周維，胡昌江，馮健

(四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川 彭州 611930)

膽舒滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

周維，胡昌江*，馮健

(四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川 彭州 611930)

目的：建立膽舒滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對膽舒滴丸中的薄荷腦進(jìn)行定性研究；采用氣相色譜法對膽舒滴丸進(jìn)行特征圖譜研究及含量測定。結(jié)果：薄層色譜鑒別特征明顯，專屬性強(qiáng)；膽舒滴丸不同批次的氣相色譜圖均有8個特征峰，均具有較好的分離度；薄荷腦在0.104～0.780 μg呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=1 827.0X-2×10-13，相關(guān)系數(shù)為r=1.000 0。結(jié)論：所建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)能有效地對膽舒滴丸進(jìn)行鑒別，并準(zhǔn)確地進(jìn)行含量測定。

膽舒滴丸；薄荷腦；特征圖譜；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；含量測定

膽舒滴丸是以薄荷素油為原料制成的中藥制劑，用于慢性結(jié)石性膽囊炎、慢性膽囊炎及膽結(jié)石肝膽郁結(jié)、濕熱胃滯證[1]。薄荷素油主要成分為L-薄荷腦、(-)-薄荷酮、胡薄荷酮、桉油精、異薄荷酮等[2]。為了有效地控制膽舒滴丸的質(zhì)量，本文建立薄層色譜法對其進(jìn)行定性鑒別，氣相色譜法考察其特征圖譜及含量。通過方法學(xué)考察得出，所建方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、方法穩(wěn)定，可用于膽舒滴丸的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

薄層自動成像儀(TLC Visualizer，CAMAG)；半自動點(diǎn)樣儀(linamat5，CAMAG)；萬分之一天平(BS110S，賽多利斯)；超聲清洗器(KQ-250B型，昆山超聲電子有限公司)；氣相色譜儀(78090B，安捷倫)；色譜柱(安捷倫)；

1.2 試藥

桉油精、薄荷腦、胡薄荷酮、(-)-薄荷酮(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110788-201105，110728-200506，111706-201205，111705-201105)；膽舒滴丸(四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，批號分別為1312001，312002，1312003，140501，140502，140503，150401，150402，150403)；其他試劑、試藥均為分析純

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

取本品10丸，研細(xì)，加乙酸乙酯10 mL，超聲處理5 min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取薄荷腦對照品，加乙酸乙酯制成質(zhì)量濃度為4 mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚60～90 ℃-乙酸乙酯(7∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以5%香草醛乙醇溶液-硫酸(100∶5)的混合溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)[3-4]。結(jié)果見圖1。

注：1.薄荷腦；2.1312001；3.1312002；4.1312003；5.140501；6.140502；7.140503；8.150401；9.150402；10.150403。圖1 膽舒滴丸薄層鑒別圖

2.2 特征圖譜

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以聚乙二醇20 M為固定相的毛細(xì)管柱(柱長為30 m，內(nèi)徑為0.53 mm，膜厚度為1 μm)；柱溫為程序升溫：初始溫度為115 ℃，保持5 min，以4 ℃·min-1的速率升溫至200 ℃，保持3 min；進(jìn)樣口溫度為230 ℃；檢測器溫度為230 ℃；分流進(jìn)樣，分流比為10∶1。理論板數(shù)按薄荷腦峰計(jì)算應(yīng)不低于50 000。見圖2。

注：1.桉油精；2.(-)-薄荷酮；7.薄荷腦；8.胡薄荷酮。下同。圖2 膽舒滴丸對照圖譜

2.2.2 參照物溶液的制備 取桉油精對照品、(-)-薄荷酮對照品、薄荷腦、胡薄荷酮對照品[5]，精密稱定，分別加無水乙醇制成質(zhì)量濃度為2 mg·mL-1的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品5丸，精密稱定，置50 mL量瓶中，加水4 mL，超聲處理使溶散，加入無水乙醇30 mL，超聲處理(功率200 W，頻率40 kHz)5 min，放冷，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 特征圖譜方法學(xué)考察 穩(wěn)定性：取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、24 h測定，對其中的特征峰進(jìn)行分析，各色譜峰相對保留時(shí)間的RSD均小于0.3%，結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

精密度：取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次1 μL，各色譜峰相對保留時(shí)間的RSD均小于2.0%，符合特征圖譜研究的技術(shù)要求，表明該方法進(jìn)樣精密度良好。

重復(fù)性：取同一批膽舒滴丸樣品6份，分別按照2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，結(jié)果各色譜峰的相對保留時(shí)間的RSD均小于2.0%，表明該方法重復(fù)性好。

2.2.5 膽舒滴丸對照特征圖譜的建立和分析 按照2.2.3項(xiàng)下分別制備9批膽舒滴丸供試品溶液進(jìn)行檢測，采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)(2012版)進(jìn)行分析，根據(jù)相對保留時(shí)間穩(wěn)定、各批次樣品均能檢出，且峰相對較高的原則，以7號峰為參照確定8個重復(fù)性較好的峰作為特征峰，并進(jìn)行多點(diǎn)校正，自動匹配后生成對照特征圖譜。9批膽舒滴丸特征圖譜見圖3，所得對照特征圖譜見圖4，各共有峰的相對保留時(shí)間見表1。各特征峰與S峰的相對保留時(shí)間分別為：0.37(峰1)、0.73(峰2)、0.78(峰3)、0.87(峰4)、0.90(峰5)、0.92(峰6)、1.00(峰S)、1.05(峰8)。

