李俊波， 楊小麗， 楊金香*， 來麗娜， 劉學慧

(長治醫(yī)學院藥學系，山西長治 046000)

鹽酸二甲雙胍(Metformin Hydrochloride，MFH)是口服雙胍類降糖藥，可增加機體對胰島素的敏感性，同時增強外周組織對葡萄糖的攝取和利用，從而達到降糖的目的，是治療非胰島素依賴型糖尿病的主要藥物[1]。目前，測定MFH的方法主要有電位滴定法[2]、紫外分光光度法[3]、毛細管電泳法[4]、高效液相色譜法[5]、電化學法[6]以及色譜-質譜聯(lián)用方法[7]等。上述方法中，滴定分析法和紫外分光光度法儀器廉價、操作簡便，但是對于痕量樣品測定準確度、靈敏度較差；高效液相色譜法需要對樣品進行前處理并大量使用有機溶劑，操作繁瑣、分析時間較長；色譜-質譜聯(lián)用方法儀器設備昂貴，操作要求和運行成本高。因此，發(fā)展簡便、快速、高靈敏度測定MFH的新方法，對于研究藥物作用機制、藥物劑型，體內代謝過程、毒副作用等仍具有重要意義。

共振瑞利散射(Resonance Rayleigh Scattering， RRS)是近年來發(fā)展迅速的一種新的分析技術。由于其操作簡便、靈敏度高、選擇性好而被廣泛應用于藥物[8]、生物大分子[9]、無機離子[10，11]等的測定。但是，目前尚未見到運用RRS法測定鹽酸二甲雙胍的文獻報道。本實驗在pH=3.0的B-R緩沖溶液中，以曙紅Y(Eosin Y，EY)為探針，研究并建立了測定痕量MFH的RRS新方法。實驗表明，EY與MFH反應形成離子締合物并在292 nm波長處有最大RRS峰，且在一定范圍內，MFH的濃度與散射信號的增強呈良好的線性關系。該方法用于實際樣品的測定，結果令人滿意。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

日立F-4600型熒光分光光度計(日本，日立公司)；TU-1901型紫外-可見分光光度計(北京普析通用公司)；pHS-3C型酸度計(上海精密科學儀器有限公司)。

MFH對照品儲備溶液：精密稱取適量MFH對照品(中國食品藥品檢定研究院)，用水溶解并稀釋，配制成質量濃度為100 μg/mL儲備溶液，使用時稀釋成10 μg/mL；EY(天津市科密歐化學試劑有限公司)溶液：2.5×10-4mol/L。所用試劑均為分析純，實驗用水為超純水。

鹽酸二甲雙胍片(北京中惠藥業(yè)有限公司，規(guī)格：0.25 g/tablet)。

1.2 實驗方法

2 結果與討論

2.1 RRS光譜

圖1為MFH-EY體系的RRS光譜。由圖1A可見，MFH和EY的RRS 均很微弱，二者在B-R緩沖體系中生成締合物的RRS光譜卻顯著增強，其最大散射波長位于292 nm處。由圖1B可知，最大散射波長處的RRS強度變化在特定范圍內與MFH濃度變化呈線性關系。方法可用于MFH的定量測定。

圖1 MFH、EY和MFH-EY的RRS光譜Fig.1 RRS spectra of MFH,EY and MFH-EY(A):1.MFH;2.EY;3.MFH-EY;cMFH=1.5 μg/mL,cEY=2.5×10-5 mol/L,B-R buffer system (pH=3.0);(B):MFH-EY; cEY=2.5×10-5 mol/L;cMFH (1-5):0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 μg/mL;B-R buffer system (pH=3.0).

2.2 反應條件的優(yōu)化

2.2.1反應介質及用量考察了HAc-NaAc、HCl-NaAc和B-R緩沖溶液對體系散射強度的影響。結果表明：在pH=2.5～3.5范圍內，使用B-R緩沖溶液時，體系的散射強度△IRRS較大，方法有較高靈敏度。故實驗選取pH=3.0的B-R緩沖溶液作為反應介質，用量為1.0 mL。

2.2.3反應溫度的影響考察了反應溫度對于散射強度的影響。結果表明：反應溫度≤18 ℃時，體系的散射強度較小，可能是由于反應進行較慢；反應溫度為18～30 ℃時，散射強度達到最大且基本穩(wěn)定；當反應溫度>30 ℃時，散射強度隨溫度升高呈現(xiàn)顯著降低趨勢，當反應溫度達到75 ℃時，基本測定不到體系的散射值。原因可能是離子締合物是由靜電引力和疏水作用力結合，隨著溫度的升高，分子熱運動加劇，超過了靜電引力和疏水作用力的束縛，離子締合物解離，導致體系的△IRRS下降[12]。因此實驗選擇反應溫度為室溫(18～30 ℃)。

2.2.4反應時間及體系穩(wěn)定性在優(yōu)化條件下，考察了不同反應時間對體系穩(wěn)定性的影響。結果表明：締合反應在5 min內即可完成，穩(wěn)定時間在2 h以上。為確保反應完全，實驗選取反應時間為10 min。

2.3 標準曲線

在優(yōu)化的反應條件下，測定了不同質量濃度的MFH與EY形成離子締合物的△IRRS，并對MFH的質量濃度(c)進行線性回歸，線性范圍為0.05～2.5 μg/mL，線性回歸方程為：△I=567.4c-167.9，相關系數(shù)為0.9996，方法的檢出限(3σ)為0.02 μg/mL。

3 方法的選擇性及分析應用

3.1 選擇性

3.2 分析應用

3.2.1片劑中MFH的測定取20片MFH(規(guī)格0.25 g/tablet)，稱重后粉碎，精密稱取適量(約相當于鹽酸二甲雙胍100 mg)，置100 mL容量瓶中，加水適量，超聲處理使之溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10 mL至100 mL容量瓶中，加水定容后振搖。將10 mL此樣品移至100 mL容量瓶中加水定容，振蕩搖勻得到被測樣品。取被測液1 mL，依照實驗方法測定MFH含量，將測定結果與藥典規(guī)定項下方法[3]比較，結果見表1。

表1 片劑中MFH含量的測定結果(n=5)

*Chinese pharmacopoeia.

3.2.2尿樣中MFH含量的測定取正常人新鮮尿樣15份，過濾除雜后稀釋10倍備用。準備3支比色管，向其中各加入1.0 mL稀釋后的尿樣，1.0 mL pH=3.0的B-R緩沖溶液和1.0 mL 2.5×10-4mol/L的EY溶液，按實驗方法和標準加入法測定含量及回收率，結果列于表2。

表2 人尿樣中MFH含量的測定結果

*Not detected.

從表1和表2可以看出，該方法應用于片劑和尿樣中MFH的測定，相對標準偏差(RSD)為1.3%～2.5%，回收率在100.5%～101.4%之間，方法具有較好的重現(xiàn)性和準確度，檢測結果與藥典具有可比性，說明該方法可用于實際樣品的測定。

4 結論

在酸性介質中，曙紅Y可以與鹽酸二甲雙胍形成離子締合物，引起共振瑞利散射光譜顯著增強，可用于定量測定鹽酸二甲雙胍的含量。方法簡便、快速、靈敏，有較高的準確度、精密度和良好地選擇性。