劉　源，王愛明，陳曉風(fēng)

(1.江蘇省鎮(zhèn)江市藥品檢驗所，江蘇鎮(zhèn)江212000;2.江蘇省鎮(zhèn)江市中醫(yī)院，江蘇鎮(zhèn)江212000)

高效液相色譜法同時測定降脂顆粒中虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷含量＊

劉源1，王愛明2，陳曉風(fēng)1

(1.江蘇省鎮(zhèn)江市藥品檢驗所，江蘇鎮(zhèn)江212000;2.江蘇省鎮(zhèn)江市中醫(yī)院，江蘇鎮(zhèn)江212000)

目的建立測定降脂顆粒中的虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷含量的高效液相色譜法。方法色譜柱為Kromasil C18柱(250 mm× 4.6 mm，5 μm)，流動相為乙腈-水(20∶80)，檢測波長283 nm、320 nm，柱溫30℃，流速1.0 mL/min。結(jié)果虎杖苷質(zhì)量濃度在5.12～38.40 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好線性關(guān)系(r=1.000)，平均回收率為100.13%，RSD為0.63%(n=6);二苯乙烯苷質(zhì)量濃度在1.91～19.09 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好線性關(guān)系(r=1.000)，平均回收率為99.14%，RSD為0.63%(n=6);橙皮苷質(zhì)量濃度在9.89～74.19 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好線性關(guān)系(r=1.000)，平均回收率為99.54%，RSD為0.31%(n=6)。結(jié)論該法靈敏、簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，線性關(guān)系良好，可作為制劑質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)。

降脂顆粒;虎杖苷;二苯乙烯苷;橙皮苷;高效液相色譜法

降脂顆粒是鎮(zhèn)江中醫(yī)院自制制劑，主要由制首烏、生山楂、虎杖、陳皮等11味中藥組方，具有理氣活血、消脂降濁的功效，用于血脂異常，血黏度增高所致暈眩、胸悶等癥。為控制降脂顆粒的質(zhì)量，本研究中采用高效液相色譜法同時測定制劑中虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷含量［1-5］，為制訂該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考?，F(xiàn)報道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

1.2試藥

降脂顆粒(醫(yī)院自制制劑，批號為140328，1504014，150625);虎杖苷對照品(批號為111575-200502)，橙皮苷對照品(批號為110721-201316，含量為95.3%)，二苯乙烯苷對照品(批號為110844-201512，含量為91.0%)，均購自中國食品藥品檢定研究院;乙腈、甲醇均為色譜級;其他試劑為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-水(20∶80);柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10 μL;橙皮苷檢測波長為283 nm，虎杖苷、二苯乙烯檢測波長為320 nm。理論板數(shù)按橙皮苷峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.2溶液制備

2.2.1對照品溶液

取虎杖苷對照品10.24 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，作為虎杖苷對照品溶液。取二苯乙烯苷對照品10.49 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，作為二苯乙烯苷對照品溶液。取橙皮苷對照品10.38 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，作為橙皮苷對照品溶液。分別精取虎杖苷對照品溶液5 mL、二苯乙烯苷對照品溶液2 mL、橙皮苷對照品溶液5 mL，置20 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，作為混合對照品溶液。

2.2.2供試品溶液

《普通高中化學(xué)課程標(biāo)準(zhǔn)（2017年版）》提出化學(xué)學(xué)科核心素養(yǎng)是現(xiàn)代社會公民必備的科學(xué)素養(yǎng)，是學(xué)生終身發(fā)展的重要基礎(chǔ)。學(xué)生通過化學(xué)課程的學(xué)習(xí)，所形成的從化學(xué)視角認(rèn)識事物、解決問題的思想、觀點和方法，即為植根于學(xué)生頭腦中的化學(xué)學(xué)科核心素養(yǎng)。在高三一輪復(fù)習(xí)課堂教學(xué)中，不能僅僅是知識的重復(fù)和加深，更應(yīng)該實現(xiàn)基于化學(xué)學(xué)科思維、學(xué)科觀念以及學(xué)科方法等的培養(yǎng)，以提升學(xué)生的化學(xué)學(xué)科核心素養(yǎng)。

取樣品裝量差異項下供試品，研細(xì)，取約7 g，精密加稀乙醇溶液50 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取30 min，放冷，用稀乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過，取續(xù)濾液5 mL，置10mL容量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.2.3陰性對照品溶液

取不含首烏、虎杖、陳皮的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3方法學(xué)考察

專屬性試驗:取2.2項下3種溶液進(jìn)樣，于283 nm波長處下測定橙皮苷，于320 nm波長處測定虎杖苷和二苯乙烯。結(jié)果表明，陰性對照品溶液對測定無干擾。色譜圖見圖1。

圖1　高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:分別精取虎杖苷對照品溶液1.0，2.0，4.0，5.0，6.0，7.5 mL，二苯乙烯苷對照品溶液0.4，0.8，1.6，2.0，2.4，4.0 mL，橙皮苷對照品溶液1.0，2.0，4.0，5.0，6.0，7.5 mL，置20 mL容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10 μL進(jìn)樣，以峰面積作縱坐標(biāo)（Y）、對照品質(zhì)量濃度作橫坐標(biāo)(X，g/L)進(jìn)行線性回歸，得虎杖苷回歸方程為Y=29014242.29X-13 865.58（r=1.000），二苯乙烯苷回歸方程為Y= 19 903 838.16 X-8 111.81（r=1.000），橙皮苷回歸方程為Y=13 149 743.38X-28 482.59（r=1.000）。結(jié)果表明，虎杖苷質(zhì)量濃度在5.12～38.40 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系，二苯乙烯苷質(zhì)量濃度在1.91～19.09 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系，橙皮苷質(zhì)量濃度在9.89～74.19 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

