謝金東楊燕燕林瑋俞春英周建華劉德強王訓(xùn)立（福建中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心福州350122）

不同檢測儀器對SD大鼠血液生理指標(biāo)測定的影響

謝金東楊燕燕林瑋俞春英周建華劉德強王訓(xùn)立*
（福建中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心福州350122）

目的：比較實驗動物專用血細胞分析儀與醫(yī)用血細胞分析儀對SD大鼠血液生理指標(biāo)測定值的差異，分析檢測儀器對大鼠血液生理指標(biāo)測定的影響。方法：36只SD大鼠，體重約200 g，雌雄各半，屏障環(huán)境飼養(yǎng)，試驗前禁食12 h，麻醉后采血，分別用實驗動物專用血細胞分析儀與醫(yī)用血細胞分析儀測定20項血液生理指標(biāo)。結(jié)果：兩種儀器分別檢測的SD大鼠的平均血紅蛋白濃度、平均血紅蛋白含量、白細胞數(shù)量、淋巴細胞數(shù)量、單核細胞數(shù)量、嗜堿性粒細胞數(shù)量、嗜中性白細胞百分比、單核細胞百分比、嗜酸性粒細胞百分比、嗜堿性粒細胞百分比、淋巴細胞百分比、血小板數(shù)量、血小板分布寬度差異極顯著（P＜0.01）；血紅蛋白濃度、嗜中性白細胞數(shù)量、紅細胞分布寬度差異顯著（P＜0.05）；紅細胞數(shù)量、紅細胞壓積、平均紅細胞體積、嗜酸性粒細胞數(shù)量差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)論：不同檢測儀器對SD大鼠血液學(xué)指標(biāo)的檢測有影響。

檢測儀器SD大鼠血液生理指標(biāo)

在生命科學(xué)研究中，實驗動物是科學(xué)研究的四大要素之一，被比喻為活的試劑，而大鼠被廣泛應(yīng)用于生理學(xué)、藥物學(xué)和代謝性疾病等研究，大鼠血液生理生化指標(biāo)是非常重要的檢測指標(biāo)。綜觀各種文獻資料表明，目前大鼠血液生理生化指標(biāo)正常參考值較多［1-6］，但由于動物品種品系［7］、微生物控制等級［8-9］、年齡［10］、性別［11］、飼養(yǎng)環(huán)境、營養(yǎng)狀況、樣本采集時間［12］、麻醉因素［13］、檢測方法、樣本大小等條件不同，所得正常值指標(biāo)也有很大差異，影響大鼠血液生理生化指標(biāo)的因素較多。近年來，這些因素為多數(shù)科研工作者所重視并加以考慮，但是，檢測儀器對實驗動物的血液生理生化數(shù)據(jù)方面產(chǎn)生的誤差，往往被大多數(shù)人所忽視，因而，造成試驗數(shù)據(jù)的不準(zhǔn)確和不可靠。本研究用實驗動物專用血細胞分析儀檢測大鼠血液生理指標(biāo)，并與醫(yī)用血細胞分析儀檢測所得數(shù)據(jù)進行比較，探討檢測儀器對測定指標(biāo)的影響，為大鼠在生命科學(xué)研究中的廣泛應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實驗動物SD大鼠36只，體重（200±20 g），由上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供，許可證號SCXK（滬）2012-0002。動物飼養(yǎng)于福建中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，許可證號SYXK（閩）2014-0001。分籠飼養(yǎng)，每籠5只，雌雄動物分開，以避免因交配導(dǎo)致妊娠。飼養(yǎng)條件可控，飼養(yǎng)室溫度20～26℃，日溫差不超過3℃，濕度50%～70%，光照12 h明，12 h暗，飼料為全價營養(yǎng)飼料，飲用無菌潔凈水。

1.2儀器三洋MLS-3750高壓滅菌器；Sysmex XT-2000iV全自動五分類動物血液分析儀；雅培CD-Ruby全自動血細胞分析儀。

1.3耗材試劑3%水合氯醛，眼科剪，止血鉗，刀片，滅菌棉簽，75%酒精，一次性采血管，EDTA抗凝管。動物血液分析儀檢測試劑，含稀釋液（CELLPACK），20 L/盒；血紅蛋白溶血素（SULFILOYSER），5 L/盒；嗜堿性粒細胞溶血素（STROMATOLYSERFB），5 L/盒；白細胞分類溶血素（STROMATOLYSER-4DL），2 L/盒；白細胞分類染色液（STROMATOLYSER-4DS），42 mL×3/盒；網(wǎng)織紅細胞稀釋染色液（RET-SEARCHⅡ），1 L（Lyse）+12 mL（Dye）/盒；清潔劑（CELLCLEAN），50 mL；XT-2000iV專用耗材、質(zhì)控物。

