郭威，郭曉軍，袁洪水，朱寶成

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河北保定071001）

科學(xué)實驗研究

產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌對仔雞生長性能、腸道脂肪酶活力和微生物菌群的影響

郭威，郭曉軍，袁洪水，朱寶成*

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河北保定071001）

本試驗旨在研究產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌菌劑對仔雞生長性能、腸道脂肪酶活力及微生物菌群的影響。選取900只1日齡健康仔雞隨機(jī)分為3組（每組3個重復(fù)，每個重復(fù)100只雞）：對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗組分別飼喂添加0.5%和1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌菌劑的試驗飼糧，試驗期42 d。結(jié)果表明：（1）添加1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌仔雞全期料重比降低了8.50%（P＜0.05），添加0.5%劑量組飼喂全期料重比降低了5.00%（P＜0.05）。（2）添加0.5%和1%菌劑組21日齡仔雞腸道內(nèi)脂肪酶活力分別提高了8.84%（P＜0.05）和25.31%（P＜0.05）。（3）添加1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌組21日齡仔雞盲腸中大腸桿菌含量降低了33.93%（P＜0.05），乳酸桿菌和雙歧桿菌含量分別增加了73.78%（P＜0.05）和28.82%（P＜0.05）；添加0.5%劑量組21日齡仔雞盲腸中大腸桿菌含量降低了14.89%（P＜0.05）。由此可見，添加1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌對仔雞全期的料重比、腸道內(nèi)脂肪酶活力和微生物菌群的改善作用影響顯著。

脂肪酶；芽孢桿菌；生長性能；脂肪酶活力；微生物菌群

王恬等（2006）指出，剛出殼的禽類脂肪消化率低的重要因素之一可能是胰腺脂肪酶分泌不足。因此，適當(dāng)在飼料中添加產(chǎn)消化酶的益生菌可以彌補(bǔ)禽類內(nèi)源酶的不足?？莶菅挎邨U菌是一類可形成芽孢的好氧革蘭氏陽性菌，被公認(rèn)為是可在飼料中直接使用的微生物菌種（何明清，2004）。另外，芽孢桿菌進(jìn)入動物腸道后，在腸道上部能迅速萌發(fā)并分泌活性很強(qiáng)的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等，提高動物機(jī)體對飼料的消化率和養(yǎng)分的吸收利用率（潘康成，2009）?？莶菅挎邨U菌EA-30-A是本實驗室篩選到的一株高產(chǎn)脂肪酶的芽孢桿菌菌株，且經(jīng)紫外誘變選育，性質(zhì)穩(wěn)定（郭曉軍，2015）。本試驗旨在研究不同水平產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌EA-30-A對仔雞生長性能、腸道內(nèi)脂肪酶活力及微生物菌群的影響，為其推廣應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1試驗材料產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌：EA-30-A菌劑，有效活菌數(shù)5×108cfu/g，由河北眾邦生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；全價飼糧：由河北大午農(nóng)牧集團(tuán)飼料有限公司提供；基礎(chǔ)飼料：在全價飼料的基礎(chǔ)上添加1%大豆油。

1.2試驗動物與試驗設(shè)計仔雞，由保定市徐水縣大午集團(tuán)提供。選用同一批出雛的1日齡健康仔雞900只，分為3組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)100只。對照組飼喂基礎(chǔ)飼料；試驗Ⅰ組和Ⅱ組分別在基礎(chǔ)飼料的基礎(chǔ)上添加0.5%和1%EA-30-A菌劑。

1.3試驗飼糧與飼養(yǎng)管理本試驗于河北農(nóng)業(yè)大學(xué)種雞試驗場內(nèi)進(jìn)行，試驗為期42 d。采用自由飲水，人工喂料（每天3次），按常規(guī)飼養(yǎng)管理進(jìn)行免疫接種。兩個飼養(yǎng)階段日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1　日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4測定指標(biāo)與方法每周測定各組仔雞的采食量、體增重，計算平均日增重（ADG）、平均采食量（ADFI）和料重比（F/G）。

