寧海恩，凌江紅，張　智，王煜姣，上官鑫超（廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西南寧530021）

酶解法分離與同源血清培養(yǎng)SD大鼠胃Cajal間質(zhì)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究

寧海恩，凌江紅，張智，王煜姣，上官鑫超
（廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西南寧530021）

［目的］探討體外酶解法分離、同源血清培養(yǎng)SD大鼠胃Cajal間質(zhì)細(xì)胞（ICC）的實(shí)驗(yàn)方法。［方法］無(wú)菌條件下分離大鼠胃竇組織，酶解法分離制備ICC細(xì)胞懸液，接種于M199完全培養(yǎng)基（含10%大鼠同源血清，不含胎牛血清及重組鼠類干細(xì)胞因子）進(jìn)行培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，適時(shí)換液，MTT法測(cè)定ICC對(duì)數(shù)生長(zhǎng)曲線，C-kit特異性抗體免疫熒光染色法鑒定ICC，并取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。［結(jié)果］同源血清培養(yǎng)ICC成活并體現(xiàn)其特有的生長(zhǎng)曲線及形態(tài)學(xué)特征，C-kit特異性抗體免疫熒光染色證實(shí)細(xì)胞為ICC，且細(xì)胞傳代培養(yǎng)成功。［結(jié)論］酶解法可以對(duì)SD大鼠胃竇ICC進(jìn)行分離，在不使用胎牛血清（FBS）及重組鼠類干細(xì)胞因子（SCF）培養(yǎng)的條件下，含大鼠同源血清的M199完全培養(yǎng)基可以完成ICC原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)。該項(xiàng)培養(yǎng)方法可行，為研究ICC生物學(xué)特性及其與胃腸病學(xué)的臨床和基礎(chǔ)關(guān)系奠定基礎(chǔ)。

Cajal間質(zhì)細(xì)胞；胃竇；SD大鼠；同源血清；細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

胃腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞（interstitial cells of cajal，ICC）作為胃腸運(yùn)動(dòng)的起搏細(xì)胞，可以產(chǎn)生自主節(jié)律性慢波電位，通過(guò)突起和縫隙連接作用于胃腸平滑肌細(xì)胞，促進(jìn)平滑肌的節(jié)律性舒縮；胃腸神經(jīng)遞質(zhì)通過(guò)ICC介導(dǎo)影響平滑肌，形成“腸神經(jīng)–ICC-平滑肌細(xì)胞”功能結(jié)合體進(jìn)行調(diào)控胃腸道的電生理和胃腸動(dòng)力。因此，ICC的細(xì)胞學(xué)特性與胃腸動(dòng)力障礙性疾病的相關(guān)研究成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)，對(duì)于該細(xì)胞的分離與培養(yǎng)成為胃腸病學(xué)基礎(chǔ)研究的重要前提。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者已對(duì)Wistar大鼠、Balb/c小鼠、成年C57BL/6小鼠及KM小鼠的胃［1-2］、小腸［3-5］、膀胱［6］、陰莖海綿體［7］等部位的ICC成功進(jìn)行了分離、培養(yǎng)，其中培養(yǎng)方法不盡相同，主要以胎牛血清作為基礎(chǔ)血清，并主張利用重組鼠類干細(xì)胞因子（SCF）進(jìn)行誘導(dǎo)、促進(jìn)ICC生長(zhǎng)，但成本較高、操作繁瑣，且對(duì)于分離、培養(yǎng)過(guò)程中需要注意的相關(guān)問(wèn)題尚無(wú)系統(tǒng)的報(bào)道。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，目前對(duì)SD大鼠胃竇ICC進(jìn)行分離和培養(yǎng)尚無(wú)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用酶解法制備單細(xì)胞懸液，不使用胎牛血清及重組鼠類干細(xì)胞因子，采用同源血清進(jìn)行培養(yǎng)ICC，探討這一實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)方法的可行性。

