周湘暉

湖南省湘潭市疾病預(yù)防控制中心(湘潭，411100)

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麻疹I(lǐng)gM抗體行定量酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)應(yīng)用效果分析

周湘暉

湖南省湘潭市疾病預(yù)防控制中心(湘潭，411100)

目的探討對(duì)麻疹患者采用定量酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定IgM抗體的臨床價(jià)值。方法回顧性分析在我院接種麻疹疫苗的100例兒童的臨床資料， 分別采用定量酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和中和抗體試驗(yàn)測(cè)定血清IgM抗體水平， 比較兩者的符合率； 同時(shí)統(tǒng)計(jì)ELISA與NT診斷的耗時(shí)、 費(fèi)用和陽(yáng)性率。結(jié)果濃度≥200 IU/L樣品ELISA檢測(cè)與NT的符合率明顯高于<200 IU/L樣品， 其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩種檢查手段陽(yáng)性率無(wú)明顯差異(P>0.05)， 但ELISA法的耗時(shí)和費(fèi)用明顯低于NT法其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論定量酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在檢測(cè)麻疹I(lǐng)gM抗體時(shí)具有很高的準(zhǔn)確性， 且耗時(shí)和費(fèi)用均較低， 值得臨床推廣。

麻疹； 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)； IgM抗體

0　引言

麻疹(measles)是常見(jiàn)的傳染病， 目前隨著檢測(cè)手段的不斷發(fā)展， 麻疹已可做到早期診斷， 進(jìn)而早期治療。中和抗體試驗(yàn)(Neutralization Test,NT)曾經(jīng)是麻疹診斷中的金標(biāo)準(zhǔn)， 但存在耗時(shí)長(zhǎng)， 費(fèi)用高等缺點(diǎn)[1]。因此如何尋找一種快速， 準(zhǔn)確的診斷方法成為臨床研究的熱點(diǎn)之一。定量酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是針對(duì)蛋白表達(dá)做的一種定量或半定量檢測(cè)， 操作簡(jiǎn)便， 靈敏度高， 但特異性不得而知。為此， 本研究對(duì)100例接種麻疹疫苗兒童接種前、 后分別采用不同方法檢測(cè)IgM抗體含量， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2012年1月至2016年1月在我院行麻疹疫苗接種的100例兒童作為觀察組， 其中男54例， 女46例， 年齡9～11個(gè)月， 平均(9.6±0.8)個(gè)月。均接種過(guò)麻疹疫苗， 8個(gè)月時(shí)接種， 9月齡嬰兒為按時(shí)接種麻疹疫苗后一個(gè)月的嬰兒。兩組病例的一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2IgM抗體檢測(cè)

1.2.1定量酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

先抽取血漿， 離心后得到血清成分， 按1：100稀釋后， 行ELISA檢測(cè)， 單孔定量， 單位IU/L。試劑盒由德國(guó)Virion/Serion公司提供,嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性：≥200 IU/L， 陰性：<200 IU/L。

1.2.1中和抗體法

與上述方法相同抽取血漿并離心后得血清成分， 56 ℃ 滅活30 min， 按1：1 024稀釋。取96孔細(xì)胞板， 沒(méi)空滴25 μL稀釋液， 與25 μL麻疹病毒液混合， 37 ℃中和1 h， 然后加入100μL Vero-slam細(xì)胞， 于37 ℃ 5%CO2培養(yǎng)， 第7 d到第10 d每天觀察細(xì)胞培養(yǎng)情況。陽(yáng)性：抗體滴度≥1：2。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有資料均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理， 其中計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)， 計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

(1) ELISA與中和抗體法的符合率， 見(jiàn)表1。濃度≥200 IU/L樣品ILISA檢測(cè)與NT的符合率明顯高于<200 IU/L樣品， 其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1　ELISA與中和抗體法的符合率

(2) ELISA與NT診斷的耗時(shí)、 費(fèi)用和陽(yáng)性率比較， 見(jiàn)表2。兩種檢查手段陽(yáng)性率無(wú)明顯差異(P>0.05)， 但ELISA法的耗時(shí)和費(fèi)用明顯低于NT法其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2　ELISA與NT診斷的耗時(shí)、 費(fèi)用和陽(yáng)性率比較

(3) ELISA檢測(cè)OD值比較。接種前IgM OD值為134.2±12.1， 接種后為262.3±15.6， 組內(nèi)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 接種后高于接種前。

