雷蕾　李旭　賀建華　馬兵　黎磊

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·調(diào)查研究·

恩施地區(qū)人群MTHFR C677T多態(tài)性和飲酒在肝癌中的交互作用研究

雷蕾李旭賀建華馬兵黎磊

目的探討恩施地區(qū)人群MTHFR C677T多態(tài)性與肝癌關(guān)聯(lián)性及與飲酒交互作用。方法采用多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法分析121例肝癌患者和129例正常對(duì)照MTHFR C677T基因型。非條件Logistic分析各基因型與發(fā)病中易感性關(guān)系以及與飲酒的交互作用。結(jié)果攜帶C(CC/CT)基因個(gè)體患病風(fēng)險(xiǎn)較非C基因攜帶者(TT)風(fēng)險(xiǎn)明顯增加 (OR=1.44,95%CI:1.28,1.61,P=0.000校正OR=1.53,95%CI: 1.31,3.01,P=0.000);非條件Logistic分析表明攜帶CC/CT基因型飲酒 個(gè)體肝癌罹患風(fēng)險(xiǎn)是攜帶TT基因非飲酒個(gè)體的3.39倍(OR=3.39,95%CI:2.66,5.36,P=0.000)(RERI=1.83,95%CI:1.21,2.78;API=0.46,95%: 0.28, 0.76;S=1.31,95%CI:1.08,2.17)。結(jié)論MTHFR C677T多態(tài)性增加恩施地區(qū)肝癌罹患風(fēng)險(xiǎn),且與飲酒在肝癌發(fā)病中存在協(xié)同效應(yīng)。

MTHFR C677T;多態(tài)性;肝腫瘤;易感性;交互作用

肝癌是我國(guó)常見(jiàn)的消化道腫瘤之一。肝癌發(fā)病極其復(fù)雜,目前認(rèn)為主要與生活環(huán)境,飲食,遺傳以及肝炎病毒感染有關(guān)[1]。最近發(fā)現(xiàn)葉酸DNA甲基化在肝癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中也發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[2]。亞甲基四氫葉酸還原酶是不可逆地催化5,10亞甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)變成5,甲基四氫葉酸的限速酶，參與葉酸的代謝及DNA甲基化的過(guò)程[2]。若既往研究發(fā)現(xiàn)MTHFR多態(tài)性會(huì)影響該酶的活性從而影響到葉酸的代謝途徑及DNA合成和甲基化,成為疾病風(fēng)險(xiǎn)因子[3]。采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)探討恩施MTHFR C677T 多態(tài)性與肝癌易感性關(guān)系以及與飲酒的交互作用，基于MTHFR C677T-159C/T基因多態(tài)性在腫瘤中發(fā)揮著重要的作用[3-5]。為此, 本研究通過(guò)采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)探討恩施MTHFR C677T 多態(tài)性與肝癌易感性關(guān)系以及與飲酒的交互作用。

1　資料與方法

1.1一般資料病例組選取2013年2月至2015年1月于我院住院患者121例；對(duì)照組選取體檢中心健康個(gè)體129例。病例組經(jīng)病理切片確診為肝癌。本文若男性酒精消耗>140 g/周,女性>70 g/周至少2年則定義為飲酒,每日吸煙至少1支至少2年定義為吸煙。受試者年齡范圍41～76歲，所有受試者常規(guī)乙肝病毒相關(guān)檢查。收集年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙史、飲酒史等一般資料。

1.2MTHFR C677T多態(tài)性性檢測(cè)采取經(jīng)典酚-氯仿方法提取外周血基因組DNA。根據(jù)MTHFR C677T基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)各個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增引物使用PCR擴(kuò)增目的基因片段。PCR 擴(kuò)增引物序列:MTHFR C677T(MTHFR C677T)引物為:上游:5’-TGCCAGAGCCGTGGCCTGGG-3’;下游:5’-ACTCCCCGCCTCTTTTCCGAC-3’;PCR反應(yīng)體系(25 μl)包含100 ng提取DNA,1.0 UTaq酶,2 μl上游以及下游引物2×PCR buffer。PCR反應(yīng)條件: 95℃變性6 min;94℃ 30 s,60℃ 30 s,72℃ 45 s 30個(gè)循環(huán);最后72℃延伸10 min。限制性內(nèi)切酶BsaHI, NlaIII酶切。酶切產(chǎn)物進(jìn)行3%瓊脂糖電泳;EB染色成像以此判定酶切基因型。

