時培文 ，白萬富 ，周歡敏

（1.內蒙古農(nóng)業(yè)大學生命科學學院，內蒙古 呼和浩特 010018；2.內蒙古自治區(qū)生物制造重點實驗室，內蒙古 呼和浩特010018）

牛咽部組織結構的顯微觀察

時培文1，2，白萬富1，2，周歡敏1，2

（1.內蒙古農(nóng)業(yè)大學生命科學學院，內蒙古 呼和浩特 010018；2.內蒙古自治區(qū)生物制造重點實驗室，內蒙古 呼和浩特010018）

［目的］運用組織學方法對3.5歲齡公牛咽部組織結構進行了觀察與分析，以研究牛咽部不同部位顯微結構。［方法］使用石蠟切片及HE和PAS染色在光學顯微鏡下觀察牛咽部不同部位組織形態(tài)及細胞類型。［結論］牛鼻咽部黏膜層屬于假復層柱狀纖毛上皮結構，其間有大量的杯狀細胞，沒有角質層；喉咽部和口咽部屬于復層扁平上皮結構，其間沒有杯狀細胞，有角質層。

牛；咽；HE染色；組織結構

牛咽部是其呼吸道和消化道上端的共同通道，上寬下窄，前壁自上而下分別與鼻腔、口腔和喉相通，病原體容易通過呼吸及進食引起感染，咽部引發(fā)的疾病很多，如慢性咽炎、由特異性病毒感染引起的咽結核、鼻咽癌、口蹄疫［1］等；咽壁分為黏膜層、肌層和外膜層，其中，黏膜層又分為黏膜上皮、固有層和黏膜下層，黏膜上皮由角質層、顆粒層、棘層和基底層構成［2］，其中，棘層與基底層被認為是病毒復制的主要位點。咽部又分為鼻咽部、喉咽部和口咽部［3］，對咽部結構的正確認識，是研究咽部疾病發(fā)病機制的基礎［4］。目前，對牛咽部組織形態(tài)結構的顯微觀察研究較少，筆者從解剖及形態(tài)學角度研究牛鼻咽部、喉咽部及口咽部的組織形態(tài)及細胞類型，從而為牛咽部疾病的研究提供組織學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 實驗用牛咽部組織樣品采自內蒙古自治區(qū)呼和浩特市北亞清真屠宰場，分別采集鼻咽部、口咽部、喉咽部樣品若干，3.5歲齡，公牛。

1.2 制作石蠟切片 牛鼻咽部、口咽部、喉咽部組織樣品分別用4%多聚甲醛液固定，清水過夜沖洗，經(jīng)各級酒精脫水，二甲苯透明，浸蠟，包埋，連續(xù)切片，厚度5 μm，HE及PAS染色，光鏡觀察。

2 結果

牛咽部形態(tài)學分析：從牛鼻咽部、喉咽部、口咽部樣品中每隔5 μm取1張切片，每張切片取3個視野，光學顯微鏡下記錄各個部位的結構，細胞的層數(shù)、上皮形態(tài)、上皮厚度及黏膜下腺體的形態(tài)等情況。

組織學觀察標準：根據(jù)細胞的形態(tài)、組織結構及細胞的分化程度，牛咽部黏膜上皮分為2種類型的上皮。復層扁平上皮：主要分布于喉咽部及口咽部，細胞形狀不一，緊靠基底膜的細胞為矮柱狀；基底層以上為3～4層多邊形細胞，再向上為5～6層扁平或梭型細胞，上皮與深層結締組織的連接面凸凹不平，上皮外側有角質層，游離面無纖毛存在。假復層柱狀纖毛上皮結構：該種結構主要分布于鼻咽部，由柱狀細胞、錐形細胞、梭形細胞和杯狀細胞構成，其中以柱狀細胞最為常見，表面有大量的纖毛。這些細胞形態(tài)各異，高矮不一，細胞核的位置不在同一水平線上，但基底部均附著于基膜。

2.1 鼻咽部結構顯微觀察 牛鼻咽部組織樣品經(jīng)HE及PAS染色后在光鏡下觀察，結果顯示，黏膜層屬于假復層柱狀纖毛上皮結構（見圖1a），其中分布有多種細胞，柱狀細胞的表面具有纖毛，上層表面分布有大量明顯的高腳杯狀的杯狀細胞［5］，在PAS染色中，這些細胞被染成紅色［6］（見圖1b），沒有角質層，沒有分泌腺，在黏膜層基底面與深部結締組織之間可見明顯的基膜。

圖1 光鏡下牛鼻咽HE染色（a）及PAS染色（b）結果（10×20）

2.2 口咽部結構顯微觀察 牛鼻咽部組織樣品經(jīng)HE及PAS染色后在光鏡下觀察，結果顯示，黏膜層屬于復層扁平上皮結構 （見圖2a），細胞形態(tài)不一，沒有杯狀細胞，緊靠基膜的一層基底細胞排列緊密，為矮柱狀，往上為梭形細胞，淺層為幾層扁平細胞，淺層細胞比基底層細胞大，從基底層到淺層細胞核質比逐漸降低，黏膜層的最外部為一層角化的復層扁平上皮，在黏膜層中間分布有分泌腺，黏膜層與深部結締組織連接凸凹不平。

