球3.5億乙肝患者中我國約占1億。用于降脂保肝的藥物已有很多，但其存在潛在的副作用，因此從天然產(chǎn)物中獲取安全的活性成分用于降脂保肝成為關(guān)注的焦點(diǎn)。植物多酚作為植物的次生代謝產(chǎn)物，屬于天然的有機(jī)化合物，安全無毒。研究表明植物多酚具有預(yù)防心血管疾病[2]、抗癌[3-5]、降血脂[6]、降血糖[7]等功效。李建新等[8]通過給小鼠連續(xù)灌胃35 d的蘋果多酚發(fā)現(xiàn)總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平顯著降低，高密度脂蛋白水平顯著升高，且劑量越高，效果越顯著。連冠等[9]發(fā)現(xiàn)750 mg/（kg·d）的葡萄籽多酚可以顯著降低總膽固醇（total cholesterol，TC）和甘油三酯（triglyceride，TG）水平，并且可以使小鼠主動脈全長斑塊減少37%，有效預(yù)防動脈粥樣硬化。

藍(lán)莓又稱越橘果，屬杜鵑花科越橘屬落葉或常綠灌木，多年生的漿果類果樹，最早產(chǎn)于北美[10]。我國對于藍(lán)莓的研究起步相對較晚，始于20世紀(jì)80年代初[11]。藍(lán)莓中含有大量多酚類物質(zhì)，有研究證明藍(lán)莓多酚具有減肥降脂[12-13]、防止心肌細(xì)胞死亡等功效[14]，其可以干預(yù)HepG2細(xì)胞脂肪的積累，降低HepG2細(xì)胞的甘油三酯水平，對脂肪肝有防治作用[15]。藍(lán)莓葉作為藍(lán)莓副產(chǎn)物，含有大量多酚類物質(zhì)。李春陽等[16]通過體外抗氧化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)藍(lán)莓葉多酚具有較強(qiáng)的抗氧化活性，且抗氧化能力高于藍(lán)莓果渣，但有關(guān)藍(lán)莓葉多酚的降脂保肝作用的報(bào)道還比較少，因此該研究以小鼠為對象，通過建立高脂模型小鼠，研究藍(lán)莓葉多酚對小鼠血脂及肝臟組織的影響，為開發(fā)天然降脂保肝保健品提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

藍(lán)莓葉多酚（40%） 陜西森弗生物技術(shù)有限公司。

普通飼料、高脂飼料（基礎(chǔ)飼料＋10%豬油＋1%膽固醇） 南京圣民科研動物養(yǎng)殖場；總膽固醇試劑盒、甘油三酯試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶（glutamic oxalacetic transaminase，AST）試劑盒、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase，ALT）試劑盒 南京建成生物有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物

60 只清潔級（specific pathogen free，SPF）昆明小鼠，7 周齡，雌性，體質(zhì)量20 g左右，購自南京圣民科研動物養(yǎng)殖場。

1.3 儀器與設(shè)備

Berthold LB941微孔板式多功能分析儀 德國Berthold Technologies公司；GTR16-2高速冷凍離心機(jī)北京時代北利離心機(jī)有限公司。

1.4 方法

60 只SPF級昆明小鼠（雌性、體質(zhì)量20 g左右），控制室溫25 ℃，相對濕度60%，自由飲食（基礎(chǔ)飼料）飲水，每2 d換1 次墊料，飼養(yǎng)1周稱質(zhì)量后，隨機(jī)分為6 組，分別為基礎(chǔ)組、高脂模型組、藍(lán)莓葉多酚低劑量組、藍(lán)莓葉多酚中劑量組、藍(lán)莓葉多酚高劑量組、立普妥陽性對照組。除基礎(chǔ)組喂食普通飼料，其他各組均喂食高脂飼料。各組通過灌胃的方式給藥，藍(lán)莓葉多酚低、中、高各組劑量分別為50、150、300 mg/（kg·d），立普妥的劑量為3 mg/（kg·d）[17]?；A(chǔ)組和高脂模型組灌胃生理鹽水。每天灌胃1 次，每次1 mL，每周稱質(zhì)量。連續(xù)灌胃30 d后，稱質(zhì)量，禁食不禁水24 h后稱質(zhì)量，眼球取血，處死小鼠，取出肝臟組織，稱質(zhì)量，制備10 g/100 mL勻漿液，按各試劑盒說明測定谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的含量。同時血液以3 000 r/min、4 ℃離心10 min，取上清液按試劑盒說明測定TC、TG、LDL-C及HDL-C水平。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)表示為±s。