定量限和檢測限考察:按信噪比為10∶1計算，虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷的定量限分別為0.92，0.35，0.57 μg/mL;按信噪比為3∶1計算，虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷的檢測限為分別為0.52，0.21，0.33 μg/mL。

精密度試驗:取同一份對照品溶液，按擬訂的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷的RSD分別為0.78%，1.23%，1.41%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12 h時進(jìn)樣測定并計算。結(jié)果虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷含量的RSD分別為1.11%，1.06%，1.35%(n= 6)，表明12 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗:取同一批號樣品6份，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷平均含量為0.48，0.22，0.75 mg/g，RSD分別為0.91%，0.73%，1.47%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗:分別稱取已知含量的樣品適量，精密加入對照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1　加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4樣品含量測定

取2.2項下供試品溶液和混合對照品溶液，進(jìn)樣10 μL，以峰面積按外標(biāo)法計算含量。結(jié)果虎杖苷的含量分別為0.475，0.483，0.472 mg/g，平均為0.48 mg/g;二苯乙烯苷的含量分別為0.214，0.221，0.223 mg/g，平均為0.22 mg/g;橙皮苷的含量分別為0.749，0.743，0.752 mg/g，平均為0.75 mg/g。

3　討論

首烏、虎杖、橙皮為方中主藥，其中二苯乙烯苷具有廣泛的心血管活性、免疫調(diào)節(jié)、保肝作用［6］;虎杖苷具有抗菌消炎、抗氧化的作用［7］;橙皮苷具有抑制炎癥反應(yīng)，促進(jìn)脂肪代謝等多種生物活性［8］。故選取這3種成分進(jìn)行測定，能反映制劑的質(zhì)量。

檢測波長的選擇時，配制虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷對照品溶液，作紫外掃描，結(jié)果虎杖苷、二苯乙烯苷在320 nm波長處有最大吸收，橙皮苷在283 nm波長處有最大吸收，故同時選擇283 nm及320 nm作為檢測波長，采用DAD液相色譜儀，對處方中首烏、虎杖、陳皮進(jìn)行含量測定。

方法學(xué)考察結(jié)果表明，采用高效液相色譜法對處方中首烏、虎杖、陳皮進(jìn)行含量測定，操作簡便、快速，重現(xiàn)性好，可作為該制劑的定量檢測方法。鑒于該制劑有11味藥材，為提高、完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可控，今后還可開展4味藥材以上的薄層色譜鑒別的方法學(xué)研究。作者簡介:劉源，碩士研究生，副主任藥師，研究方向為藥學(xué)，(電子信箱)liuyuan999990@sina.com。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：62.

［2］董霞，孫瑩.虎杖飲片及其配方顆粒中虎杖苷和大黃素的含量比較［J］.中國藥師，2015，18(6)：1 060-1 062.

［3］黃尹，李國鋒.不同產(chǎn)地虎杖中各成分含量的比較［J］.中醫(yī)藥信息，2015，32(5):68-71.

［4］李洪澤，齊驍勇，韓風(fēng)雨，等.HPLC法測定六味首烏顆粒中二苯乙烯苷的含量［J］.現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2015，9(2)：219-221.

［5］管大平，錢世兵，紀(jì)開明.橘紅片中橙皮苷含量測定方法研究［J］.黑龍江醫(yī)藥，2012，25(5)：665-666.

［6］蘇煥群，陳再智.何首烏藥理研究進(jìn)展［J］.中藥材，1993，16（2）：34-37.

［7］郭梅紅，黃小丹，范穎，等.孔曉龍虎杖降脂顆粒對高脂血癥大鼠降脂作用的研究［J］.中國臨床新醫(yī)學(xué)，2015，8（10）：901-906.

［8］霍本輝，陳敬華，朱濤.橙皮苷通過下調(diào)HMGB1抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞MCP-1表達(dá)的實驗研究［J］.西部醫(yī)學(xué)，2015，27(12)：1 785-1 791.

Simultaneous Content Determination of Polydatin，Styrene Glycosidesand and Hesperidin in Jiangzhi Granules by HPLC

Liu Yuan1，Wang Aimin2，Chen Xiaofeng1
（1.Zhengjiang Institute for Drug Control，Zhengjiang，Jiangsu，China212003；2.Zhenjiang TCM Hospital，Zhenjiang，Jiangsu，China212000）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of giant knotweed polydatin，styrene glycosides（TSG）and hesperidin in Jiangzhi Granules.MethodsKromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）column was used with acetonitrile-water（20∶80）as mobile phase；the detecting wavelength：283 nm and 320 nm.The column temperature was 30℃，the flow rate was 1.0 mL/min. ResultsPolydatin，TSG and hesperidin in the concentration ranges of 5.12-38.40 μg/mL（r=1.000），1.91～19.09 μg/mL（r= 1.000），and 9.89-74.19 μg/mL（r=1.000），respectively，exhibited a good linear relationship with the peak area.The average recovery rates of the above 3 compounds were 100.13%，RSD=0.63%（n=6）；99.14%，RSD=0.63%（n=6）；99.54%，RSD=0.31%（n=6）. ConclusionThis method is sensitive，simple and accurate with good reproducibility and fine linear relationship，and can be used for the quality control of said preparation.

Jiangzhi Granules；polydatin；TSG；hesperidin；HPLC

R284.1;R286.0

A

1006-4931（2016）13-0074-03

2016-03-06）

＊江蘇省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項課題，發(fā)文字號:蘇食藥監(jiān)藥注函〔2014〕64號。