2　結(jié)果

2.1一般情況2組年齡、性別比、體重指數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而吸煙、飲酒、乙型肝炎、肝癌家族史差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　2組一般資料比較

2.2MTHFR C677T多態(tài)性與肝癌易感性MTHFR C677T 對(duì)照組和病例組均符合Hardy-Weinberg平衡法(χ2=0.34,P=0.24,χ2=0.41,P=0.19);MTHFR C677T基因型CT的患病風(fēng)險(xiǎn)是基因型TT的1.14倍(OR=1.14,95%CI: 1.05,1.52,P=0.038);CC基因型者患病風(fēng)險(xiǎn)是基因型TT的1.54倍(OR=1.54,95%CI: 1.22,2.89,P=0.000);C基因攜帶者(CC+CT)患病風(fēng)險(xiǎn)是非C基因攜帶者(TT)的1.44倍(OR=1.44,95%CI: 1.28,2.61,P=0.000),利用非條件logistic回歸分析校正吸煙、家族史、乙型肝炎等因素T基因攜帶者(TT/CT)患病風(fēng)險(xiǎn)是非T基因攜帶者(CC)1.53倍(OR=1.53,95%CI: 1.31,3.01,P=0.000)。見(jiàn)表2。

表2　MTHFR C677T基因型分布以及肝癌易感性關(guān)系

注：*:校正吸煙、家族史、飲酒、乙型肝炎

2.3MTHFR C677T多態(tài)性與飲酒交互作用采用非條件Logistic分析MTHFR C677T多態(tài)性與飲酒交互作用,以攜帶TT基因不飲酒個(gè)體相比, 攜帶CT/CC基因型不飲酒 個(gè)體罹患肝癌風(fēng)險(xiǎn)增加1.26倍(OR=1.26,95%CI:1.12,1.97,P=0.024),攜帶TT基因型飲酒個(gè)體罹患肝癌風(fēng)險(xiǎn)增加1.19倍(OR=1.19,95%CI: 1.06,2.14,P=0.041)，攜帶CT/CC基因型飲酒 個(gè)體罹患肝癌風(fēng)險(xiǎn)增加3.39倍(OR=3.39,95%CI: 2.66,5.36,P=0.000;RERI=1.83,95%CI:1.21,2.78;API=0.46,95%CI:0.28,0.76;S=1.31,95%CI:1.08,2.17)RERI和AP值95%CI不包括0、S值95%CI不包括1。相加交互作用分析結(jié)果表明OR=1.67,95%CI:1.21,2.87。見(jiàn)表3。

3　討論

人類MTHFR C677T基因位于染色體因定位于染色體4q11～q15區(qū)，目前發(fā)現(xiàn)其該基因存在近10個(gè)多態(tài)性位點(diǎn), MTHFRC催化生成的葉酸在不同個(gè)體水平呈現(xiàn)一定的差異，這可能與MTHFRC677T多態(tài)性有關(guān)[7,8]。肝癌發(fā)病除與肝炎病毒感染有關(guān)外,還與飲食以及遺傳感染密切相關(guān)[1]?，F(xiàn)已有研究報(bào)道提示MTHFR C677T多態(tài)性與各種腫瘤易感性密切相關(guān)[4]。近年來(lái),流行病學(xué)不斷證實(shí)遺傳因素在肝癌發(fā)病中發(fā)揮著重要作用。從遺傳易感性角度確定肝癌高危人群，并進(jìn)行針對(duì)性的預(yù)防是目前降低肝癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的有效措施。迄今為止，國(guó)內(nèi)外MTHFRC677T 多態(tài)性與肝癌易感性的關(guān)系可見(jiàn)報(bào)道。我國(guó)發(fā)現(xiàn)在我國(guó)西南四川地區(qū)人群中肝癌發(fā)病MTHFR C677T多態(tài)性有明顯相關(guān)[8]。而另外研究發(fā)現(xiàn)上海地區(qū)男性肝癌發(fā)病與MTHFRC677T多態(tài)性無(wú)明顯的相關(guān)[9]。上述結(jié)果提示不同地區(qū)MTHFRC677T基因多態(tài)性與肝癌的關(guān)聯(lián)性表現(xiàn)出一定的差異。恩施處于我國(guó)西南地區(qū),為此我們選取恩施地區(qū)個(gè)體為研究對(duì)象, 探討恩施地區(qū)人群MTHFRC677T 多態(tài)性與易感性關(guān)聯(lián)性及多態(tài)性與飲酒交互作用。

