王春瑋

(青海省紅十字醫(yī)院檢驗(yàn)科，西寧 810000)

?

·臨床研究·

3種方法檢測丙型肝炎患者的早期診斷價值

王春瑋

(青海省紅十字醫(yī)院檢驗(yàn)科，西寧 810000)

目的探討采用丙型肝炎病毒抗體(HCV-Ab)、丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)、HCV-RNA 3種方法聯(lián)合檢測丙型肝炎患者的早期診斷價值。方法收集該院西寧地區(qū)203例HCV-Ab陽性患者及5例HCV-Ab陰性HCV-cAg陽性的患者，使用熒光定量PCR法進(jìn)行HCV-RNA檢測，化學(xué)發(fā)光法檢測HCV-Ab，ELISA法檢測HCV-cAg。結(jié)果203例HCV-Ab陽性患者中HCV-cAg陽性例數(shù)為67例、HCV-RNA>1×103U/L 143例；72例HCV-Ag陽性患者中HCV-RNA陽性例數(shù)69例，符合率達(dá)95.83%，其中5例HCV-Ab陰性HCV-cAg陽性患者中，HCV-RNA陽性3例，符合率達(dá)60.00%。結(jié)論HCV-cAg、HCV-Ab和 HCV-RNA 3種方法聯(lián)合檢測可用于丙型肝炎患者的早期診斷，同時可有效縮短HCV窗口期，降低HCV感染的漏檢率。

丙型肝炎病毒抗體；丙型肝炎病毒核心抗原；HCV-RNA

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)經(jīng)血液傳播引起的傳染性疾病，是臨床常見的慢性進(jìn)行性肝病之一[1]。HCV感染的最大特征是慢性化，感染后約10%～15%的患者會發(fā)展為肝硬化，2009年報(bào)告的發(fā)病例數(shù)是2001年的10.56倍[2-3]。目前臨床以丙型肝炎病毒抗體(HCV-Ab)檢測為主，但HCV-Ab陽性并不能說明患者攜帶的HCV是否具有傳染性，且HCV感染至HCV-Ab產(chǎn)生有較長的窗口期，單獨(dú)HCV-Ab檢測容易漏檢?，F(xiàn)對西寧地區(qū)HCV-Ab陽性患者同時進(jìn)行HCV核心抗原(HCV-cAg)、HCV-RNA不同方法的檢測進(jìn)行相關(guān)性分析。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2014年1月至2015年4月203例該院檢驗(yàn)科檢測的西寧地區(qū)HCV-Ab陽性的203例患者及HCV-Ab陰性HCV-cAg陽性的5例患者，共208例，平均年齡(47.13±14.88)歲，男81例，平均年齡(49.89±16.01)歲；女127例，平均年齡(45.17±13.78)歲。排除甲、乙、丁、戊型肝炎病毒混合感染，同時排除其他疾病引起的肝臟損壞。

1.2標(biāo)本采集與保存清晨空腹抽取靜脈血5 mL，立即分離血清(所有標(biāo)本無黃疸、無溶血)，分為3份：1份即檢HCV-Ab；1份即檢HCV-cAg；1份置EP管中，-80 ℃冰箱保存，進(jìn)行HCV-RNA檢測。

1.3檢測方法HCV-Ab檢測采用化學(xué)發(fā)光法，使用上?？迫A生物工程股份有限公司提供的試劑，質(zhì)控品為北京康徹思坦生物技術(shù)有限公司提供的低值、中值質(zhì)控品，儀器為CHEMCLIN全自動化學(xué)發(fā)光儀。HCV-cAg檢測采用ELISA法，采用湖南康潤有限公司提供的試劑及配套質(zhì)控品，所選酶標(biāo)儀為芬蘭雷勃MK3酶標(biāo)儀。HCV-RNA檢測采用熒光定量PCR法，應(yīng)用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供的試劑及配套的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