3　討論

麻疹是由麻疹病毒引起一種常見(jiàn)的急性傳染病， 以嬰幼兒為主， 臨床癥狀通常表現(xiàn)為發(fā)熱、 呼吸道卡他癥狀和全身斑丘疹等。麻疹傳染性強(qiáng)， 致死率較高。自1960年代首次使用麻疹疫苗后， 麻疹感染率得到明顯控制。近年來(lái)， 隨著麻疹疫苗的使用愈發(fā)普及， 也使麻疹的發(fā)病率、 死亡率較前更低[2， 3]。隨著診斷技術(shù)的不斷發(fā)展， 目前診斷麻疹的實(shí)驗(yàn)室方法很多， 包括NT、 血凝抑制(HAI)試驗(yàn)、 ELISA、 被動(dòng)凝集試驗(yàn)(PHA)、 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)等[4]。其中， NT試驗(yàn)是診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”， 但其存在技術(shù)要求高、 耗時(shí)、 昂貴等缺點(diǎn)， 因此應(yīng)用受到一定程度的限制。如何尋找一種簡(jiǎn)便， 快捷又準(zhǔn)確的診斷方法稱為臨床檢驗(yàn)診斷的發(fā)展方向之一。而ELISA符合這一理念， 為此， 我們?cè)O(shè)計(jì)了本研究， 旨在探討ELISA在麻疹抗體診斷中的價(jià)值。

從本研究我們看出， 與中和抗體試驗(yàn)的金標(biāo)準(zhǔn)相比， 定量ELISA與之符合度較高， 尤其在滴度高于200 IU/L的樣品中， 可達(dá)到100%， 而對(duì)于滴度低于200 IU/L的樣品， 其誤差相對(duì)較高， 這與Cohen等[1]的研究一致。同時(shí)隨著滴度增加， 其陽(yáng)性符合率也隨之升高。有報(bào)道認(rèn)為NT抗體滴度在1：8～1：16之間時(shí)才對(duì)機(jī)體具有保護(hù)意義[5]， 而本研究中我們發(fā)現(xiàn)NT的臨界滴度也位于1：8～1：16之間， 與上述研究一致。同時(shí)我們對(duì)兩種方法診斷的耗時(shí)、 費(fèi)用和陽(yáng)性率進(jìn)行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 兩種檢查手段陽(yáng)性率無(wú)明顯差異， 但ELISA法的耗時(shí)和費(fèi)用明顯低于NT法， 在一定程度上簡(jiǎn)化了操作， 降低了兒童的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。這與陳輝等[6]的研究是一致的。

總之， 采用定量酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在檢測(cè)麻疹I(lǐng)gM抗體時(shí)具有很高的準(zhǔn)確性， 且耗時(shí)和費(fèi)用均較低， 值得臨床推廣。但是由于本次研究時(shí)間短， 納入病例數(shù)較少， 因此更具體的統(tǒng)計(jì)分析還需進(jìn)一步研究。

[1] Cohen BJ,Parry RP,Doblas D,et al.Measles imumunity testing:Comparison of two Measles IgG ELISA with plaque reduction neutralisation assay[J] J Virol Methods,2006,131(2):209-212.

[2] 陸璐,朱宏幼,陳云華,等.麻疹疫苗對(duì)麻疹發(fā)病率的影響[J].中國(guó)公共衛(wèi)生管理,2006,22(1):45-47.

[3] 殷大鵬.麻疹疫苗[J].中國(guó)疫苗和免疫,2008,14(5):470-473.

[4] 劉巖,王鋒,劉蘭芬,等.麻疹抗體的檢測(cè)方法[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2008， 35(13)：2493-2494.

[5] Arguelles MH,Orellane ML,Castello AA,et al.Measles virus-specific antibody levels in individuals in Argentina where ceivedaone-dosevaccine[J]. Clin Microbiol,2006,44(8):2733-2738.

[6] 歐陽(yáng)霖，尤佳愷，陳國(guó)強(qiáng)，等.疑似麻疹病例不同采血時(shí)間的IgM抗體檢測(cè)分析[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2011,6(30)：81-82.

Analysis of Application Effect for Quantitative Detection of Measles IgM Antibody ELISA

ZHOU Xianghui

Xiangtan City of Hunan Province Center for Disease Control and Prevention,(Xiangtan， 411100)

ObjectiveTo investigate the clinical value of detecting IgM antibodies by quantitative enzyme-linked immunosorbent assay for measles patients.MethodsA retrospective analysis on the clinical data of 100 cases of children accepted measles vaccination in our hospital was carried out, using quantitative enzyme linked immunosorbent assay and neutralization antibody test to determine the serum IgM antibody levels, respectively. Then, their accordant rate was compared and the statics of time-consuming, cost and the positive rate of ELISA and NT diagnosis was evaluated.ResultsThe coincidence rate between ELISA detection and NT detection is significantly higher when sample concentration ≥200 IU/L than that of <200 IU/L (P<0.05). No significant difference has been found in positive rate between the two examination methods (P>0.05), but the time-consuming and cost of ELISA method is significantly less than those of NT method (P<0.05).ConclusionQuantitative ELISA has high accuracy in the detection of measles IgM antibody with low time and costs, which is worthy of clinical promotion.

measles, ELISA, IgM antibody

10.3969/j.issn.1674-1242.2016.02.003

周湘輝，E-mail:zhouxiang68@163.com

R446.6

A

1674-1242(2016)02-0070-03

2016-03-08)