于每周末早上從各組仔雞十二指腸中取食糜測定其脂肪酶活力。脂肪酶活力測定方法參考橄欖油乳化法（Macrae，1985）。

試驗第三周末取盲腸內(nèi)容物，分離培養(yǎng)大腸桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌。伊紅美蘭（EMB）培養(yǎng)基用于培養(yǎng)大腸桿菌，MRS瓊脂培養(yǎng)基用于培養(yǎng)乳酸桿菌，BBL瓊脂培養(yǎng)基用于培養(yǎng)雙歧桿菌。以10倍梯度將仔雞盲腸內(nèi)容物進(jìn)行稀釋，取1 mL稀釋液分別涂布于培養(yǎng)基平板上，于37℃恒溫培養(yǎng)24 h后，統(tǒng)計菌落數(shù)。

1.5數(shù)據(jù)處理試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0進(jìn)行單因素方差分析，Duncan’s法進(jìn)行多重比較，試驗結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2　結(jié)果與分析

2.1EA-30-A 菌劑對仔雞生產(chǎn)性能的影響表2顯示，從試驗全期看，基礎(chǔ)飼糧中添加0.5%和1%EA-30-A菌劑較對照組平均日增重提高9.20%、23.06%，差異均顯著（P＜0.05）；1%劑量添加組較0.5%劑量組平均日增重提高12.69%（P＜0.05）。基礎(chǔ)飼糧中添加0.5%EA-30-A菌劑可提高仔雞各期日采食量，但影響不顯著（P＞0.05）；從試驗全期看，添加1%EA-30-A菌劑仔雞的平均日采食量較對照組提高了12.43%（P＜0.05），與0.5%劑量組相比提高了8.63%（P＜0.05）。基礎(chǔ)飼糧中添加0.5%EA-30-A菌劑能降低仔雞各期料重比，其中對前期（1～21 d）影響不顯著（P＞0.05），對后期（22～42 d）和全期影響顯著，分別降低了2.51%（P＜0.05）和5.00%（P＜0.05）；從試驗全期看，添加1%EA-30-A菌劑降低了仔雞料重比8.50%（P＜0.05），與0.5%劑量組相比降低了3.68%（P＜0.05）。

表2　EA-30-A菌劑對仔雞生產(chǎn)性能的影響

2.2EA-30-A菌劑對仔雞十二指腸脂肪酶活力的影響由表3可知，基礎(chǔ)飼糧中添加0.5%EA-30-A菌劑在試驗兩周內(nèi)對仔雞十二指腸內(nèi)脂肪酶活力無顯著影響，在試驗兩周后顯著提高了仔雞十二指腸內(nèi)脂肪酶活力；添加0.5%和1%EA-30-A菌劑與對照組相比，21日齡仔雞腸道內(nèi)脂肪酶活力分別提高了8.84%和25.31%（P＜0.05）。

表3　EA-30-A菌劑對仔雞十二指腸脂肪酶活力的影響U/mL

2.3EA-30-A菌劑對仔雞盲腸中菌群的影響表4顯示，與對照組相比，基礎(chǔ)飼糧中添加0.5% EA-30-A菌劑，21日齡仔雞盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量降低了14.89%（P＜0.05），1%劑量添加組大腸桿菌數(shù)量降低了33.93%（P＜0.05）?；A(chǔ)飼糧添加1%EA-30-A菌劑，21日齡仔雞盲腸內(nèi)乳酸菌數(shù)量增加了73.78%（P＜0.05），而添加0.5%劑量組對其影響不顯著（P＞0.10）。與對照組相比，基礎(chǔ)飼糧添加0.5%EA-30-A菌劑對21日齡仔雞盲腸內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量影響不顯著（P＞0.05），1%劑量添加組雙歧桿菌數(shù)量增加了28.82%（P＜0.05）。