1.4質(zhì)量控制HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA檢測均嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室SOP程序文件嚴(yán)格執(zhí)行，HCV-Ab、HCV-RNA的性能驗(yàn)證符合實(shí)驗(yàn)室ISO15189要求。3個項(xiàng)目的室內(nèi)質(zhì)控均在受控范圍之內(nèi)，達(dá)到實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量水平要求。

2　結(jié)　　果

2.1HCV-Ab陽性患者HCV-Ag和HCV-RNA檢測結(jié)果比較203例HCV-Ab陽性患者中HCV-cAg陽性例數(shù)67例，HCV-RNA檢測值大于檢測下限(檢測下限為1×103U/L)的例數(shù)143例。見表1。

表1　　203例HCV-Ab陽性患者HCV-Ag和HCV-RNA檢測結(jié)果比較

2.272例HCV-cAg陽性患者HCV-RNA檢測結(jié)果比較HCV-Ab陽性患者有67例HCV-cAg陽性，5例HCV-Ab陰性但HCV-cAg陽性患者。72例HCV-cAg陽性患者檢測HCV-RNA，檢測值大于1×103U/L為69例，符合率達(dá)95.83%。5例HCV-Ab陰性HCV-cAg陽性的患者中，HCV-RNA檢測值大于1×103U/L者3例。見表2。

表2　　72例HCV-cAg陽性患者HCV-RNA檢測結(jié)果比較

2.3203例HCV-Ab陽性患者HCV-RNA檢測結(jié)果比較203例HCV-Ab陽性患者有143例HCV-RNA檢測值大于1×103U/L。見表3。

表3　　203例HCV-Ab陽性患者HCV-RNA檢測結(jié)果比較

3　討　　論

丙型肝炎隱蔽性很強(qiáng)，早期癥狀不明顯，大多數(shù)患者最初并不知曉，耽誤早期診斷、早期治療的最佳時機(jī)[4]。患者5年以內(nèi)的治愈率可達(dá)70%～90%，5～10年的治愈率為55%～75%，患病10年以上的治愈率將會明顯降低。因此臨床面臨如何采用一個能早期篩查，并縮短窗口期的診斷方法，對初期感染患者做早期診斷及有效治療。

目前臨床常采用檢測HCV-Ab的診斷判斷是否HCV感染，但表2結(jié)果表明，208例患者HCV-Ab陰性而HCV-cAg陽性者5例，其中HCV-RNA檢測值大于1×103U/L者3例，所以HCV-Ab陰性并不完全代表無感染。HCV感染后至HCV-Ab產(chǎn)生有6～12周甚至更長的時間，也就是常說的窗口期，且少數(shù)免疫功能低下或者異常者產(chǎn)生的抗體少甚至不產(chǎn)生抗體，所以僅通過檢測HCV-Ab而作早期診斷容易造成漏檢[5]。

HCV-cAg是HCV感染者的早期血清標(biāo)志物，與HCV-RNA同時出現(xiàn)，HCV-cAg的檢測可將HCV檢測的窗口期縮短至15 d，明顯降低HCV感染的漏檢率[6]。有關(guān)研究報(bào)道，HCV-RNA和HCV-cAg之間具有較好的一致性[7-9]。本研究表2結(jié)果顯示，67例HCV-Ab和HCV-cAg陽性患者HCV-RNA >1×103U/L者66例，符合率達(dá)98.50%；5例HCV-Ab陰性HCV-cAg陽性患者HCV-RNA >1×103U/L者3例，符合率為60.00%；72例HCV-cAg陽性患者與HCV-RNA的符合率達(dá)95.83%。HCV-RNA作為診斷HCV感染的金標(biāo)準(zhǔn)，可表明HCV的復(fù)制性，而HCV-RNA低于檢測下限時并不代表無HCV感染。HCV-cAg與HCV-RNA聯(lián)合檢測可提高檢出率，同時能更好地反映HCV病毒復(fù)制情況。表3數(shù)據(jù)顯示，隨HCV-RNA濃度降低，HCV-cAg陽性率也逐漸降低(P<0.05)，相關(guān)學(xué)者報(bào)道HCV-cAg檢測可作為評判HCV復(fù)制的標(biāo)志物[4-6]。但HCV-cAg不能取代HCV-RNA檢測，表1結(jié)果提示，HCV-Ab陽性患者，HCV-cAg陽性率為33.00%，HCV-RNA陽性率為70.44%，HCV-RNA能夠更敏感、更準(zhǔn)確地反映病毒復(fù)制水平。

