韋正樹，吳明貴，黃林，范永毅

(廣西醫(yī)科大學第四附屬醫(yī)院，廣西柳州 545005)

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前列腺癌組織中HPV16/18 DNA表達變化及其意義

韋正樹，吳明貴，黃林，范永毅

(廣西醫(yī)科大學第四附屬醫(yī)院，廣西柳州 545005)

目的觀察前列腺癌(PCa)組織中人乳頭瘤病毒(HPV)16/18 DNA表達情況，并探討其意義。方法采用聚合酶鏈反應結(jié)合反向點雜交(PCR-RDB)技術(shù)檢測60例PCa患者(PCa組)、55例前列腺增生(BPH)患者(BPH組)前列腺組織中的HPV16、18 DNA,并觀察HPV16/18陽性表達與PCa臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 PCa、BPH組HPV16/18 DNA陽性表達率分別為36.7%(22/60)、9.0%(5/55)，兩組比較，P<0.01。T1期+T2期、T3期+T4期臨床分期PCa患者前列腺組織中HPV16/18 DNA陽性表達率分別為21.4%、50.0%，兩者比較，P<0.05。結(jié)論 Pca患者前列腺組織中HPV16/18陽性率高，HPV16/18表達與腫瘤臨床分期有關(guān)。

前列腺癌；人乳頭狀瘤病毒；聚合酶鏈反應結(jié)合反向點雜交技術(shù)

人乳頭瘤病毒(HPV)與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，高危型HPV16、18的持續(xù)感染及多重感染是導致宮頸癌變的主要原因[1,2]。在解剖結(jié)構(gòu)上，前列腺與子宮頸相似，有學者猜測HPV感染在前列腺癌(PCa)的發(fā)病機制中可能扮演著重要角色[3,4]。因此，本研究觀察了HPV16/18在PCa組織中的表達情況，并探討其意義。

1　材料與方法

1.1標本來源所有標本均取自2012～2014年廣西醫(yī)科大學第四附屬醫(yī)院接受B超引導下經(jīng)會陰前列腺穿刺術(shù)、經(jīng)尿道前列腺等離子汽化電切術(shù)治療的患者。PCa患者60例(PCa組)，年齡53～88(71.1±6.6)歲，術(shù)前均未接受放療、化療、抗雄激素或手術(shù)去勢治療。前列腺增生(BPH)患者55例(BPH組)，年齡58～85(72.6±8.1)歲。兩組一般資料具有可比性。所有患者切除組織標本離體后盡快裝入EP管并立即轉(zhuǎn)入-80 ℃冰箱內(nèi)保存。全部病理切片均由我院病理科兩位高年資病理醫(yī)師確診。

1.2HPV16/18 DNA檢測方法采用聚合酶鏈反應結(jié)合反向點雜交(PCR-RDB)技術(shù)。分析試劑為亞能生物技術(shù)(深圳)有限公司產(chǎn)品，操作嚴格按照試劑說明書進行。將兩組標本進行DNA提取，提取的DNA作為模板DNA備用。模板DNA經(jīng)95 ℃加熱30 s變性，使模板DNA的雙鏈解離，形成單鏈。模板DNA經(jīng)加熱變性成為單鏈后，將溫度降至55～57 ℃，保持30 s，使單鏈模板DNA與引物的互補序列配對結(jié)合。引物核苷酸序列設計如下：HPV16上游引物為5′-AAGGCCAACTAAATGTCAC-3′，下游引物為5′-CTGCTTTTATACTAACCGG-3′，片段長度為267 bp；HPV18上游引物為5′-ACCTTAATGAAAAACCACGA-3′，下游引物為5′-CGTCGTTTAGAGTCGTTCCTG-3′，片段長度為240 bp。將溫度升至72 ℃，DNA模板-引物結(jié)合物在聚合酶的作用下延伸1 min。共30個循環(huán)，最后一次循環(huán)延伸延長至7 min。將針對HPV16、18的序列特異性(SSO)核苷酸探針，分別固定在尼龍膜上，再與經(jīng)PCR擴增的DNA靶序列雜交，探針為特異性的，不能交叉雜交；洗膜；顯色。結(jié)果判定：將探針與經(jīng)PCR擴增的DNA靶序列進行雜交，若探針在尼龍膜上顯藍色斑點，則可判斷為該HPV亞型陽性，反之為陰性。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

