徐天華，楊振海，陳 光，李遠宏，高興華，陳洪鐸

?

在體共聚焦激光掃描顯微成像檢測黑眼圈患者下眼瞼微血管數(shù)量的變化

徐天華，楊振海，陳 光，李遠宏，高興華，陳洪鐸

徐天華

目的 通過在體共聚焦激光掃描顯微成像活體檢測患者眼瞼黑眼圈顏色最深處的真皮內(nèi)微血管數(shù)量的變化。方法 60例黑眼圈女性受試者和10名正常對照女性受試者入選本研究。根據(jù)年齡，分為A（21～30歲）和B（31～40歲）兩組；每組又根據(jù)眼圈皮膚顏色分為青紫色組和棕黑色組兩亞組，每亞組含4個小組：正常對照組、輕度組、中度組和重度組。所有受試者均行在體共聚焦激光掃描顯微成像檢查。結(jié)果 棕黑色和青紫色黑眼圈受試者在體共聚焦檢測結(jié)果顯示，中度組和重度組微血管計數(shù)均顯著高于正常對照組，差異具有統(tǒng)計學意義。結(jié)論 下眼瞼微血管數(shù)量增加，與黑眼圈嚴重程度成正相關(guān)，提示新生血管數(shù)量增加可能是黑眼圈形成的重要因素之一。

黑眼圈；微血管；共聚焦激光，在體

［J Pract Dermatol， 2016， 9（4）：250-252］

黑眼圈可分為兩種顏色，一種是青紫色黑眼圈，另一種是棕黑色黑眼圈。黑眼圈由多種因素引起，其中先天性真皮黑素的沉積、炎癥后色素沉著過度（主要是遺傳性過敏癥或過敏性接觸性皮炎等［1，2］）是引起棕黑色黑眼圈的主要原因。青紫色黑眼圈多數(shù)認為是因為微血管的靜脈血液滯留，血液流速緩慢，血液量增多，血氧飽和度下降［3］，從外表看來，皮膚就出現(xiàn)暗藍色色調(diào)。故黑眼圈與微血管數(shù)量的相互關(guān)系是研究黑眼圈發(fā)病機制的重要切入點之一。本研究通過在體共聚焦激光掃描顯微成像活體觀察了黑眼圈患者下眼瞼皮損處真皮內(nèi)微血管的數(shù)量變化及其與黑眼圈級別和顏色的關(guān)系，為黑眼圈治療提供新的思路。

1 材料和方法

1.1 受試者

受試者均來自中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院皮膚科門診。入選標準：女性，年齡25～40歲；黑眼圈病史＞1年，且面部皮膚健康，眼周無雀斑、黃褐斑、太田痣及鶴青樣痣，無濕疹或皮炎等疾?。粺o化妝品皮膚過敏史及其他嚴重過敏史；無系統(tǒng)性疾病者；自愿參加本試驗并簽署知情同意書。共60例黑眼圈患者、21～30歲和31～40歲各5名正常對照組女性受試者入選本研究。

1.2 方法

1.2.1 術(shù)前準備 受試者用清水及洗面奶/液清洗面部。溫度20～25℃，濕度40%～50%的室內(nèi)休息30 min。以提問方式獲取受試者基本資料，建立個人檔案。指定照像室照相，留取受試者正面雙眼部照片。由未參與試驗的3名醫(yī)生根據(jù)受試者照片目測判斷黑眼圈嚴重程度（0～10分），取平均值，1～3分為輕度，4～6分為中度，＞7分為重度。

根據(jù)年齡，分為A（21～30歲）和B（31～40歲）兩組；每組又根據(jù)顏色分為青紫色組和棕黑色組兩亞組。每亞組含4個小組：正常對照組、輕度組、中度組和重度組，每小組5例受試者。所有受試者均行在體共聚焦激光掃描顯微成像檢查。