1.4試驗方法SD大鼠空腹12 h后腹腔注射麻醉劑，注射量為0.5 mL/100g。SD大鼠麻醉后采用仰臥位，以翻正反射消失且無疼痛反應(yīng)作為SD大鼠麻醉完畢適合采血的標(biāo)準(zhǔn)，每只大鼠用采血針從腹主動脈采集血液3 mL至EDTA抗凝管，輕輕搖動至與抗凝劑完全混合。并在2 h內(nèi)用Sysmex XT-2000iV全自動動物血液分析儀和雅培CD-Ruby全自動血細胞分析儀分別測定同一份血樣的紅細胞數(shù)量（RBC）、白細胞數(shù)量（WBC）、嗜中性白細胞數(shù)量（NEUT）、淋巴細胞數(shù)量（LYMP）、單核細胞數(shù)量（MONO）、嗜酸性粒細胞數(shù)量（EOS）、嗜堿性粒細胞數(shù)量（BASO）、嗜中性粒細胞百分比（NEUT%）、淋巴細胞百分比（LYMP%）、單核細胞百分比（MONO%）、嗜酸性粒細胞百分比（EOS%）、嗜堿性粒細胞百分比（BASO%）、血紅蛋白濃度（HGB）、紅細胞壓積（HCT）、平均紅細胞體積（MCV）、平均血紅蛋白含量（MCH）、平均血紅蛋白濃度（MCHC）、紅細胞分布寬度（RDW）、血小板數(shù)量（PLT）和血小板分布寬度（PDW）。

1.5統(tǒng)計方法數(shù)據(jù)統(tǒng)計使用SPSS19.0統(tǒng)計分析軟件。試驗所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用t檢驗對結(jié)果進行分析比較。P＜0.05為差異顯著；P＜0.01為差異極顯著。

2　結(jié)果

將凝血或溶血的血液標(biāo)本棄去不用后得到16只雄性和14只雌性SD大鼠血液標(biāo)本，檢測結(jié)果見表1。SD大鼠的平均血紅蛋白濃度、平均血紅蛋白含量、白細胞數(shù)量、單核細胞數(shù)量、單核細胞百分比、嗜堿性粒細胞數(shù)量、嗜堿性粒細胞百分比、嗜中性白細胞百分比、嗜酸性粒細胞百分比、淋巴細胞數(shù)量、淋巴細胞百分比、血小板數(shù)量、血小板分布寬度等指標(biāo)，兩種儀器檢測的結(jié)果差異極顯著（P＜0.01）；血紅蛋白濃度、嗜中性白細胞數(shù)量、紅細胞分布寬度等指標(biāo)差異顯著（P＜0.05）；紅細胞數(shù)量、紅細胞壓積、平均紅細胞體積、嗜酸性粒細胞數(shù)量等指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果表明，SD大鼠20項血液生理指標(biāo)大部分有差異，除嗜酸性粒細胞外，白細胞和血小板指標(biāo)差異顯著或極顯著，紅細胞指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05），但平均血紅蛋白含量和濃度差異極顯著（P＜0.01）。

3　討論

進行生物醫(yī)學(xué)研究的四大基本要素是實驗動物、儀器設(shè)備、信息資料和化學(xué)試劑（即Animal，E-quipment，Information and Reagent）。儀器設(shè)備作為生命科學(xué)研究四個要素之一，其檢測的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確與否直接影響試驗的結(jié)果。動物的血細胞形態(tài)、大小、數(shù)量和分類與人有明顯差異，不同種類動物之間的血液學(xué)特性也不相同。韓芬如［14］研究認為，隨著脊椎動物由低等向高等進化，紅細胞的數(shù)量由少增多；細胞的形態(tài)由長橢圓形、橢圓盤形、雙凹橢圓形到雙凹圓盤形；細胞體積由大變小，由有核到無核，細胞分化程度越高；白細胞的種類和血小板的數(shù)量增多。因此，不同種類動物的血液指標(biāo)檢測對儀器的要求也不一樣。而采用實驗動物專用的全自動多物種動物血液分析儀、生化分析儀和配套試劑進行測定，取得的血液生理生化指標(biāo)，無疑更加科學(xué)、準(zhǔn)確和可靠。

表1　不同儀器檢測SD大鼠血液生理指標(biāo)的比較（±s）

檢測結(jié)果顯示，同一血液樣品用兩種不同血細胞分析儀檢測血液常規(guī)20項指標(biāo)，其中13項指標(biāo)有極顯著差異，3項指標(biāo)顯著差異，4項指標(biāo)無差異，說明不同儀器對大鼠血液指標(biāo)檢測有影響。這與汪嘉等［15］的研究結(jié)論一致，其認為在動物血細胞分類計數(shù)試驗研究時，選用具備相應(yīng)動物模式的血細胞分析儀更嚴謹。血細胞分析儀是根據(jù)其檢測對象的生物學(xué)特征采用相應(yīng)的設(shè)計原理、應(yīng)用軟件以及配套試劑等設(shè)計制造而成的［16］。人用血細胞分析儀是針對人類的血液學(xué)特性而設(shè)計制造的，而動物血液分析儀則根據(jù)不同動物種類，設(shè)計不同動物檢測模式，在細胞分類、大小、參考值范圍等方面更符合不同種類動物血液學(xué)特征。

［1］方喜業(yè).醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué)［M］.l版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1995：236-237.