2 結(jié)果與分析

2.1 藍(lán)莓葉多酚對小鼠體質(zhì)量的影響

表1 藍(lán)莓葉多酚對小鼠體質(zhì)量的影響（±s，n==1100）Table 1 Effect of blueberry leaf polyphenols on body mass in mice (± ss,, n = 1100))

表1 藍(lán)莓葉多酚對小鼠體質(zhì)量的影響（±s，n==1100）Table 1 Effect of blueberry leaf polyphenols on body mass in mice (± ss,, n = 1100))

注：同列小寫字母不同表示差異顯著（P＜0.05）。下同。

組別初始體質(zhì)量/g最終體質(zhì)量/g體質(zhì)量增長率/%基礎(chǔ)組23.53±0.38a30.34±0.60a29.34±3.85a高脂模型組23.14±0.62a33.25±1.36b43.68±4.50b藍(lán)莓葉多酚低劑量組22.78±0.41a31.12±0.96ab36.71±3.88ab藍(lán)莓葉多酚中劑量組23.83±0.73a30.57±1.01ab28.53±3.84a藍(lán)莓葉多酚高劑量組24.16±0.52a30.83±1.29ab27.27±2.80a立普妥陽性對照組22.76±0.67a30.64±1.13ab34.69±3.52ab

由表1可知，連續(xù)灌胃30 d后，高脂模型組小鼠的體質(zhì)量明顯高于各組小鼠的體質(zhì)量，其增長的比例顯著高于基礎(chǔ)組，這是由于高脂飼料在基礎(chǔ)飼料的基礎(chǔ)上添加了10%的豬油和1%的膽固醇，因此高脂模型組體質(zhì)量增加速率較基礎(chǔ)組快。藍(lán)莓葉多酚中、高劑量組的體質(zhì)量增長率顯著低于高脂模型組（P＜0.05），說明藍(lán)莓葉多酚可以有效地控制體質(zhì)量的增長。

2.2 藍(lán)莓葉多酚對小鼠血脂水平的影響

表2 藍(lán)莓葉多酚對小鼠血脂水平的影響（x±s，n==1100）Table 2 Effect of blueberry leaf polyphenols on serum lipids in mice (± ss,, n = 1100))mmol/L

組別TCTGLDL-CHDL-C基礎(chǔ)組1.47±0.02ab1.05±0.12bc0.85±0.15a1.20±0.11bc高脂模型組2.30±0.09e2.52±0.23a2.80±0.27b0.71±0.11a藍(lán)莓葉多酚低劑量組1.96±0.13d2.35±0.25a0.79±0.20a0.96±0.13ab藍(lán)莓葉多酚中劑量組1.82±0.10cd1.71±0.23b1.42±0.24a1.16±0.25bc藍(lán)莓葉多酚高劑量組1.59±0.09ac1.18±0.05bc1.03±0.18a1.23±0.07bc立普妥陽性對照組1.22±0.12b0.79±0.08c1.36±0.28a1.51±0.10c

由表2可知，高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠血清TC、TG、LDL-C水平較基礎(chǔ)組均顯著升高（P＜0.05），HDL-C水平顯著低于基礎(chǔ)組（P＜0.05），說明高脂模型小鼠誘導(dǎo)成功。

從TC水平看，與高脂模型組相比，藍(lán)莓葉多酚3 個劑量組的TC水平都顯著降低（P＜0.05），藍(lán)莓葉多酚高劑量組與低劑量組差異顯著（P＜0.05），說明藍(lán)莓葉多酚劑量越高，降低TC水平效果越好；與陽性對照組相比，藍(lán)莓葉多酚3 個劑量組TC水平顯著高于陽性對照組，說明低、中、高劑量的藍(lán)莓葉多酚雖可以降低小鼠血清TC水平，但未能與藥物達(dá)到同等效果。

從TG水平看，與高脂模型組相比，藍(lán)莓葉多酚3個劑量組的TG水平都顯著降低（P＜0.05），并且中、高劑量組的TG水平顯著低于低劑量組（P＜0.05）；與陽性對照組相比，藍(lán)莓葉多酚高劑量組的TG水平與陽性對照組差異不顯著（P＞0.05），說明高劑量的藍(lán)莓葉多酚與藥物在降低TG水平方面達(dá)到同等效果。