1　材料和方法

1.1材料SPF級(jí)SD大鼠，鼠齡約2個(gè)月，體重150±5 g，雌雄不限，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK桂2009-0002。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，自由進(jìn)食、進(jìn)水，保持環(huán)境通氣、干燥。實(shí)驗(yàn)前禁食8 h，不禁水。

1.2試劑M199培養(yǎng)液（美國(guó)Hyclone公司）；SD大鼠動(dòng)脈血清（自制）；Ⅱ型膠原酶（美國(guó)GIBCO公司）；CD117/c-kit antibody一抗（美國(guó)pierce公司，下簡(jiǎn)稱“一抗”）；DylightTM488 Conjugate Goat anti-Rabbit IgG二抗（杭州聯(lián)科生物技術(shù)有限公司，下簡(jiǎn)稱“二抗”）；抗熒光淬滅封片液（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）；MTT（上海江萊生物科技有限公司）；二甲基亞砜DMSO（上?；鄯f生物科技有限公司）；PBS液、胰酶0.25%+0.02%EDTA、青霉素-鏈霉素溶液（杭州吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司）；Ficoll 400、臺(tái)盼藍(lán)溶液（北京索萊寶科技有限公司）；水合氯醛、25%戊二醛（成都市科龍?jiān)噭┯邢薰荆?/p>

1.3儀器酶標(biāo)儀（Multiskan Ascent，芬蘭產(chǎn)）；激光共聚焦顯微鏡META510（德國(guó)ZEISS公司）；光學(xué)倒置顯微鏡（Olympus公司）；電子天平BS423S（Sartorius AG）；SW-CJ-2FD超凈工作臺(tái)（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）；超低溫冰箱（中國(guó)海爾集團(tuán)）；TYK-4021型超純水機(jī)（烏魯木齊超純水機(jī)廠）；S/ N27709-1462CO2培養(yǎng)箱（美國(guó)Forma公司）；eppendorf/5430R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf AG）；S/N高壓消毒鍋（日本三洋公司）。

1.4方法

1.4.1大鼠同源血清制備取上述SD大鼠5只，行腹主動(dòng)脈采血。10%水合氯醛（0.3 ml/100 g）腹腔麻醉，待麻醉穩(wěn)定后，取大鼠腹部皮膚消毒，打開(kāi)腹腔，充分分離暴露腹主動(dòng)脈，使用無(wú)菌注射器于腹主動(dòng)脈進(jìn)行采血，置無(wú)菌離心管內(nèi)，室溫下靜置至有血清析出；離心（3 000 r/min，15 min，4℃），分離血清，56℃水浴中滅活30 min，用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，無(wú)菌操作進(jìn)行分裝，置-80℃保存?zhèn)溆?。用M199培養(yǎng)液稀釋成10%血清濃度。

1.4.2酶解法分離制備胃竇ICC細(xì)胞懸液取SD大鼠3只/次，以10%水合氯醛進(jìn)行腹腔麻醉，25%戊二醛進(jìn)行術(shù)前消毒，開(kāi)腹取長(zhǎng)約3 cm胃竇，沿胃小彎切開(kāi)，置于無(wú)菌玻璃皿內(nèi)，PBS液（4℃預(yù)冷）沖洗3次，快速更換無(wú)菌玻璃皿置于冰上，皿中倒入預(yù)冷的PBS液，開(kāi)始進(jìn)行銳性剝離胃黏膜及黏膜下層，將每次分離出的肌肉組織及時(shí)置于冰下預(yù)冷的M199完全培養(yǎng)基（10%大鼠同源血清、1%青霉素-鏈霉素溶液）內(nèi)保持活性，取肌條浸于上述培養(yǎng)基內(nèi)，剪切成0.1 cm× 0.1 cm大小的條塊，1 300 r/min離心1.5 min，棄上清液，加入Ⅱ型膠原酶消化液（M199完全培養(yǎng)基配置，濃度8±2 mg/ml），37℃水浴箱消化45～55 min，1 300 r/min離心1.5 min，棄上清液，PBS液重懸洗去消化液，再1 300 r/min離心3 min，重復(fù)3次，最后棄PBS液，加入M199完全培養(yǎng)基，輕輕地緩慢吹打15 min，200目篩網(wǎng)過(guò)篩、形成細(xì)胞懸液，收集于離心管內(nèi)，加入等比例Ficoll 400，1 900 r/min離心15 min，取交界面細(xì)胞，加入M199完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶（約4 ml/瓶），置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

