廣東省東莞東華醫(yī)院（523110）黎秀平

小兒百部止咳糖漿由百部、陳皮、杏仁、桑白皮等11味中藥組成的中藥復(fù)方制劑，具有化痰通絡(luò)、清熱解毒等功效，目前多用于小兒肺熱咳喘及痰多等治療[1]。方中主要成分之一的橙皮苷為二氫黃酮衍生物中的一種，能夠抗菌、抗氧化、抗癌，還可以對免疫力進行調(diào)節(jié)。根據(jù)大量研究結(jié)果顯示，黃酮類化合物主要有兩種作用，促進氧化作用和抗氧化作用[2]，橙皮苷的促氧化作用特別強，能夠誘導(dǎo)人類基因發(fā)生毒害變化。目前經(jīng)常使用分光光度法及高效液相色譜法來測定藥品中的橙皮苷，以此來控制藥品質(zhì)量[3]。目前對于止咳藥品中橙皮苷含量測定尚不多見，為探究此類藥品中橙皮苷含量，本文以小兒百部止咳糖漿為例，探究高效液相色譜法測定止咳類藥物中的橙皮苷含量，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗儀器及材料

1.1.1 儀器 色譜儀選擇Prostar325型高效液相色譜儀，供貨商為美國的Varian公司；清洗器選擇型號為KQ-250的超聲波清洗器，供貨商為昆山市的超聲儀器有限公司；選擇型號是BS110S的電子天平，供貨商為北京的賽多利斯有限公司；選擇型號是Cary 50的分光光度計，供貨商為美國的Varian公司。

1.1.2 試劑及材料 橙皮苷（中國藥品研究所提供，批號：20150223，含量98.0%），甲醇為色譜純（國藥集團化學(xué)試劑有限公司），冰醋酸為分析純（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。實驗藥品為小兒百部止咳糖漿（四川天誠制藥有限公司提供，批號：20141217-20150612）。

1.2 方法

1.2.1 對照品溶液制備方法 選擇50ml的容量瓶，橙皮苷對照品于105℃干燥后，經(jīng)十萬分位天平秤取11.02mg，轉(zhuǎn)移入容量瓶后，取適量甲醇，混合均勻溶液，澄清后加甲醇至刻度線，然后選擇10ml容量瓶，取1.5ml的溶液加進去，再次加甲醇，到達刻度線即可，混合均勻，最終獲得的溶液為對照品溶液(33.06ug/ml)。

1.2.2 樣品溶液的制備方法 取止咳藥品5ml，將甲醇10ml加入其中進行混合，完成后超聲處理15min，之后進行抽濾5次，將獲得的濾液進行混合，容器需要使用少許甲醇溶液反復(fù)清洗，清洗液和濾液混合在一起倒入50ml容量瓶中，最后加甲醇至刻度獲得供試品溶液。

1.2.3 分析方法 測量橙皮苷的最大吸收波長：使用儀器為紫外可見分光光度計，首先使用精密天平秤取10mg的對照品，倒入甲醇溶液將對照品進行稀釋，使最終溶液為100ml，之后選取50ml容量瓶，抽取5ml稀釋液加入其中，然后加入甲醇，達到刻度處停止。在紫外分光光度計上進行全波長掃描，經(jīng)圖譜分析得最大吸收峰波長是285nm，選取285nm波段進行液相分析，發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)干擾少適宜于本次含量測定。

色譜條件：ODS-C18（4.6mm×250mm， 5μm），流動相：甲醇-水-醋酸（34∶60∶6），流速：1.0ml·min-1檢測波長285nm，柱溫：25℃。

1.3 系統(tǒng)適用性試驗

1.3.1 空白溶劑的篩選 選取流動相時，不會出現(xiàn)任何雜質(zhì)峰，對測定不會造成影響，因此在制作供試品時選擇的空白溶劑為流動相。

1.3.2 塔板數(shù)、拖尾因子、分離度 經(jīng)圖譜分析顯示，理論塔板數(shù)為8238，拖尾因子為1.02，分離度良好。

1.3.3 精密度試驗 精密量取10μL對照品溶液，重復(fù)進樣6次，分別測定峰面積，并計算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.2%（小于2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，結(jié)果表明本實驗精密度良好。

1.3.4 重復(fù)性試驗 取百部止咳糖漿樣品6份，參考“1.2.2”項下供試品制備過程制備供試品，測定其中橙皮苷含量，得到6份供試品溶液含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.9%（小于2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

1.3.5 線性關(guān)系考察 使用對應(yīng)移液管精密量取“1.2.1”項下橙皮苷對照品溶液，1，2，3，4，5ml，轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，搖勻后，即得5個不同濃度的橙皮苷對照品溶液，經(jīng)0.2um微孔濾膜過濾后，進樣1為橫坐標(biāo)，通過excel軟件擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程為：Y=75357X-34237.4，r=0.9997結(jié)果表明，橙皮苷濃度在3.306～16.530ug/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

1.3.6 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液與對照品溶液，分別在0h、2h、4h、8h、12h、24h精密量取10μL注入液相色譜儀，進樣測定，對照品溶液峰面積的RSD為1.8%（小于2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。結(jié)果表明對照品和供試品溶液至少在24h內(nèi)穩(wěn)定。

1.3.7 回收率實驗 分別取約5ml同一批次的供試品，保存至3個錐形瓶內(nèi)，依次加橙皮苷對照品2.61mg、4.23mg和8.73mg，根據(jù)制作供試品的步驟，取得適量的續(xù)濾液，取10ul完成進針，對峰面積進行測定，分別計算回收率為101.31%、100.25%和99.26%，平均回收率為100.27%，RSD為1.37%，與藥典標(biāo)準(zhǔn)相符。

1.3.8 樣品中橙皮苷含量測定 在同一色譜條件下分別把對照品溶液與不同批次供試品溶液進行含量測定，采用外標(biāo)法計算橙皮苷含量，結(jié)果見附表。

2 結(jié)果

采用高效液測定結(jié)果顯示，小兒百部止咳糖漿中橙皮苷含量如附表所示。

附表 小兒百部止咳糖漿中橙皮苷含量

3 討論

本次實驗所選方法準(zhǔn)確性高、精密度好、重現(xiàn)性和相關(guān)性均符合相關(guān)要求，所得小兒百部止咳糖漿中，橙皮苷含量（19.34±0.18）ug/ml。結(jié)果提示，高效液相法測定橙皮苷的含量具有準(zhǔn)確性高、精密程度好、有良好的線性關(guān)系，可考慮作為小兒百部止咳糖漿中橙皮苷含量測定方法，且可考慮在同類藥物中推廣。