劉 宏，李 賀，苑榮爽，孫靖輝，陳建光，王春梅（北華大學藥學院藥理教研室，吉林 吉林 132013）

北五味子總木脂素對C57BL/6小鼠高脂血癥的影響

劉 宏，李 賀，苑榮爽，孫靖輝，陳建光，王春梅*
（北華大學藥學院藥理教研室，吉林 吉林 132013）

目的：探討北五味子總木脂素（Schisandra Chinensis lignans，SCL）對高脂飲食誘導的高脂血癥小鼠血脂調節(jié)的影響。方法：雄性C57BL/6小鼠60 只，隨機抽取30 只設為正常對照組（CON）和正常＋SCL 組（CON＋SCL 100 mg/kg），每組15 只，以普通飼料喂養(yǎng)。其余30 只小鼠以高脂飼料喂養(yǎng)4 周，確定高脂血癥小鼠模型建立成功后，將小鼠隨機分為模型組和SCL治療組（模型＋SCL 100 mg/kg），全部小鼠連續(xù)灌胃給藥12周后檢測血清中總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）含量并計算動脈粥樣硬化指數（atherosclerosis index，AI），檢測小鼠脂/體比，檢測肝組織中TC和TG含量。結果：與正常對照組比較，模型組小鼠血清中TC、TG、LDL-C、AI及脂/體比均顯著增高（P＜0.01），HDL-C含量降低，肝組織中TG和TC含量升高，與模型組比較，SCL 顯著降低了小鼠血清TC、TG、LDL-C、AI及脂/體比（P＜0.01或P＜0.05），升高了HDL-C含量，并降低了肝組織中TC和TG含量（P＜0.01）。結論：SCL 可以減輕高脂血癥小鼠脂肪含量，對小鼠高脂血癥具有一定的治療作用。

北五味子；木脂素類；高脂血癥；膽固醇；C57BL/6小鼠

高脂血癥是導致心腦血管疾病和非酒精性脂肪肝病的元兇，我國約有1.3 億人患有高血脂，嚴重危害人類的健康。然而血脂異常的病因復雜，治療較為困難，目前常用的降脂藥如他汀類、貝特類、煙酸類等均可引起肝損害，尋找新的安全有效降脂藥物刻不容緩[1-4]。北五味子（Schisandra chinensis）為長白山特色資源，是五味子中的極品，在《本草綱目》和《神農本草經》中都明確記載。北五味子的活性成分主要有木脂素、多糖及揮發(fā)油等，其中研究較多的木脂素類化合物約為五味子總含量的5%[5-8]，在提高免疫力、治療癌癥、保護肝臟、抗氧化，鎮(zhèn)靜催眠等方面均具有一定功效[9-14]。研究表明五味子水提物、醇提取物及五味子仁提取物均具有一定的調節(jié)血脂作用[15-17]。然而其發(fā)揮作用的具體成分尚不清楚，本實驗采用高脂飲食誘導C57BL/6小鼠高脂血癥，觀察北五味子總木脂素（Schisandra chinensis lignans，SCL）對高血脂癥的調節(jié)作用，明確五味子調節(jié)血脂的有效成分。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

雄性C57BL/6小鼠，體質量19～21 g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供（許可證編號：SCXK（京）2012－0001，為無特定病原體（specific pathogen free，SPF）級）。小鼠采取分籠飼養(yǎng)，且維持12h∶12h晝夜循環(huán)，飼料供給充足，自由飲水。

普通飼料：脂肪質量分數5%、碳水化合物質量分數53%、蛋白質質量分數23%、其他成分質量分數19%。高脂飼料：膽固醇質量分數2%、膽酸鈉質量分數0.5%、豬油質量分數10%、蔗糖質量分數5%、普通飼料質量分數82.5%[8]，均由長春億斯實驗動物技術有限責任公司提供。