從LDL-C水平看，與高脂模型組相比，藍(lán)莓葉多酚各個劑量組的LDL-C水平顯著降低（P＜0.05），且各個劑量組的LDL-C水平與陽性對照組沒有顯著性差異（P＞0.05），說明藍(lán)莓葉多酚各個劑量組在降低LDL-C水平方面與藥物無差異。

從HDL-C水平看，藍(lán)莓葉多酚中、高劑量組的HDL-C水平顯著高于高脂模型組（P＜0.05），說明藍(lán)莓葉多酚能升高小鼠HDL-C水平；與陽性對照組相比，差異不顯著（P＞0.05），說明與藥物達(dá)到同等效果。

2.3 藍(lán)莓葉多酚對小鼠肝臟指標(biāo)的影響

表3 藍(lán)莓葉多酚對小鼠肝臟指標(biāo)的影響（x =10）Table 3 Effect of blueberry leaf polyphenols on liver parameters in mice (x ± s, = 10)

由表3可知，藍(lán)莓葉多酚高劑量組與陽性對照組的肝臟指數(shù)、AST以及ALT活力較高脂模型組都顯著下降（P＜0.05），且低、中劑量組的AST活力也顯著低于高脂模型組（P＜0.05），說明藍(lán)莓葉多酚對小鼠肝臟有一定的保護(hù)作用；藍(lán)莓葉多酚高劑量組的肝臟指數(shù)與ALT活力與陽性對照組相比差異不顯著（P＜0.05），說明高劑量藍(lán)莓葉多酚對小鼠的肝保護(hù)作用能達(dá)到藥物同等效果。

3 討 論

高脂血癥是動脈粥樣硬化和冠心病等心血管疾病重要危險(xiǎn)因素，因此降低血脂水平對心血管疾病有著重要意義。本研究結(jié)果顯示，給小鼠灌胃藍(lán)莓葉多酚可顯著降低血清TC、TG、LDL-C水平，顯著升高HDL-C水平，說明藍(lán)莓葉多酚有顯著的降脂作用。這一結(jié)果與熊何健等[18]研究的給高脂膳食小鼠添加葡萄籽多酚，其TC、TG水平較不添加葡萄籽多酚的高脂膳食的小鼠低，葡萄籽多酚能顯著降低血脂水平一致。郭苗等[19]研究表明給高脂小鼠灌胃200～800 mg/（kg·d）的酒花多酚，其TC、TG、LDL-C水平顯著降低，HDL-C水平顯著升高，本研究結(jié)果與其一致。藍(lán)莓葉多酚與葡萄籽多酚、酒花多酚等都是植物多酚，該研究結(jié)果也證實(shí)了植物多酚具有降脂的功效。

有報(bào)道稱綠原酸可以增加脂聯(lián)素的分泌，抑制羥甲基戊二酰輔酶A還原酶和酰基輔酶A-膽固醇?；D(zhuǎn)移酶等膽固醇合成的關(guān)鍵酶的活性[20-21]，從而降低總膽固醇水平；黃康[22]通過給大鼠灌胃綠原酸發(fā)現(xiàn)綠原酸可以激活和脂肪酸氧化相關(guān)的基因PPARα mRNA表達(dá)，促進(jìn)脂肪分解代謝，進(jìn)一步說明綠原酸可以調(diào)節(jié)血脂水平；原花青素可以下調(diào)脂肪合成相關(guān)基因Fasn和Srebfl，從而引起甘油三酯積聚的減少，并且原花青素可以積聚在小腸腔內(nèi)，抑制小腸對膽固醇的吸收[23]，從而降低總膽固醇和甘油三酯水平。本研究結(jié)果顯示藍(lán)莓葉多酚能降低血清TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平，這可能是由于藍(lán)莓葉多酚中含有綠原酸、原花青素等有效成分，本課題組已有研究表明，藍(lán)莓葉多酚中含有原花青素、綠原酸及其衍生物、槲皮素及其衍生物[24]。

谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶是存在肝線粒體和細(xì)胞漿中的轉(zhuǎn)氨酶，是判斷肝臟功能的重要指標(biāo)。當(dāng)谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的含量增高，說明肝功能出現(xiàn)異常，本研究結(jié)果顯示藍(lán)莓葉多酚可以有效降低谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的含量，說明藍(lán)莓葉多酚對肝臟有保護(hù)作用。已有研究證實(shí)綠茶多酚能顯著降低谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的含量，保護(hù)肝臟[25]。藍(lán)莓葉多酚與茶多酚屬于植物多酚，其結(jié)構(gòu)中含有多酚類羥基，具有較強(qiáng)的抗氧化活性，可以清除自由基，減少肝細(xì)胞膜氧化損傷，從而達(dá)到保護(hù)肝臟的作用。但關(guān)于藍(lán)莓葉多酚對肝臟保護(hù)作用的確切機(jī)理還需要進(jìn)一步研究。

上述實(shí)驗(yàn)說明藍(lán)莓葉多酚可以有效調(diào)節(jié)小鼠血脂，保護(hù)小鼠肝臟，有進(jìn)一步研究的價值。藍(lán)莓葉多酚可以降低血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平，升高高密度脂蛋白膽固醇水平，降低肝臟谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量，能達(dá)到與藥物同等水平。因此，藍(lán)莓葉多酚可以作為降脂保肝成分應(yīng)用到保健品的開發(fā)。

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Effect of Blueberry Leaf Polyphenols on Blood Lipids and Liver Parameters in Hyperlipidemic Mice

HUA Yuwei1,2, LI Chunyang1,*, WANG Fan1, LIU Xiaolin3
(1. Institute of Agricultural Products Processing, Jiangsu Academy of Agricultural Science, Nanjing 210014, China; 2. College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 3. Xuzhou Linquan Green Food Beverage Factory, Xuzhou 221711, China)

Purpose: To explore the effect of blueberry leaf polyphenols (BLP) at different doses on blood lipids and liver parameters in mice. Methods: Totally 60 healthy mice were randomly divided into 6 groups, including basic group, hyperlipidemic model group, BLP low, middle and high dose groups (at 50, 150 and 300 mg/(kg·d), respectively), and positive control group (lipitor at 3 mg/(kg·d)). The administration lasted for 30 days, and then blood samples were harvested from the eyeballs, and the mice were sacrifi ced for the collection of liver tissues. The serum lipids and liver indexes were determined. Results: The mice administered with BLP at 50 mg/(kg·d) revealed signifi cant decreases in serum TC and LDL-C levels compared with the model mice (P < 0.05); meanwhile, the activity of glutamic oxalacetic transaminase (AST) in liver was lower by 26.7% than that ((329.57 ± 15.06) U/g pro) of the model mice. When the dose was increased to 150 mg/(kg·d), the levels of TC, TG and LDL-C in serum as well as AST activity in liver were signifi cantly decreased when compared with those in the model group (P < 0.05); in contrast, HDL-C was signifi cantly higher than that in the model group (P < 0.05). When the dose was further increased to 300 mg/(kg·d), serum TC, TG and LDL-C were reduced signifi cantly (P < 0.05), but serum HDL-C was increased in comparison with the model group (P < 0.05); the liver index was (4.19 ± 0.14)%, lower than that ((4.98 ± 0.33)%) of the model group, and the activities of AST and alanine transaminase (ALT) in live declined by 32.15% and 22.96% when compared with those in the model group, which were (329.57 ± 15.06) U/g pro and(354.31 ± 23.31) U/g pro), respectively. Conclusion: Blueberry leaf polyphenols have the potential for regulating blood lipids and protecting the liver.

blueberry leaf polyphenols; blood lipid; liver

10.7506/spkx1002-6630-201611039

TS201.4

A

1002-6630（2016）11-0222-04

華雨薇, 李春陽, 王帆, 等. 藍(lán)莓葉多酚對高脂小鼠血脂及肝臟組織的影響[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(11): 222-225. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201611039. http://www.spkx.net.cn

HUA Yuwei, LI Chunyang, WANG Fan, et al. Effect of blueberry leaf polyphenols on blood lipids and liver parameters in hyperlipidemic mice[J]. Food Science, 2016, 37(11): 222-225. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201611039. http://www.spkx.net.cn

2015-09-07

2014年江蘇省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（BK20141386）；2014年蘇北科技專項(xiàng)資金（富民強(qiáng)縣）面上培育項(xiàng)目（BN2014088）

華雨薇（1992—），女，碩士，研究方向?yàn)槭称芳庸づc安全。E-mail：709605606@qq.com

*通信作者：李春陽（1966—），男，研究員，博士，研究方向?yàn)闋I養(yǎng)與活性物質(zhì)、農(nóng)產(chǎn)品精深加工。E-mail：709605606@qq.com