圖3 9批膽舒滴丸特征圖譜

圖4 膽舒滴丸對照特征圖譜

表1 9批膽舒滴丸特征圖譜共有峰的相對保留時(shí)間

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 同2.2.1色譜條件。

2.3.2 對照品溶液的制備 取薄荷腦對照品，精密稱定，加無水乙醇制成每質(zhì)量濃度為0.2 mg·mL-1的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 同2.2.3供試品溶液的制備方法。

2.3.4 空白供試品溶液的制備 原方法去除薄荷素油，依法制成陰性制劑。取5丸，按照2.2.3項(xiàng)下方法制備空白供試品溶液，依法測定。結(jié)果在色譜圖薄荷腦色譜峰位置無吸收峰，空白制劑色譜圖對待測峰的測定無干擾。

2.3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取薄荷腦對照品溶液(0.52 mg·mL-1)0.2、0.5、0.8、1、1.5 μL，注入氣相色譜儀，測定峰面積，以進(jìn)樣量(X，μg)為橫坐標(biāo)，以峰面積值(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程：Y=1 827.0X-2×10-13，相關(guān)系數(shù)r=1.000 0，表明薄荷腦在0.1～0.75 μg進(jìn)樣量與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取薄荷腦對照品溶液(0.52 mg·mL-1)1 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，薄荷腦峰面積的RSD為1.0%，表明本方法進(jìn)樣精密度良好。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次膽舒滴丸5丸，共6份，置具塞錐形瓶中，按照2.3.3項(xiàng)下方法處理成6份供試品溶液，進(jìn)行測定，薄荷腦峰面積的RSD為1.5%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、24 h測定，對其中的特征峰進(jìn)行分析，薄荷腦峰面積的RSD為0.6%，結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.9 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量的樣品(批號：1312001，薄荷腦的含量為1.95 mg/丸，)3丸，共6份，精密稱定，分別精密加入薄荷腦對照品溶液(0.52 mg·mL-1)10 mL，依法測定。計(jì)算回收率為100.6%，RSD為2.2%，表明此方法準(zhǔn)確性良好。

2.3.10 樣品的含量測定 依法對9批膽舒滴丸進(jìn)行薄荷腦的含量測定，結(jié)果見表2。

表2 各批次膽舒滴丸中薄荷腦的含量(n=2)

3 討論

膽舒滴丸是以薄荷素油為主要原料制成的滴丸劑。薄荷素油主要成分為L-薄荷腦、(-)-薄荷酮、胡薄荷酮、桉油精、異薄荷酮等，其中以薄荷腦含量最高，故以薄荷腦為薄層色譜鑒別和含量測定的指標(biāo)成分，以桉油精、(-)-薄荷酮、薄荷腦、胡薄荷酮為參照物，采用薄層色譜法和氣相色譜法對膽舒滴丸進(jìn)行鑒別、含量測定及特征圖譜研究。

特征圖譜可從整體上實(shí)現(xiàn)質(zhì)量控制，有利于中藥質(zhì)量穩(wěn)定和有效。2015年版《中華人民共和國藥典》一部收載的薄荷素油指紋圖譜項(xiàng)下，對薄荷素油進(jìn)行了指紋圖譜檢測。為了提高膽舒滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，特進(jìn)行膽舒滴丸的特征圖譜研究，確定了8個特征峰，其中4個峰得到指認(rèn)。

根據(jù)9批膽舒滴丸含量測定數(shù)據(jù)，以9批薄荷腦含量的80%為限量標(biāo)準(zhǔn)，暫定本品每丸含薄荷素油以薄荷腦(C10H20O)計(jì)，不得少于1.6 mg。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 劉紅杰，金若敏.薄荷油研究進(jìn)展[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，30(6)：502.

[3] 朱亮，包貝華，周靈君.膽舒滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].江蘇中醫(yī)藥，2007，39(8)：68-69.

[4] 劉軍，袁杰，呂雄文.枇杷止咳顆粒中枇杷葉、薄荷腦和罌粟殼薄層鑒別的研究[J].安徽醫(yī)藥，2011，15(12)1498-1500.

[5] 桂新，周榮漢.國產(chǎn)野生薄荷揮發(fā)油化學(xué)組分變異及其化學(xué)型[J].植物資源與環(huán)境，1998，7(3)：13-18.

StudyonQualityStandardsofDanshuDrippingPills

ZHOU Wei，HUChangjiang*，F(xiàn)ENGJian

(SichuanNeo-greenPharmaceuticalTechnologyDevelopmentCo.Ltd，Sichuan，Pengzhou611930，China)

Objective：To establish the quality standard for establishing the quality of Danshu dripping pills.Methods：Characteristic identification of Danshu dripping pill was performed by TLC，and content determination and the characteristics chromatograms was performed by gas chromatography.Results：The identification of TLC was obvious and specific.There were 8 characteristic chromatographic peaks with good separation in different batches of Danshu dripping.Menthol showed a good linear relationship in 0.104～0.78 μg.The regression equation wasY=1827.0X-2*10-13.The correlation coefficient was r=1.0.Conclusion：The established quality standard can be effective for the identification and accurate determination of the content of Danshu dripping pills.

Danshu dripping pills；menthol；fingerprint chromatogram；quality standards；determination of content

2015-07-02)

*

胡昌江，教授，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：中藥炮制原理及飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究；E-mail：wind_61@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.5.022