表4　EA-30-A菌劑對21日齡仔雞盲腸內(nèi)菌群數(shù)量的影響lg cfu/g

3　討論

研究報道，芽孢桿菌能夠提高仔雞的平均日增重，改善飼料轉(zhuǎn)化效率（Jiraohocakul，1990）。盧龍娣（2010）用芽孢桿菌制劑對AA白羽肉仔雞進(jìn)行飼喂試驗，平均日增重約提高40%，不同階段飼料轉(zhuǎn)化率也有不同程度的提高。本試驗也得到了相同的結(jié)果，基礎(chǔ)飼糧中添加0.5%和1%EA-30-A菌劑均能顯著提高仔雞平均日增重，明顯降低料重比。料重比顯著降低，表明飼料轉(zhuǎn)化率顯著提高。從添加量來看，添加1%菌劑較添加0.5%菌劑效果好，說明芽孢桿菌要在動物體內(nèi)發(fā)揮其益生作用還需要一定的有效活菌數(shù)。

芽孢桿菌促生長的機(jī)理可能是其進(jìn)入動物體內(nèi)后能產(chǎn)生多種酶類，如蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和半纖維素酶等，這些酶能促進(jìn)腸道有機(jī)物的消化吸收（Haberer，2003），從而提高飼料的利用率。本試驗將EA-30-A菌劑添加到基礎(chǔ)飼糧中，仔雞十二指腸內(nèi)脂肪酶活力顯著提高，說明EA-30-A菌劑進(jìn)入仔雞體內(nèi)后，迅速生長繁殖，代謝產(chǎn)生了脂肪酶，彌補(bǔ)了仔雞出殼初期內(nèi)源性脂肪酶的不足，有效促進(jìn)了脂肪的吸收利用，提高了料重比和飼料利用價值。

研究表明，動物長期持續(xù)飼喂芽孢桿菌可產(chǎn)生病原菌拮抗物質(zhì)，拮抗腸道病原細(xì)菌，起到維持和調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡的作用（Guo，2006；Alexopoulos，2001；Jamamus，2001）。芽孢桿菌是好氧菌，抗逆性強(qiáng)，耐酸、堿、熱，主要作用是消耗腸道中的氧氣，給乳酸菌、雙歧桿菌等厭氧益生菌營造厭氧的生長環(huán)境。王曉霞等（2006）在肉雞飼糧中添加0.1%枯草芽孢桿菌，能減少肉雞盲腸中的大腸桿菌和沙門氏菌等有害菌的數(shù)量，選擇性增加乳酸桿菌等有益菌群的數(shù)量。Jin等（1998）發(fā)現(xiàn)，肉仔雞在10、20日齡飼喂0.05%乳酸桿菌制劑后，盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)顯著降低。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌顯著降低了21日齡仔雞盲腸中大腸桿菌數(shù)量，增加了乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量，添加0.5%劑量對大腸桿菌生長量影響顯著。雖然0.5%劑量添加組對21日齡仔雞腸道內(nèi)菌群影響沒有達(dá)到顯著水平，但仍顯示了芽孢桿菌的有益作用。

4　結(jié)論

4.1基礎(chǔ)飼糧中添加1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌能顯著提高仔雞平均日增重，改善料重比，效果優(yōu)于0.5%劑量組。

4.2基礎(chǔ)飼糧中添加產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌能提高仔雞腸道內(nèi)脂肪酶活力，促進(jìn)脂肪的消化吸收，效果以添加1%最優(yōu)。

4.3基礎(chǔ)飼糧中添加1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌能顯著降低盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)，增加乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量。

［1］郭曉軍，郭威，袁洪水，等.一株飼用產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌的篩選及紫外誘變［J］.中國飼料，2015，7，10～12.

［2］何明清，程安春.動物微生態(tài)學(xué)［M］.成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社，2004，317～326.

［3］盧龍娣.雞源性益生芽孢桿菌的篩選鑒定、固體發(fā)酵的優(yōu)化及其應(yīng)用效果的研究［D］.福建師范大學(xué)，2010.