北五味子總木脂素由北華大學林學院食品科學與工程實驗室優(yōu)選新品種，采用超臨界CO2流體萃取，模仿口服藥物在胃腸道的轉運過程，選用特定pH值依次連續(xù)提?。ò敕律ㄌ崛。?；經分子蒸餾，其蒸餾溫度為110 ℃、進料速率65 L/h、真空度0.7 Pa；再通過AB-8大孔樹脂處理，總木脂素流量1.52 mg/mL、洗脫速率1 mL/min乙醇濃度95%、洗脫率78.9%；采用硅膠柱層析法，200～300 目硅膠，以石油醚-乙酸乙酯60∶1（V/V）洗脫，得木脂素組分，采用紫外分光光度法，在570 nm波長處檢測總木脂素吸收光譜，其純度為93.5%。

血清低密度脂 蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）檢測試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholestero，HDL-C）檢測試劑盒，甘油三酯（triglycerid，TG）檢測試劑盒及總膽固醇（total cholestero，TC）檢測試劑盒 中生北控生物科技股份有限公司；組織TC和TG檢測試劑盒 北京普利來基因技術有限公司。

1.2 儀器與設備

Infinite M200TECAN酶標儀 瑞士TECAN集團公司；JY92-IID超聲波細胞粉碎機 寧波新生生物科技股份有限公司；S10手提式高速分散器 寧波新生生物科技股份有限公司；MH-1微量振蕩器 海門市其林貝爾儀器制造有限公司；－80 ℃超低溫冰箱 日本SANYO公司。

1.3 方法

1.3.1 動物分組及給藥

60 只雄性小鼠，取30 只隨機分成正常組（CON）、正常＋北五味子總木脂素組（CON＋SCL 100 mg/kg），給與普通飼料喂養(yǎng)。其余30 只用于建立高脂血癥小鼠模型，高脂飼料喂養(yǎng)4 周后，禁食不禁水12 h，使用毛細玻璃管對小鼠眼球進行采血，檢測小鼠血清總膽固醇和甘油三酯含量，確定高脂血癥小鼠模型建立成功。將造模成功的高脂血癥小鼠隨機分成模型組、北五味子總木脂素治療組（模型＋SCL 100 mg/kg），每組各15 只。正常組及模型組給予等體積溶媒；（CON＋SCL）組及（模型＋SCL）組給予SCL 100 mg/kg。以上組別均每日灌胃一次，持續(xù)12 周，并每周測量小鼠體質量。

1.3.2 取材

取材前12 h禁食不禁水，對小鼠進行摘除眼球采血，每只小鼠約取血0.8～1.0 mL，3 500 r/min，4 ℃，離心20 min分離血清，取上層血清分裝在EP管中，－80 ℃凍存待測。小心分離小鼠肝臟以及附睪的脂肪組織，用0.9%氯化鈉將取出的脂肪沖洗3 次，濾紙吸凈水分后稱質量，記錄。肝臟置于－80 ℃冰箱凍存待測，分別進行檢測。

1.3.3 血清學指標的檢測

TG、TC、LDL-C、HDL-C采用酶學方法檢測，具體方法參照試劑盒說明書，并按下式計算動脈粥樣硬化指數（atherosclerosis index，AI）。

式中：cTC、cHDL-C分別為TC與HDL-C檢測后的得到的濃度/（mmol/L）

1.3.4 相對脂/體比檢測

各組實驗動物分別摘取附睪部位的主要脂肪組織并稱質量，皮下以及網膜脂肪不予計入，通過附睪主要脂肪積累部位的脂肪質量與體質量之比，計算各實驗動物相對脂/體比。

1.3.5 肝臟指標的檢測

取100 mg肝組織，切碎，置于離心管內，按照1∶10（m/V）溶于試劑盒裂解液中，靜止放置1 h，16 000 r/min電動勻漿（勻漿時間為5 s/次，每次間隔3 s，連續(xù)3 次，冰水混合物中進行），70 ℃水浴加熱10 min后，3 500 r/min，離心5 min，取上清再次以上述方法離心，取上清置EP管中待測。采用酶學方法檢測肝臟組織中TC、TG含量，具體操作方法嚴格按照試劑盒說明書。