［2］施新猷.醫(yī)學(xué)動物實驗方法［M］.l版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1989：522-524.

［3］李厚達.實驗動物學(xué)［M］.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1992：413-420.

［4］苗明三.實驗動物和動物實驗技術(shù)［M］.1版.北京：中國中醫(yī)藥出版社，1997：336-354.

［5］鐘品紅.哺乳類實驗動物［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1987：403-408.

［6］Mitruka B M.Biochemical and Hematotogical Reference Values In Normal Experimental Animals［M］.Masson Publishing USA，Inc，1977.

［7］胡建武，盧勝明，車路平，等.10種常見SPF級實驗大、小鼠血液學(xué)及生化指標(biāo)正常參考值的探討［J］.實驗動物科學(xué)，2007，24（2）：5-10.

［8］詹純列，肖育華，李新春，等.普通級、SPF級SD、Wistar大鼠血液生化常值的測定與比較［J］.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2004，14（2）：94-96.

［9］王蔭槐，孫淑華，王玉琢，等.已知菌Wistar大鼠血液血清生化正常值的測定［J］.實驗動物科學(xué)，1992，9（2）：11-13.

10］仉慧敏，孫淑華，胡曉燕，等.無菌大鼠血液學(xué)及血液生化指標(biāo)正常參考值的測定［J］.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2011，21（5）：26-31.

［11］王莉，唐大軒，熊靜悅，等.不同月齡SPF級SD大鼠血液學(xué)及生化指標(biāo)的變化［J］.醫(yī)學(xué)動物防制，2009，25（12）：903-905，908.

［12］陳穎，盧祺炯，宣堯仙.實驗動物血液學(xué)指標(biāo)不同測定時間測定結(jié)果的研究［J］.中國藥理學(xué)通報，2003，19（9）：1079-1080.

［13］譚劍斌，陳瑞儀，胡帥爾.SD大鼠麻醉后生化指標(biāo)變化［J］.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2008，18（1）：43-45.

［14］韓芬如.四種實驗動物血液有形成分比較研究［J］.甘肅高師學(xué)報，2002，7（5）：51-53.

［15］汪嘉，李智，左玫，等.不同血細胞分析儀及其模式在大鼠白細胞分類計數(shù)中的比較研究［J］.檢驗醫(yī)學(xué)，2005，20（3）：201-203.

［16］顧呈華，陸羅定，趙榮.血細胞分析儀的應(yīng)用及相關(guān)問題探討［J］.江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，22（3）：68-69.

Effects on blood physiological indexes of SD rats from different detecting instruments

Xie Jindong Yang Yanyan Lin Wei Yu Chunying Zhou Jianhua Liu Deqiang Wang Xunli*
（Laboratory Animal Center，F(xiàn)ujian University of Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou 350122）

Objective The purpose of the study was to investigate the level of blood physiological values for SD rats between special experimental animal blood cell analyzer and medical blood cell analyzer.Methods 200 g weight SD rats（18 male and 18 female）were chosen and fed in SPF environment，which fasted before experiment and blooded after anesthesia.The blood samples were collected and tested for physiological values using special experimental animal blood cell analyzer and medical blood cell analyzer，and the results of two groups were compared.Results There were extremely significant differences in HGB，MCH，WBC，LYMP，MONO，BASO，NEUT%，MONO%，EOS%，BASO%，LYMP%，PLT and PDW of SD rats between special experimental animal blood cell analyzer and medical blood cell analyzer（P＜0.01）.There were significant differences in MCHC，NEUT and RDW of SD rats between special experimental animal blood cell analyzer and medical blood cell analyzer（P＜0.01）.However，there were not significant differences in RBC，HCT，MCV and EOS（P＞0.05）.Conclusions Thus，the results suggested that different detecting instruments could influence some blood physiological values of SD rats.

Detecting instrument SD rats Blood physiological indexes

A

1003-4331（2016）05-0003-03

2014年福建中醫(yī)藥大學(xué)校管課題（X2014025）資助。

謝金東（1975-），男，實驗師，主要從事實驗動物飼養(yǎng)繁殖和動物實驗研究工作。E-mail：584233760@qq.com。

王訓(xùn)立（1964-），男，研究員，主要從事實驗動物學(xué)和生殖生物學(xué)研究工作。E-mail：wangxunli@139.com。