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小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測(cè)技術(shù)要點(diǎn)及注意事項(xiàng)

小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測(cè)試驗(yàn)采用的是中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心研制的小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，該試驗(yàn)取得正確可靠的結(jié)果與試劑、血清的合理配備和正規(guī)的操作息息相關(guān)。下面筆者就自己的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)將幾項(xiàng)要點(diǎn)總結(jié)如下：

1　血樣采集與處理要點(diǎn)

常規(guī)采血大多數(shù)采取頸靜脈采血的方式，在常溫下采完的血樣要保持傾斜靜置，待采完最后一份血樣凝固后方可帶走。為了確保血清質(zhì)量應(yīng)避免下列情況：

1.1若用注射器采血，有時(shí)血流較快呈柱狀進(jìn)入注射器，這樣會(huì)產(chǎn)生泡沫漂浮在上層，由于表面張力的作用使得這樣的血樣一般不會(huì)析出血清。若要避免產(chǎn)生汽泡就要在采血時(shí)放慢抽血速度，讓血液緩慢流入注射器。如果已經(jīng)產(chǎn)生泡沫了，可將針頭向上，推動(dòng)活塞將泡沫排出，然后拉回活塞吸進(jìn)部分空氣后再進(jìn)行放置。

1.2炎熱的天氣，外界溫度超過32℃以上時(shí)，要將血樣避開強(qiáng)光直射，否則血液凝固而不出血清。

1.3外界氣溫在0℃以下時(shí)要防止凍結(jié)，更不能將剛采的血樣放入冰箱內(nèi)保存，避免造成溶血或不出血清。若條件有限沒有溫暖的環(huán)境，可以用手捂熱采血器至血液完全凝固。

1.4采回的血樣若有血清析出要及時(shí)進(jìn)行分離保存，否則時(shí)間一長(zhǎng)也會(huì)有溶血現(xiàn)象發(fā)生。若血清析出不明顯可以室溫靜置一夜。

1.5當(dāng)?shù)玫窖搴蟛灰つ康倪M(jìn)行試驗(yàn)，以避免不合格的血清影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和對(duì)試驗(yàn)試劑的浪費(fèi)。合格的血清要具備未腐敗、無溶血、清亮透明、未凝固或未完全凝固、體積足夠檢測(cè)與樣品備份這些條件。

2　試劑的準(zhǔn)備

試驗(yàn)要在室溫下進(jìn)行，試劑盒要選擇在有效期內(nèi)的，開封時(shí)間不長(zhǎng)，無渾濁無雜質(zhì)的。試劑取出后要恢復(fù)到室溫后再進(jìn)行使用。底物溶液要始終避光，各種試劑要先定量再配制，現(xiàn)用現(xiàn)配，現(xiàn)用現(xiàn)取，不造成浪費(fèi)并保證質(zhì)量。

3　操作技巧與注意事項(xiàng)

在操作過程中保持安靜，精神集中，動(dòng)作要穩(wěn)，盡量避免外界干擾。一旦不注意很有可能造成試驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確而影響真實(shí)性。

3.1血清樣本的擺放。整齊有規(guī)律的擺放血清可以提高操作的準(zhǔn)確性和試驗(yàn)效率。如果有擺放麥道管的板子，可以將裝有待檢血清的麥道管按照酶標(biāo)板設(shè)計(jì)的布局?jǐn)[放在板子上。如果沒有板子可以按照一定的規(guī)律把血樣擺在操作臺(tái)上，比如每10份為1組，或者前2份為1組，剩下的每組放8份。

3.2酶標(biāo)板下面放置數(shù)字墊板?？梢栽诎准埳习凑彰笜?biāo)板各孔的位置畫出96個(gè)孔的排列順序和編號(hào)，然后將酶標(biāo)板放在白紙上，使各孔與紙上的數(shù)字一一對(duì)應(yīng)，這樣每個(gè)孔的編號(hào)清晰可見，加樣的時(shí)候哪個(gè)血樣加到哪個(gè)孔一目了然。與第一條配合應(yīng)用工作效率會(huì)明顯提升。

3.3洗板后的殘留氣泡巧處理。酶標(biāo)板用洗液清洗過后在濾紙上拍干，然而有時(shí)候總有頑固的氣泡經(jīng)過多次拍打后依然在孔底不破。如果氣泡不破就繼續(xù)加試劑的話肯定會(huì)影響試劑的作用，所以要想辦法把它弄掉?？梢杂靡粋€(gè)1000μl的單道移液器帶上接頭后往孔里吹氣，將氣泡吹破，然后再進(jìn)行徹底拍干。注意吹的時(shí)候不要碰到孔底和孔壁。

4　試驗(yàn)結(jié)果判定方法

陰、陽性對(duì)照成立后對(duì)待檢血清進(jìn)行判定。樣品阻斷率＞50的為陽性，樣品阻斷率≤50的為陰性。計(jì)算的時(shí)候把阻斷率為50記為待檢血清的OD值臨界點(diǎn)，算出這個(gè)臨界點(diǎn)數(shù)值，然后去和待檢血清OD值去對(duì)比，如果待檢血清OD值≥臨界點(diǎn)，則該血清為陰性，如果待檢血清OD值＜臨界點(diǎn)，則該血清為陽性。這樣只要用這個(gè)臨界點(diǎn)數(shù)值去和每份血清OD值進(jìn)行對(duì)比就能快速得出結(jié)論，不必再逐個(gè)計(jì)算了。

試驗(yàn)本身就是科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)?，試?yàn)的結(jié)果要求及時(shí)、準(zhǔn)確、有效。所以操作人員就要盡量減少試劑和人為因素對(duì)試驗(yàn)的影響，以提高檢測(cè)效率。

067400河北省承德縣農(nóng)牧局任利強(qiáng)