1.4 數據統(tǒng)計分析

2 結果與分析

2.1 SCL對小鼠血脂含量的影響

表1 SCL 對各組小鼠血脂及AI的影響（n＝1155）Table 1 Effect of SCL on blood lipids and AI in mice from various grouuppss ((n = 1155))

由表1可知，與正常對照組比較，模型組小鼠血清TC、TG、LDL-C及AI水平均明顯升高（P＜0.05或P＜0.01），HDL-C水平降低。與模型組比較，SCL治療組小鼠血清TC、TG、LDL-C及AI水平均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），HDL-C水平升高。而SCL對正常小鼠血脂影響不明顯（P＞0.05）。

2.2 SCL對小鼠體質量的影響

表2 SCL 對各組小鼠體質量的比較（n = 15)Table 2 Effect of SCL on body weight in mice from various groups (n = 15) g

由表2可知，小鼠初始體質量差異不大，喂養(yǎng)30 d后，與正常組比較喂食高脂飲食的模型組、SCL組體質量存在顯著或極顯著差異（P＜0.05或P＜0.01），小鼠體質量增長不明顯，可能是高脂飲食含油脂過多，膽固醇味道較苦，影響小鼠食欲，但喂養(yǎng)一段時間后，小鼠已經適應高脂飲食，生長狀態(tài)良好，體質量接近正常對照組，不存在明顯差異（P＞0.05）。

2.3 SCL對小鼠脂/體比的影響

表3 SCL 對各組小鼠脂/體比的比較（n＝1155）Table 3 Effect of SCL on fat/body weight ratio in mice from various grouuppss ((n = 1155))

由表3可知，與正常對照組比較，高脂模型組體質量差異不明顯（P＞0.05），但脂肪質量明顯增加，脂/體比明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，SCL降低了高脂血癥小鼠脂肪質量和脂/體比水平（P＜0.05）。

2.4 SCL對小鼠肝臟脂質含量的影響

表4 SCL對各組小鼠肝脂質的比較（n＝1155）Table 4 Effect of SCL on liver lipids in mice from various groups（n＝15）

由表4可知，與正常對照組比較，模型組肝組織中TC、TG水平顯著增高（P＜0.01）。SCL 治療12周后，顯著降低了小鼠肝組織中TC、TG水平（P＜0.01）。

3 討 論

高脂血癥是人類隱形的殺手。隨著近年來人民生活水平提高，高脂飲食的普遍攝入，高脂血癥患病率逐年提高，但大多數人對自身身體狀況不了解，往往是在體檢或是其他檢查時才發(fā)現血脂增高，高血脂可直接損害全身動脈，使其發(fā)生粥樣硬化，嚴重影響人類健康[18-19]。但人們對血脂異常還不是十分重視，血脂控制不理想。臨床上常用調節(jié)血脂藥物他汀類、煙酸類等，雖療效明顯，但長期服藥帶來的化學毒副作用較大[20-21]，大大的增加了患者的痛苦和經濟負擔。然而與之相比的傳統(tǒng)中醫(yī)，強調人體的自然規(guī)律，合理控制，療效明顯且毒副作用極小，越來越受到人們的青睞。