1.2.2 實驗步驟 患者取平臥位，選取右側(cè)下眼瞼正下方黑眼圈處皮膚進行低倍皮膚鏡成像和皮膚CT成像。皮膚CT光源為830 nm的激光，輸出功率為0～16 mW可調(diào)，橫向分辨率為2 μm （XY水平方向），軸向分辨率為1.6 μm（Z軸方向），鏡頭為30倍水浸物鏡，介質(zhì)分別為蒸餾水（粘合窗與皮膚間）和超聲膠（鏡頭和粘合窗間），掃描深度為300 μm以內(nèi)的表皮層及真皮淺層組織。

圖1 在體共聚焦激光掃描顯微成像圖真皮內(nèi)微血管計數(shù)

1.2.3 指標評價 在體共聚焦激光掃描顯微成像檢測下眼瞼正下方黑眼圈處的真皮內(nèi)微血管數(shù)量，隨機留取5個視野，由醫(yī)生根據(jù)所檢測圖像進行計數(shù)，取均值。

1.3 統(tǒng)計學方法

所有數(shù)據(jù)采用S P S S 13.0軟件包進行分析，P＜0.05認為有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

在體共聚焦激光掃描顯微成像圖像的真皮內(nèi)微血管顯示：A組（棕黑色為主）的所有年齡組別的輕度組與正常對照組相比，下眼瞼的微血管計數(shù)無顯著增加，差異無統(tǒng)計學意義；中和重度組與正常對照組相比，微血管計數(shù)均顯著增加，差異具有統(tǒng)計學意義（圖1）。重度黑眼圈患者下眼瞼在體共聚焦激光掃描顯微成像圖像的真皮內(nèi)微血管明顯增多（圖2）。B組（青紫色為主）的所有年齡組別的輕、中和重度組與正常對照組相比，下眼瞼的微血管計數(shù)均顯著增加，差異具有統(tǒng)計學意義；輕、中和重度各組間差異具有統(tǒng)計學意義（圖1）。重度黑眼圈患者下眼瞼在體共聚焦激光掃描顯微成像圖像的真皮內(nèi)微血管明顯增多（圖2）。

3 討論

圖2 受試者面部在體共聚焦檢測成像圖（紅色箭頭示真皮內(nèi)微血管）

黑眼圈分兩種顏色，一種是青紫色黑眼圈，這是因為微血管的靜脈血液滯留；另一種是棕黑色黑眼圈，因黑色素生成與代謝不全而產(chǎn)生，兩種黑眼圈產(chǎn)生的原因完全不同。紫色黑眼圈通常發(fā)生在20歲左右，生活作息不正常的人尤難避免，主要是因為其微血管內(nèi)血液流速緩慢，血液量增多而氧氣消耗量提高，缺氧血紅素大大增加的結(jié)果，從外表看來，皮膚出現(xiàn)暗藍色調(diào)。由于眼睛周圍有較多微血管，因此睡眠不足、眼睛疲勞、壓力、貧血等因素，都會造成眼周肌膚淤血及水腫。棕色黑眼圈的成因則與年齡增長息息相關(guān)，長期日曬造成色素沉淀在眼周，久而久之就會形成揮之不去的黑眼圈；另外，血液滯留造成的黑素代謝遲緩，肌膚過度干燥，均會導致棕色黑眼圈的形成?？傊?，黑眼圈是由多重病源因素構(gòu)成，包括真皮黑素的沉積，炎癥后色素沉著過度，遺傳性過敏癥或過敏性接觸性皮炎，眼眶周的水腫，脈管系統(tǒng)的表面位置，以及皮膚松弛導致的陰影等［4］。