表3　MTHFR C677T多態(tài)性與飲酒 二者交互作用

注：*: 校正吸煙,家族史,乙型肝炎;Padd:相加交互作用P值;Pmulti:相乘交互作用P值

本文通過(guò)病例-對(duì)照實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)MTHFRC677T 攜帶C(CC/CT)基因個(gè)體患病風(fēng)險(xiǎn)較非C基因攜帶者(TT)風(fēng)險(xiǎn)明顯增加1.44倍。吸煙,家族史,飲酒,乙型肝炎均為肝癌的危險(xiǎn)因素[1]。為了排除這些混雜因素在MTHFRC677T 多態(tài)性與肝癌關(guān)聯(lián)性研究中的影響,本文采取非條件Logistic回歸予以校正,校正后發(fā)現(xiàn)MTHFRC677T 多態(tài)性與肝癌仍有顯著的關(guān)聯(lián)性。眾所周知肝癌患病是個(gè)體遺傳因素與外界環(huán)境因素共同作用的結(jié)果[1],為了進(jìn)一步探討MTHFRC677T多態(tài)性與飲酒 對(duì)肝癌患病是否有交互作用。本文可采用非條件Logistic回歸分析予以驗(yàn)證[5]。結(jié)果還表明攜帶CC/CT基因型飲酒 個(gè)體肝癌罹患風(fēng)險(xiǎn)是攜帶TT基因非飲酒個(gè)體3.39倍,提示MTHFRC677T多態(tài)性與飲酒在肝癌發(fā)病中存在協(xié)同作用MTHFRC677T多態(tài)性和飲酒在肝癌病及其他疾病中交互作用鮮見(jiàn)報(bào)道,其機(jī)制目前尚無(wú)法闡明。日本學(xué)者報(bào)道MTHFRC677T多態(tài)性與飲酒存在肺癌發(fā)病中存在協(xié)同效應(yīng)[10]。參照MTHFRC677T多態(tài)性可以影響葉酸生成的相關(guān)報(bào)道[7,8], MTHFRC677T既可直接增加肝癌易感性[11],同時(shí)也可以影響葉酸的生成而間接增加肝癌易感性而發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)[1]。本研究存在一定不足,最顯著的是診斷是只考慮了是否飲酒 ,而沒(méi)有充分考慮飲酒的嚴(yán)重程度。其次,本文僅僅考慮飲酒,而沒(méi)有考慮生活習(xí)慣以及環(huán)境因素的影響。再次,研究中樣本量較小,需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量。

綜上所述, MTHFRC677T多態(tài)性可以增加個(gè)體肝癌罹患風(fēng)險(xiǎn),且和飲酒在肝癌發(fā)病中發(fā)揮著協(xié)同作用，本研究存在一定不足,為更好研究MTHFR C677T 多態(tài)性在肝癌易感性以及與飲酒的交互作用尚需要開(kāi)展更大樣本量,設(shè)計(jì)更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯俊?/p>

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10.3969/j.issn.1002-7386.2016.21.042

445000湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院消化科(雷蕾、李旭、賀建華)，普通外科(馬兵、黎磊)

R 735.7

A

1002-7386(2016)21-3339-03

2016-04-14)