1.4.3ICC培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)動(dòng)態(tài)觀察ICC接種6 h后完全貼壁并進(jìn)行首次換液，之后開(kāi)始進(jìn)行倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，視培養(yǎng)基顏色改變及有無(wú)渾濁情況每隔1～2 d換液1次，每次加入M199培養(yǎng)完全基，培養(yǎng)的第1天、第3天、第6天、第8天于倒置顯微鏡下分別觀察細(xì)胞形態(tài)變化，并拍照。

1.4.4ICC原代培養(yǎng)生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期測(cè)定采用MTT法測(cè)定。制備ICC細(xì)胞懸液后，調(diào)整ICC細(xì)胞濃度為0.05×103/μl，接種至96孔培養(yǎng)板，置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，細(xì)胞完全貼壁后，第1天取5孔細(xì)胞，加入MTT溶液作用4 h，去掉MTT液，加入DMSO，振蕩，酶標(biāo)儀單波長(zhǎng)490 nm處測(cè)OD值，之后分別在細(xì)胞培養(yǎng)的第2～14 d重復(fù)上述操作。以培養(yǎng)細(xì)胞的天數(shù)（d）為橫坐標(biāo)，以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，制作細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。

1.4.5ICC免疫熒光鑒定采用C-kit特異性抗體免疫熒光染色法。分別取培養(yǎng)第3天、第6天、第8天貼壁良好的ICC細(xì)胞，經(jīng)PBS液清洗后，無(wú)水甲醛（20℃預(yù)冷）固定，5%脫脂奶粉封閉10 min，加入一抗（1∶30），設(shè)立陰性對(duì)照組以PBS液代替一抗，4℃冰箱孵育過(guò)夜，PBS液沖洗3遍，加入二抗（1∶200）標(biāo)記，37℃培養(yǎng)箱孵育1 h，抗淬滅封片液封片后置共聚焦顯微鏡下觀察并拍照。

1.4.6ICC原代細(xì)胞傳代培養(yǎng)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（第8天）細(xì)胞，吸棄舊培養(yǎng)基，取適量預(yù)溫PBS液沖洗2次，吸去PBS，加入0.25%胰蛋白酶溶液2 ml，于37℃消化2～3 min，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞明顯收縮、脫落，加入1 ml M199完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕沖洗3min，收集細(xì)胞入離心管，1200r/min離心3 min，棄上清液；臺(tái)盼藍(lán)染色確定細(xì)胞活力在90%左右，加入6 ml M199完全培養(yǎng)基重懸并吹打均勻，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)并調(diào)節(jié)濃度為1.5×105／ml，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，每瓶3 ml。

2　結(jié)果

2.1ICC形態(tài)觀察在倒置顯微鏡下觀察，第1天：細(xì)胞完全貼壁，呈梭形、菱形或三角形，可見(jiàn)細(xì)胞突起；第3天：可見(jiàn)梭形、菱形、三角形，每個(gè)細(xì)胞都有1～2個(gè)核，核大，核周胞漿少，并從核區(qū)向胞體發(fā)出2～5條長(zhǎng)突起，與鄰近ICC突起、胞體相互連接，形成網(wǎng)絡(luò)狀，同時(shí)由于這種連接細(xì)胞之間也呈現(xiàn)出聚集成團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象。第6天、第8天ICC網(wǎng)絡(luò)狀、聚集現(xiàn)象最明顯。傳代培養(yǎng)后的ICC于第1天、第3天、第8天也比較明顯地呈現(xiàn)上述特征。見(jiàn)圖1。