Matsumoto等［5］發(fā)現(xiàn)下眼瞼的皮膚微血管數(shù)量比面頰部多，血流速度比面頰部快。當皮膚溫度下降時，皮膚血管收縮使皮膚血流停滯和血液淤積，下眼瞼皮膚血氧飽和度明顯下降，從而出現(xiàn)黑眼圈。Masuda等［6］應用手提式反射分光光度儀測量表明，有黑眼圈的人其下眼瞼皮膚血氧飽和度明顯低于無黑眼圈的人，其下眼瞼皮膚黑色素和血紅蛋白的含量增高。血紅蛋白的含量增高引起不溶解的血紅蛋白的代謝產(chǎn)物——含鐵血黃素的蓄積。

共聚焦激光掃描顯微成像是以激光做光源，經(jīng)兩次聚焦對活體組織進行掃描，同時將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘杺鬏斨劣嬎銠C，在屏幕上呈現(xiàn)出橫切面的圖像。并根據(jù)不同細胞對光線的折射率不同而顯現(xiàn)出組織結(jié)構(gòu)。掃描過程中根據(jù)細胞器和組織結(jié)構(gòu)自身的折射率不同對圖像加以分辨，如皮膚組織中黑色素和角蛋白具有較高的折射率，是自然對照物［7］。本研究選用共聚焦激光掃描顯微成像檢測代替黑眼圈部位組織活檢，克服了離體檢測的不準確性，直觀的觀察了活體的下眼瞼的皮膚微血管數(shù)量。

本實驗研究結(jié)果顯示，棕黑色為主的黑眼圈受試者下眼瞼的輕度組與正常對照組相比，微血管計數(shù)無顯著增加，差異無統(tǒng)計學意義；中、重度與正常對照組相比，微血管計數(shù)均顯著增加，差異具有統(tǒng)計學意義；青紫色為主的黑眼圈受試者下眼瞼的輕、中和重度組與正常對照組相比，微血管計數(shù)均顯著增加，差異具有統(tǒng)計學意義。

微血管增多可能與皮膚組織內(nèi)血液流動速度減慢，皮膚組織內(nèi)血液供應減少，皮膚組織相對處于缺血缺氧狀態(tài)，缺血缺氧能夠誘導上調(diào)HIF-la、MMP-2 和MMP-9的表達。HIF-1a存在于機體的所有細胞中，在正常情況下一旦分泌后會立即降解，在細胞處于缺氧環(huán)境下HIF-1a、β聚合使HIF-1a在細胞內(nèi)聚集，其下游的相關(guān)基因被順序啟動。HIF-la下游靶基因眾多，包括促紅細胞生成素、血管內(nèi)皮細胞生長因子、一氧化氮合酶、葡萄糖轉(zhuǎn)運因子1、3-糖酵解酶等，它們的表達導致皮膚組織氧氣運輸能力增強、促進皮膚血管生成、皮膚細胞有氧代謝減慢及無氧代謝增強等，使得皮膚細胞在缺血缺氧環(huán)境中易于生存［8，9］。

推測黑眼圈組的下眼瞼皮膚血流減少，皮膚血氧飽和度明顯下降，促進皮膚血管生成，隨著新生血管增多，血流停滯和血液淤積更加嚴重，加上不溶解血紅蛋白代謝產(chǎn)物——含鐵血黃素的蓄積，均使下眼瞼皮膚血紅蛋白和黑色素的含量增高，引起下眼瞼皮膚顏色加深，造成黑眼圈。

筆者之前的研究中通過共聚焦顯微成像檢測發(fā)現(xiàn)棕黑色黑眼圈患者真皮黑素沉積較正常對照組明顯增多［10］。推測在棕黑色黑眼圈輕度組中黑素沉積是其形成的重要因素；在青紫色和棕黑色黑眼圈中度以上組新生血管數(shù)量增加可能是黑眼圈形成的重要因素之一，下眼瞼微血管數(shù)量增加與黑眼圈程度可能存在正相關(guān)。因本實驗受試者數(shù)量較少，所得結(jié)果可能出現(xiàn)偏差，有待今后大樣本研究結(jié)果進一步證實。

［1］ Marks MB. Recognizing the allergic person ［J］. Am Fam Physician，1977， 16（1）：72-79.