本研究結(jié)果表明，203例HCV-Ab陽性患者HCV-RNA>1×103U/L者143例，陽性率達(dá)70.44%，72例HCV-Ag陽性患者，HCV-RNA>1×103U/L者69例?？赡苡捎跓晒舛縋CR方法檢測HCV-RNA的影響因素較多，特別是HCV為RNA病毒，容易被RNA酶降解，從而出現(xiàn)假陰性；另外機(jī)體內(nèi)HCV復(fù)制呈間斷性，當(dāng)病毒暫停復(fù)制時，HCV-RNA濃度較低，可使檢測結(jié)果呈陰性，而HCV-Ab會持續(xù)存在一段時間[10-11]。所以，HCV-RNA<1×103U/L不能排除HCV感染及病毒復(fù)制。

表3數(shù)據(jù)顯示，HCV-Ab和HCV-RNA檢測結(jié)果比較，HCV-Ab高低與HCV-RNA高低有一定的相關(guān)性，HCV-Ab濃度越低，HCV-RNA也越低，甚至低于檢測下限或陰性，HCV-RNA高低與HCV-Ab呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。因此HCV-Ab陽性并不表示不會再感染丙型肝炎，只是代表患者曾經(jīng)感染或正在感染。HCV-Ab高低能間接反映感染情況，但不是絕對，還需檢測HCV-RNA。HCV-RNA是1個敏感指標(biāo)，可在感染2個星期內(nèi)檢測到HCV病毒。

綜述所述，HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA 3種檢測方法各有局限性，但HCV-cAg和HCV-RNA作為補(bǔ)充指標(biāo)，與HCV-Ab聯(lián)合檢測，可有效縮短窗口期，降低漏檢率，達(dá)到HCV患者早期診斷、早期治療的臨床目標(biāo)。

[1]張卓然.臨床微生物學(xué)與微生物檢驗(yàn)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：381-382.

[2]Maylin S,Laouenan C,Martinot-Peignoux M,et al.Role of hepatic HCV-RNA level on the severity of chronic hepatitis C and response to antiviral therapy [J].J Clin Virol,2012,53(1)：43-47.

[3]莊輝.重視丙型肝炎的研究[J].中華肝臟病雜志，2004，12(2)：65-66.

[4]王迅，劉宇寧，賈堯，等.丙型肝炎病毒抗體篩查陽性結(jié)果確證方案的探討[J].中國輸血雜志，2008，21(4)：255-258.

[5]Ansaldi F，Icardi G.Simultaneous detection of Anti-HCV antibody and HCV core antigen[J].Methods Biology，2009,510：15-23.

[6]典建生，任大明.丙型肝炎[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2000:582-601.

[7]王智斌，譚太昌，王蓉.丙肝病毒核心抗原檢測在丙肝病毒感染診斷中的作用研究[J].西部醫(yī)學(xué)，2010，22(7)：1315-1316.

[8]毛燕群.HCV-RNA定量及HCV核心抗原和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶結(jié)果分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9(22)：2711-2712.

[9]嚴(yán)海燕，歐陽穎，劉曉強(qiáng)，等.HCV-Ag、HCV-RNA及HCV-Ab聯(lián)合檢測降低丙型肝炎的誤診率[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，22(10)：2412-2414.

[10]李軍.丙肝病毒核心抗原檢測臨床應(yīng)用研究[J].甘肅科技，2012，28(18)：155-156.

[11]鮮玉萍，楊紅英.丙型肝炎核心抗原檢測的臨床意義[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9(18)：2320-2321.

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.047

A

1673-4130(2016)19-2765-03

2016-04-27

2016-06-25)