圖1　倒置顯微鏡下的培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)觀察

圖2　ICC生長(zhǎng)曲線

2.2ICC對(duì)數(shù)生長(zhǎng)曲線第1～3天細(xì)胞處于潛伏期，第4～8天細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，其中第6～8天生長(zhǎng)最為明顯，第9天后逐漸進(jìn)入平臺(tái)期。見(jiàn)圖2。

2.3ICC免疫熒光鑒定第3天、第6天和第8天可見(jiàn)ICC形態(tài)特征，細(xì)胞胞體呈三角形、圓形或梭形；細(xì)胞核大，核周有少量胞漿；從胞體發(fā)出2～5條長(zhǎng)突起，并與臨近細(xì)胞形成網(wǎng)絡(luò)；表面C-kit蛋白呈陽(yáng)性表達(dá)，胞體和突起均明顯著色，呈綠色陽(yáng)性顯色。見(jiàn)圖3。

圖3　熒光顯微鏡下免疫染色的ICC形態(tài)

3　討論

胃腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞作為一種與神經(jīng)系統(tǒng)密切相關(guān)的特殊類型的間質(zhì)細(xì)胞，以網(wǎng)絡(luò)狀廣泛分布于胃腸道，是胃腸道活動(dòng)的起搏者和調(diào)節(jié)者［8］，同時(shí)也是胃腸道壁內(nèi)神經(jīng)信息的傳遞者，體現(xiàn)在ICC相互之間、與神經(jīng)纖維和平滑肌細(xì)胞之間通過(guò)緊密的縫隙連接，形成“腸神經(jīng)–ICC-平滑肌細(xì)胞”的胃腸動(dòng)力的基本功能單位［9］，對(duì)胃腸道活動(dòng)有著重要的影響［10］。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，胃腸動(dòng)力障礙性疾病伴有ICC數(shù)量的減少或缺失、網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)破壞，導(dǎo)致該細(xì)胞活性的減弱或消失［11-14］。胃腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞異常變化可能是胃癌出現(xiàn)胃腸動(dòng)力障礙性疾病的重要發(fā)病機(jī)制［15］。因此，探討體外分離、培養(yǎng)ICC的實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)于闡明胃腸動(dòng)力障礙性疾病的發(fā)病機(jī)制而言，是基礎(chǔ)研究的重要前提，同時(shí)也具有臨床實(shí)際意義。

采用酶解法制備ICC單細(xì)胞懸液是目前國(guó)內(nèi)外運(yùn)用較多的實(shí)驗(yàn)方法［16-18］。選擇適當(dāng)?shù)拿笣舛燃跋瘯r(shí)間非常關(guān)鍵，酶濃度過(guò)高或者消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)都會(huì)對(duì)ICC產(chǎn)生損害［19］，反之又將取不出細(xì)胞或者所取得的數(shù)量極少。本實(shí)驗(yàn)?zāi)軌虺晒Ψ蛛x制備SD大鼠胃竇ICC細(xì)胞懸液，主要是依實(shí)際條件和情況進(jìn)行了適當(dāng)改良操作：將Ⅱ型膠原酶濃度由一般使用量1.3 mg/ml增加到8±2 mg/ml，消化時(shí)間持續(xù)50±5 min。如大量肌條明顯消失，消化液轉(zhuǎn)渾濁，可見(jiàn)明顯絮狀組織懸浮物，即可判斷組織消化基本完全。此外，解剖后的胃組織肌條剪切越細(xì)越有利于酶解分離。