近年來研究顯示，傳統(tǒng)中藥五味子具有良好的調節(jié)血脂作用。俞青[16]報道五味子水提物及醇提物均可降低高膽固醇血癥小鼠肝臟脂質水平。孫楠等[17]報道北五味子仁提取物可顯著影響高膽固醇血癥小鼠的脂質代謝，促進TC排泄。本實驗的前期工作也證明北五味子提取物及多糖可降低高脂飲食誘導的高脂血癥、小鼠及大鼠血清總膽固醇和甘油三酯水平[22-25]。木脂素類是五味子的主要活性成分，本實驗采用高脂高膽固醇飲食喂養(yǎng)成功建立了C57BL/6小鼠高脂血癥模型，并觀察了SCL對小鼠高脂血癥的影響。結果表明SCL可使小鼠血清及肝組織TG、TC，血清LDL-C水平均明顯降低，HDL-C含量升高，AI值降低，且小鼠脂/體比明顯減小，說明SCL 能夠調節(jié)高脂血癥小鼠的血脂及肝脂水平，有效地改善小鼠脂質代謝紊亂情況，對高脂血癥起到一定的治療作用。這些結果為五味子的進一步開發(fā)和利用奠定了理論基礎，進一步的作用機制有待繼續(xù)研究。

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Effect of Schisandra chinensis Lignans on Hyperlipidemia in C57BL/6 Mice

LIU Hong, LI He, YUAN Rongshuang, SUN Jinghui, CHEN Jianguang, WANG Chunmei*
(Department of Pharmacology, School of Pharmacy, Beihua University, Jilin 132013, China)

Objective: To investigate the regulatory effect of Schisandra chinensis lignans (SCL) on hyperlipidemia induced by high-fat diet in mice. Methods: Among 60 male C57BL/6 mice, 30 mice were randomly divided into normal control group (CON) and normal + SCL group (C ON + SCL 100 mg/kg) of 15 animals each and fed with normal diet. The rest of the mice were fed with high-fat diet for 4 weeks. After the hyperlipidemic mouse model was successfully established, the mice were randomly divided into model group (Model) and SCL-treated group (Model + SCL 100 mg/kg). All mice were intragastrically administrated with corresponding agents for 12 weeks. Then, total cholesterol (TC), triglyceride (TG), low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) and high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) concentrations in serum were detected and the atherosclerosis index (AI) was calculated. The ratio of lipid to body weight, and TC and TG levels in liver tissue were determined. Results: Compared with the normal control group, TC, TG and LDL-C concentrations in serum, AI and lipid/body weight ratio and TC and TG concentrations in liver tissue were signifi cantly increased (P < 0.01), and HDL-C concentration was reduced in the model group. TC, TG and LDL-C contents, AI and lipid/body ratio and TC and TG in liver tissue were decreased (P < 0.01 or P < 0.05), and HDL-C was elevated in mice treated with SCL compared with those in the model group. Conclusion: SCL can reduce fat mass in hyperlipidemic mice, suggesting its therapeutic effect on hyperlipidemia.

Schisandra chinensis; lignans; hyperlipidemia; cholesterol; C57BL/6 mice

10.7506/spkx1002-6630-201611038

R285.5

A

1002-6630（2016）11-0218-04

劉宏, 李賀, 苑榮爽, 等. 北五味子總木脂素對C57BL/6小鼠高脂血癥的影響[J]. 食品科學, 2016, 37(11): 218-221. DOI:10.7506/spkx1002-66 30-201611038. http://www.spkx.net.cn

LIU Hong, LI He, YUAN Rongshuang, et al. Effect of Schisandra chinensis lignans on hyperlipidemia in C57BL/6 mice[J]. Food Science, 2016, 37(11): 218-221. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201611038. http://www.spkx.net.cn

2015-08-07

吉林省自然科學基金項目（20140101088JC）；吉林省教育廳“十二五”科學技術研究項目（2014-178）；吉林省醫(yī)藥產業(yè)推進計劃項目（20140311052YY）；吉林省中青年科技創(chuàng)新領軍人才及團隊項目（20130521026JH）

劉宏（1989—），女，碩士研究生，研究方向為內分泌藥理學及藥物研發(fā)。E-mail：986243723@ qq.com

*通信作者：王春梅(1974—)，女，副教授，博士，研究方向為內分泌藥理學及藥物研發(fā)。E-mail：wangcm74@126.com