PCa組、BPH組HPV16/18 DNA陽性表達率分別為36.7%(22/60)、9.0%(5/55)，兩組比較，P<0.01。HPV16/18陽性表達與PCa臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。

3　討論

PCa是歐美等西方國家最常見的惡性腫瘤，我國PCa的發(fā)病率雖遠低于歐美國家，但發(fā)病率、病死率近年來呈持續(xù)快速增長趨勢，且增長幅度較歐美發(fā)達國家更為迅速。HPV為雙鏈DNA病毒，具有嚴格的嗜上皮、嗜皮膚性。HPV16、18與泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤發(fā)病的關(guān)系十分密切[5]。有學者檢測陰莖癌組織中的HPV16/18 DNA，結(jié)果顯示HPV DNA的陽性率為71.7%，提示HPV16/18的感染與陰莖癌的發(fā)生關(guān)系密切[6]。有研究[7]應用免疫組化法測定膀胱癌標本，結(jié)果顯示HPV16/18總陽性率為65.4%，表明HPV16/18的感染是膀胱癌可能的致病因素之一。

表1　HPV16/18陽性表達與PCa臨床病理參數(shù)的關(guān)系

注：與臨床分期T1期+T2期相比，*P<0.05。

目前，關(guān)于HPV感染與PCa之間關(guān)系的研究很多[8,9]。有研究[10]運用PCR方法觀察印度南方人群中HPV各基因型的表達情況，發(fā)現(xiàn)HPV16在PCa中的陽性表達較高，可能與PCa有關(guān)。Dillner等[11]研究顯示，HPV18血清抗體陽性提高了PCa進展的危險度。研究[12～14]顯示，HPV DNA在PCa組織中檢出率較高，高危型HPV陽性率更高，致癌性HPV可能在前列腺腫瘤的病原學機制中發(fā)揮重要的作用。Leiros等[15]發(fā)現(xiàn)阿根廷PCa患者HPV的感染率達41.5%(17/41)。Anwar等[16]通過PCR法檢測68例日本PCa患者的HPV16、18及33亞型的表達情況，發(fā)現(xiàn)其陽性表達率達24%。HPV在不同地區(qū)及國家PCa患者中的感染率不盡相同，其感染率主要與實驗人群的年齡、性行為習慣及人群種族的易患性等因素相關(guān)。研究[14]發(fā)現(xiàn)，HPV16/18 DNA可使前列腺上皮細胞永生化，提示HPV感染可能在PCa的發(fā)生中扮演著重要角色。本研究結(jié)果提示，HPV16/18可能在PCa的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要的角色。本研究受實驗條件所限，僅觀察了本地區(qū)少數(shù)PCa及BPH患者的HPV16/18感染情況，我國其他地區(qū)是否也存在這種趨勢，有待今后更多深入的調(diào)查以進一步證實。

本研究發(fā)現(xiàn)，HPV16/18在PCa臨床T分期中的表達有差異，提示HPV16/18感染與PCa的臨床T分期存在著一定的相關(guān)性，這意味著HPV16/18感染可能為臨床上評估PCa患者預后提供一定的幫助。但需注意的是，此實驗結(jié)果僅能表明HPV16/18在PCa高臨床T分期中的陽性表達率較高，不能證明HPV16/18的感染會導致PCa患者由低臨床T分期向高臨床T分期進展，不排除高臨床T分期的PCa患者因免疫力下降等因素導致其對HPV病毒的易感性增加，從而加大了HPV感染的幾率。本研究結(jié)果顯示HPV16/18感染與PCa患者的年齡、PSA值、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無關(guān)。未出現(xiàn)國外文獻[15]中所描述的HPV16/18的陽性表達率隨PCa患者的年齡增長而增加的趨勢。這可能是與飲食習慣、性行為開放程度等與國外有差異有關(guān)，也可能是本實驗樣本量的局限造成的。

PCa危險因素包括年齡、家族遺傳性及種族，但確切致病機制及致病因素仍未明確。本研究發(fā)現(xiàn)PCa組織中HPV16/18陽性率高，HPV16/18表達與腫瘤臨床分期有關(guān)。

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廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳計劃項目(Z2014384)。

范永毅(E-mail： 1356138317@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.23.028

R737.25

B

1002-266X(2016)23-0083-03

2015-12-07)