離心時(shí)間要充分，收集細(xì)胞數(shù)量才有保障。我們?cè)贗CC原代細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí)，胰酶消化細(xì)胞脫落、收集后，曾摸索不同離心條件收集細(xì)胞的效果：①900 r/min離心2.5 min，離心管底無(wú)細(xì)胞團(tuán)；②改為1 010 r/min離心5.5 min，離心管底有極微小細(xì)胞團(tuán)；③再改為1 300 r/min離心3.5 min，離心管底有明顯細(xì)胞團(tuán)，棄上清，培養(yǎng)基重懸培養(yǎng)，細(xì)胞可以保持90%以上的成活率。這提示離心效果對(duì)于細(xì)胞分離、提取的重要性。因此，離心轉(zhuǎn)速可由常規(guī)800～900 r/min提升至1 300 r/ min，細(xì)胞存活不受影響。此外，在解剖、清洗組織、去除胃黏膜和黏膜下層過(guò)程中，嚴(yán)格無(wú)菌操作，預(yù)防污染，并盡可能使用較小的機(jī)械性拉力，避免過(guò)度牽拉肌組織，保持肌塊組織的完整，吹打組織消化液時(shí)采用輕吹慢打5～10 min，都是有效分離的操作關(guān)鍵。

血清含有類似于生物機(jī)體內(nèi)環(huán)境條件下多種促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)成分和生長(zhǎng)因子，成為細(xì)胞培養(yǎng)的基本成分之一。不同培養(yǎng)基與血清的培養(yǎng)體系對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)影響不同。胎牛血清（FBS）在各類細(xì)胞培養(yǎng)中一直扮演著十分重要的角色，其內(nèi)存在各種細(xì)胞的生長(zhǎng)刺激和（或）抑制因素，在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中可使細(xì)胞得到充足營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)起著保持或改變細(xì)胞生物學(xué)特性的作用。培養(yǎng)基中加入干細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)也是重要的措施，ICC的培養(yǎng)也不例外。有文獻(xiàn)報(bào)道，重組鼠類SCF對(duì)胃腸道ICC分化、生長(zhǎng)、發(fā)育、表型的維持具有至關(guān)重要的作用［20-21］。目前絕大多數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中都涉及基礎(chǔ)培養(yǎng)液、FBS濃度、細(xì)胞因子種類、細(xì)胞接種密度、抗生素預(yù)防污染等，但其中主要局限在使用FBS作為基礎(chǔ)血清并添加相關(guān)的細(xì)胞因子，成本比較高，實(shí)驗(yàn)步驟顯得繁瑣。

自體血清（AS）富含齊全的自體基本營(yíng)養(yǎng)成分、活性物質(zhì)以及對(duì)細(xì)胞生存、生長(zhǎng)具有調(diào)控和（或）促進(jìn)作用的細(xì)胞因子等，在應(yīng)用上具備生物安全性、穩(wěn)定性、多樣性和相容性等特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)。采用自體血清進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)是一種被證實(shí)的可行、有效實(shí)驗(yàn)方法。高群等［22］通過(guò)探討不同細(xì)胞培養(yǎng)基及血清的培養(yǎng)體系對(duì)細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷（CIK）細(xì)胞的增殖和功能的影響發(fā)現(xiàn)，GT-T551培養(yǎng)基加患者自體血清的培養(yǎng)體系更有利于CIK細(xì)胞的增殖、細(xì)胞因子分泌及發(fā)揮殺傷功能，可推薦作為CIK細(xì)胞最佳培養(yǎng)體系。張鵬等［23］利用自體血清培養(yǎng)人外周血來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞，結(jié)果優(yōu)于胎牛血清組，證實(shí)M199培養(yǎng)液中添加自體血清是一種簡(jiǎn)單、高效的培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞方法。戴如飛等［24］發(fā)現(xiàn)自體血清、臍帶血清、AB血清、胎牛血清均可維持骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）的體外培養(yǎng)，而自體血清解決異種和異體血清帶來(lái)的一些潛在的風(fēng)險(xiǎn)，更為安全。劉立強(qiáng)等［25］研究發(fā)現(xiàn)自體血清能完全替代胎牛血清對(duì)口腔黏膜角質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，且培養(yǎng)的口腔黏膜上皮組織分化優(yōu)于胎牛血清。董震等［26］發(fā)現(xiàn)應(yīng)用自體血清可成功培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并在體外條件下定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞。張洪濤等［27］發(fā)現(xiàn)，可利用自體血清培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，進(jìn)一步誘導(dǎo)為神經(jīng)元樣細(xì)胞，有望用于神經(jīng)系統(tǒng)損傷的修復(fù)。張勇剛等［28］研究發(fā)現(xiàn)，使用自體血清培養(yǎng)臍血間充質(zhì)干細(xì)胞較使用胎牛血清有較高的成功率，而且，自體血清培養(yǎng)的臍血間充質(zhì)干細(xì)胞也能成功地進(jìn)行多向誘導(dǎo)分化。