圖2 光鏡下牛喉咽HE染色結果（a）及牛口咽HE染色結果（b）（10×20）

2.3 喉咽部結構顯微觀察 牛喉咽部組織樣品經(jīng)HE及PAS染色后在光鏡下觀察，結構與口咽部相似（見圖2b），都為復層扁平上皮結構，沒有杯狀細胞，角質層比口咽部厚，黏膜層基底面與深部結締組織之間沒有明顯的基膜，喉咽部和口咽部的黏膜層比鼻咽部厚。

3 討論

該實驗觀察了牛咽部細胞的類型及形態(tài)分布。研究結果表明，牛鼻咽部黏膜層為假復層柱狀纖毛上皮結構，在黏膜層外側分布有大量杯狀細胞，杯狀細胞是黏膜上皮中的黏液分泌細胞，黏蛋白分泌后，與水結合形成黏液，有潤滑和保護作用，在鼻咽部中的大量杯狀細胞可以防止鼻咽部黏膜層受到損傷［7］。

在高倍鏡下可以看到喉咽部和口咽部黏膜層淺層細胞為扁平梭型，在HE染色下細胞核被染成藍色，黏膜層厚度大于鼻咽部，喉咽部及口咽部在形態(tài)上差別不大，黏膜層均為復層扁平上皮結構，該種結構具有較強的再生修復能力，對摩擦和損傷的耐受力較強。在鼻咽部黏膜層外層未觀察到角質層，口咽部和喉咽部黏膜層外層有明顯的角質層，并且喉咽部的角質層比口咽部的角質層厚，口咽部和喉咽部的角質層能抵御外界摩擦、防止液體外滲和化學物質滲入，能夠有效保護內部的黏膜層、肌層及外膜層細胞。

在酒精逐級脫水過程中，發(fā)現(xiàn)鼻咽部脫水時間少于口咽部與喉咽部，透明時間也少于口咽部與喉咽部，透明時間過長會使包埋在石蠟塊中的組織變脆，在后期切片過程中會難以得到完整的組織切片，在以后制作牛鼻咽部石蠟切片過程中應注意酒精逐級脫水時間與二甲苯透明時間。

該研究運用組織學方法研究了牛咽部的組織形態(tài)及細胞類型，為牛咽部疾病的研究提供了組織學依據(jù)。

［1］高閃電，獨軍政，周建華，等.口蹄疫病毒受體研究進展［J］.生物技術通報，2007（3）：67-71.

［2］劉斌.組織學與胚胎學［M］.北京：北京大學醫(yī)學出版社，2005：30-32.

［3］孟運蓮.現(xiàn)代組織學與細胞學技術［M］.武漢：武漢大學出版社，2004：27-28.

［4］陳茂懷，宗永生.鼻咽假復層纖毛柱狀上皮核的形態(tài)定量學研究［J］.中華腫瘤雜志，1992，11（2）：87-89.

［5］史玉蘭，段相林.杯狀細胞的研究進展［J］.解剖科學進展，2001，7（4）：358-361.

［6］GRANT T D，SPECIAN R D.Proliferation of goblet cell and vacuolated cells in the rabbit distal coicn［J］.Arat Rec，1998，252（1）：41.

［7］張新民，宗永生，張汝逢，等.鼻咽柱狀上皮中的細胞類型［J］.臨床與實驗病理學雜志，1986，2（2）：1-3.

（責任編輯：趙景娣）

Microscopic Observation of the Tissue Structure of Bovine Pharynx

SHI Pei-wen，BAI Wan-fu，ZHOU Huan-min
（1.College of Life Sciences，Inner Mongolia Agricultural University，Hohhot 010018，China；2.Inner Mongolia Biological Manufacturing Key Laboratory，Hohhot 010018，China）

In order to study the microstructure of different parts of the bovine pharynx,the histological structure of pharyngeal tissues of a 3.5-year-old bull was histologically observed.The bull pharynx tissue was collected and was used to prepare paraffin sections.The paraffin sections were subsequently stained using HE staining and PAS staining method to observe the tissue morphology and cell types of different parts of pharynx.Bovine nasopharynx mucosa layer belonged to pseudostratified columnar ciliated epithelium structure,among which,there were a large number of goblet cells but no cuticle;laryngopharynx and oropharynx belonged to stratified squamous epithelium structure,among which,cuticle was observed but goblet cells were absent.

bovine；pharynx；HE staining；histological structure

S858.232.16；Q954.5

A文章順序編號：1672-5190（2016）02-0005-021，21，21，2

2016-01-19

時培文（1990—），男，碩士研究生，主要研究方向為生物學與生物技術。

周歡敏（1959—），男，教授，博士生導師，主要研究方向為生物學與生物技術。