［4］潘康成.產(chǎn)酶芽孢桿菌的篩選、鑒定及對肉雞的微生態(tài)效應(yīng)研究［D］.雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

［5］王恬，蔣正宇，周巖民，等.飼料外源酶與動物內(nèi)源消化酶的互作效應(yīng)及機(jī)制研究［J］.飼料與畜牧，2006，12：5～8.

［6］王曉霞，易中華，計成，等.果寡糖和枯草芽孢桿菌對肉雞腸道菌群數(shù)量、發(fā)酵糞中氨氣和硫化氫散發(fā)量及營養(yǎng)素利用率的影響［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2006，37（4）：337～341.

［7］Alexopoulos C，Karaglannidis A，Kritas S K，et al.Field evaluation of a bioregulator containing live Bacillus cereus spores on health status and performance of sows and their litters［J］.Journal of Veterinary Medicine Series A，2001，48（3）：137～145.

［8］Guo X，Li D，Lu W，et al.Screening of bacillus strains as potential probiotics and subsequent confirmation of the in vivo effectiveness of Bacillus subtilisMA139 in pigs［J］.Antonie Van Leeuwenhoek，2006，90（2）：139～146.

［9］Haberer P，du Toit M，Dicks L M，et al.Effect of potentially probiotic lactobacilli on faecal enzyme activity in minipigs on a high-fat，high-cholesterol diet-a preliminary in vivo trial［J］.Int J Food Microbiol，2003；87（3）：287～291.

［10］Jadamus A，Vahien W，Simon O.Growth behavior of a spore forming probiotic strain in the gastrointestinal tract of broiler chicken and piglets［J］.Arch Tierernahr，2001，54（1）：1～17.

［11］Jin L Z，Ho Y W，Abdullah N，et al.Effects of adherent Lactobacillus cultures on growth，weight of organs and intestinal mieroflora and volatile fatty acids in broilers［J］.Anim Feed Sci Technol，1998，70：197～209.

［12］Jiraphocakul S，Sullivan T W，Shahani K M.Influence of a dried Sporolactobacillus subtilis culture and antibiotics on performance and intestinal microflora in turkeys［J］.Poultry Science，1990，69（11）：1966～1973.

［13］Macrae A R，Hammond R C.Present and future applications of lipases［J］. Biotechnology&genetic engineering reviews，1985，3：193～217.■

This experiment was conducted to investigate the effects of dietary Bacillus producing lipase on performance，intestinal lipase activity and microflora of chicks.A total of 900 one-day-old chicks were randomly allocated to 3 groups with 3 replicates of 100 each.The chicks were randomly subjected to one of the following 3 treatments for 42 days：control group（fed a basal diet），and two treatments（fed the basal diet with 0.5%and 1%dietary Bacillus producing lipase，respectively）.The result showed as follows：（1）Adding 1%Bacillus producing lipase decreased feed/gain by 8.50%at weeks 1 to 6（P＜0.05），and adding 0.5%dose decreased by 5.00%（P＜0.05）.（2）After adding 0.5%and 1%Bacillus producing lipase，duodenal lipase activity of chicks on day 21 increased by 8.84%（P＜0.05）and 25.31%（P＜0.05），respectively.（3）The number of E.coli decreased by 33.93%and the number of Lactobacillus and Bifidobacterium in caecum of chicks on day 21 respectively increased by 73.78%（P＜0.05）and 28.82%（P＜0.05）by adding 1%Bacillus producing lipase，and the number of E.coli in caecum of chicks on day 21 decreased by 14.89%（P＜0.05）after adding 0.5%Bacillus.In conclusion，adding 1%Bacillus producing lipase had significant influence on feed/gain，intestinal lipase activity and microflora of chicks at weeks 1 to 6（P＜0.05）.

lipase；Bacillus；growth performance；lipase activity；microflora

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20161405

S816.7

A

1004-3314（2016）14-0019-03

國家星火計劃項目［2010GA105010］；河北省科技計劃項目（12236606）