從上述自體血清培養(yǎng)細(xì)胞的研究得到啟示：同源血清雖然不完全等同于自體血清，但是其種屬來(lái)源的性質(zhì)是相同的，在血清來(lái)源與細(xì)胞生長(zhǎng)要素方面比胎牛血清更貼近同屬物種體內(nèi)生長(zhǎng)環(huán)境所需的基礎(chǔ)生理物質(zhì)條件，其培養(yǎng)作用也更加親和、直接、顯效。

不同濃度的血清對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響不同。進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)充分考慮細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)及所添加血清的濃度［29］。研究報(bào)道，Stute N等［30］發(fā)現(xiàn)，對(duì)于培養(yǎng)、促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化而言，10%的自體血清更優(yōu)于其他血清培養(yǎng)。傅欣等［31］發(fā)現(xiàn)同異體體積分?jǐn)?shù)10%的胎牛血清相比，體積分?jǐn)?shù)10%的自體血清培養(yǎng)的兔軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，且在大部分指標(biāo)上可以較好地保持細(xì)胞表型。張穎等［32］發(fā)現(xiàn)羊自體血清培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bMSCs）是可行的，10%濃度自體血清是最佳培養(yǎng)濃度。對(duì)于ICC培養(yǎng)而言，血清濃度過(guò)低或過(guò)高都不利于ICC生長(zhǎng)，且高濃度血清中含有大量促進(jìn)細(xì)胞增殖分化的因子，容易使細(xì)胞過(guò)早出現(xiàn)老化。段小寧等［33］通過(guò)比較自體血清與胎牛血清體外培養(yǎng)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞生物學(xué)行為的差異，發(fā)現(xiàn)10%自體血清培養(yǎng)大鼠軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，且仍可以較好保持細(xì)胞表型，并推測(cè)在可能條件下使用濃度較高的自體血清可以縮短體外培養(yǎng)時(shí)間而達(dá)到較多細(xì)胞保持表型的目的。

因此，該實(shí)驗(yàn)采用10%同源血清對(duì)SD大鼠胃竇ICC進(jìn)行培養(yǎng)并經(jīng)細(xì)胞鑒定獲得成功，提示該實(shí)驗(yàn)方法具有可行性，其操作簡(jiǎn)便，相比使用FBS及重組鼠類SCF進(jìn)行培養(yǎng)，既降低了費(fèi)用，也減少了添加細(xì)胞因子的種類，明顯提高了細(xì)胞培養(yǎng)的效率，體現(xiàn)其特有的實(shí)用性，為研究ICC生物學(xué)特性及其與胃腸病學(xué)的臨床和基礎(chǔ)關(guān)系提供了細(xì)胞模型。至于同源血清培養(yǎng)ICC的具體機(jī)制及其培養(yǎng)效能的深度優(yōu)化與對(duì)比則有待進(jìn)一步的研究。

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（編輯陳明偉）

R329.2

A

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2016-02-06

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