［2］ Marks MB. Allergic shiners. Dark circles under the eyes in children ［J］. Clin Pediatr （Phila）， 1966， 5（11）：655-658.

［3］ Oresajo C， Dickens M， Znaiden A. Eye area problems puffiness， bags，dark circles and crowsfeet ［J］. Cosmet Toiletries， 1987， 102：29-34.

［4］ Gupta MA， Gupta AK. Dissatisfaction with skin appearance among patients with eating disorders and non-clinical controls ［J］. Br J Dermatol， 2001， 145（1）：110-113.

［5］ Matsumoto M， Kobayashi N， Osamu H， et al. Study on the mechanisms associated with dark circles ［J］. J Soc Cosmet Chem， 2000，34：152-159 （in Japanese）.

［6］ Masuda Y， Takahashi M， Satou A， et al. Dermatological study on dark eye circles and their treatment with newly developed cosmetics ［J］. J Soc Cosmet Chem， 2004， 38： 202-210 （in Japanese）.

［7］ Rajadhyaksha M， González S， Zavislan JM， et al. In vivo confocal scanning laser microscopy of human skin II： advances in instrumentation and comparison with histology ［J］. J Invest Dermatol， 1999， 113（3）：293-303.

［8］ Brugarolas J， Kaelin WG Jr. Dysregulation of HIF and VEGF is a unifying feature of the familial hamartoma syndromes ［J］. Cancer Cell， 2004， 6（1）：7-10.

［9］ Kim SJ， Rabbani ZN， Dewhirst MW， et al. Expression of HIF-1alpha，CA IX， VEGF， and MMP-9 in surgically resected non-small cell lung cancer ［J］. Lung Cancer， 2005， 49（3）：325-335.

［10］ Xu TH， Yang ZH， Li YH， et al. Treatment of infraorbital dark circles using a low-fluence Q-switched 1，064-nm laser ［J］. Dermatol Surg，2011， 37（6）：797-803.

Assessment of the amount of microvessels in the lower eyelid of infraorbital dark circles using in-vivo laser reflectance confocal microscopy

XU Tian-hua，YANG Zhen-hai，CHEN Guang，et al
Department of Dermatology， the First Afiliated Hospital of China Medical University， Shenyang 110001， China

Objective To assess the amount changes of microvessels in the lower eyelid with dark-brown type of infraorbital dark circles （DC）. Methods The skin biopsies were collected among the 70 patients who received plastic surgery of the lower eyelid， one half of whom had DC. The subjects were divided into two groups： A （＜30 yrs） and B （31～40 yrs）， and each group was divided into four grades： normal，mild， moderate and heavy. The dermal melanin deposition and the amount of microvessels of these subjects were examined using in-vivo laser reflectance confocal microscopy （RCM）. Results Significant increase in the density of microvessels was observed in the moderate and heavy group with mainly red/violet and dark/brown group with DC compared to those without. The differences between mild and moderate group， moderate and heavy group were statistically significant. Conclusion An increase of microvessels amount was observed at the site of lower eyelid with dark circles. The increase of microvessels amount seems to be one of the factors that induce dark circles.

Dark circle，infraorbital；Microvessels；Laser reflectance confocal microscopy，in-vivo

R443.8

A

1674-1293（2016）04-0250-03

2015-11-25

2016-01-19）

（本文編輯 耿建麗）

10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20160408

2012年度遼寧省博士科研啟動基金（編號：遼科發(fā)2012.38號）

110001 沈陽，中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院皮膚科（徐天華，楊振海，陳光，李遠宏，高興華，陳洪鐸）

徐天華， 副教授、副主任醫(yī)師，碩士生導師，研究方向：激光/光免疫皮膚病學、美容皮膚病學、皮膚真菌病學，E-mail： xutian5151@163.com