陳平，龔建瑜，左曉霜，華杰，馬定乾，范源

(1.云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500；2.云南中醫(yī)學(xué)院 臨床醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500)

·基礎(chǔ)研究·

余甘子褐變過(guò)程中沒(méi)食子酸等四種成分含量變化及分析

陳平1，龔建瑜1，左曉霜1，華杰1，馬定乾1，范源2*

(1.云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500；2.云南中醫(yī)學(xué)院 臨床醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500)

目的：測(cè)定并分析在相對(duì)恒溫密閉貯藏條件下新鮮余甘子褐變過(guò)程中沒(méi)食子酸、單寧酸、五沒(méi)食子?；咸烟?β-PGG)、β-胡蘿卜素的含量變化。方法：將余甘子果實(shí)20 ℃條件下用棕色廣口瓶密封避光儲(chǔ)藏，每3天用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測(cè)定沒(méi)食子酸、單寧酸、β-PGG、β-胡蘿卜素的含量及pH值和可滴定酸的變化。結(jié)果：余甘子中的沒(méi)食子酸在自采摘后第19天左右含量最高，余甘子中的單寧酸、β-PGG、β-胡蘿卜素在剛采摘第1天含量最高，pH值在第22天最高，而可滴定酸在第4天最高。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)提示褐變過(guò)程中可滴定酸比pH值相對(duì)靈敏且與沒(méi)食子酸、單寧酸、β-PGG、胡蘿卜素呈相關(guān)性趨勢(shì)，提示沒(méi)食子酸和可滴定酸可作為褐變過(guò)程中質(zhì)控指標(biāo)之一，可以為余甘子果實(shí)儲(chǔ)藏、預(yù)防褐變提供一定的參考。

余甘子；沒(méi)食子酸；單寧酸；β-PGG；β-胡蘿卜素；RP-HPLC

余甘子Phyllanthusemblica是大戟科(Euphorbiaceae)葉下珠屬(phyllanthus)落葉喬木或灌木藥用植物，生長(zhǎng)在中國(guó)亞熱帶、熱帶部分地區(qū)，特別是干熱河谷地區(qū)。余甘子作為藥食兩用的植物，各個(gè)部分功用廣泛，涉及42種藥用功效。余甘子常被應(yīng)用于傳統(tǒng)醫(yī)藥系統(tǒng)，如中國(guó)醫(yī)藥和阿育吠陀醫(yī)學(xué)。我國(guó)中醫(yī)藥體系認(rèn)為，余甘子味甘、酸、澀、涼，歸肺、胃二經(jīng)，具有清熱涼血、消食健胃、生津止咳的功效，主要用于血瘀、消化不良、腹脹、咳嗽、喉痛口干等證。此外，余甘子具有補(bǔ)益、保肝、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、抗衰老、抗高血壓、降血脂等保健作用[1-2]。

余甘子以鞣質(zhì)類(lèi)、黃酮類(lèi)、多糖和維生素C含量較多，果實(shí)含有酚類(lèi)化合物，主要為訶尼酸(chebulinic acid)、鞣花酸(ellagic acid)、3-乙基沒(méi)食子酸(3-ethoxy-gallic acid)、訶子酸(chebulagic acid)、沒(méi)食子酸(gallic acid)等。揮發(fā)油類(lèi)物質(zhì)主要有β-波旁烯(β-bourbonene)、二十四醇(tetracosano1)、二十四烷(tetracosane)、丁香油酚(eugeno1)、β-丁香烯(β-Caryophyllene)、綠原酸(Chlorogenic acid)。此外，余甘子果實(shí)中含有槲皮素(quercetin)，蘆丁(rutin)，蛋白質(zhì)，維生素B、B2、C及微量元素K、Zn、Mn等[3]。余甘子中主要化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

圖1 余甘子中主要化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)

沒(méi)食子酸(Gallic acid)亦稱(chēng)五倍子酸或棓酸，是一種有機(jī)酸，可見(jiàn)于五倍子、漆樹(shù)、茶等植物中。余甘子果實(shí)中除含有維生素、氨基酸外，還富含鞣質(zhì)類(lèi)成分，其中包括沒(méi)食子酸，相關(guān)研究表明余甘子中沒(méi)食子酸可促進(jìn)胰島素分泌，有一定的治療糖尿病的作用[4]。此外，Mahdi Vazirian等[5]通過(guò)測(cè)定阿育吠陀和伊朗常用藥方三果湯中的3味藥物中沒(méi)食子酸含量發(fā)現(xiàn)余甘子中所含沒(méi)食子酸最高。單寧酸(Tannic acid)又稱(chēng)鞣質(zhì)，單寧，鞣酸。單寧酸在藥理方面有較高活性，可抗腫瘤、抗突變、抗脂質(zhì)過(guò)氧化等，且其在治療糖尿病及其并發(fā)癥方面具有較高的活性。研究表明，余甘子果中單寧酸有利于增加風(fēng)味品質(zhì)與維生素C的保存[6-9]。五沒(méi)食子酰基葡萄糖(β-PGG)，屬于多酚類(lèi)化合物，是水解單寧的組成部分，王維聰?shù)萚10]對(duì)44種中藥中β-PGG含量進(jìn)行測(cè)定，其中五倍子中β-PGG的含量最高。β-PGG具有抗氧化、抗癌、抗腫瘤、抗血管再生等活性，并且能抑制人胰島淀粉樣多肽(IAPP)的沉積，保護(hù)胰島β細(xì)胞的作用[11-14]。余甘子中β-PGG相關(guān)報(bào)道較少。

由于余甘子貯藏過(guò)程中易發(fā)生褐變，使貯藏時(shí)間縮短，可對(duì)余甘子鮮果品質(zhì)造成影響。脫落酸(ABA)是以異戊二烯為基本單位的一種15碳的類(lèi)倍半萜類(lèi)、具有抑制生長(zhǎng)作用的植物激素，在植物成熟、衰老組織或進(jìn)入休眠的器官中含量豐富。ABA通過(guò)類(lèi)胡蘿卜素途徑合成，胡蘿卜素前體形成胡蘿卜素可作為ABA形成的中間反應(yīng)前體[15]。而β-胡蘿卜素作為類(lèi)胡蘿卜素之一，是自然界中普遍存在最穩(wěn)定的天然色素之一，故本實(shí)驗(yàn)將β-胡蘿卜素作為測(cè)定觀察指標(biāo)之一。

可滴定酸，又稱(chēng)總酸，指植物中所有酸性成分的總量，包括已離解成H+的酸的濃度與未離解的酸的濃度，因其大小可借助標(biāo)準(zhǔn)堿液滴定來(lái)求得。一般以測(cè)定果實(shí)中可滴定酸作為果實(shí)品質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)之一，采摘后可滴定酸增加可能與果實(shí)中淀粉迅速降解形成大量的糖類(lèi)進(jìn)入三羧酸循環(huán)后進(jìn)一步形成各種有機(jī)酸有關(guān)，隨時(shí)間延長(zhǎng)可滴定酸下降與其作為呼吸作用或轉(zhuǎn)換成其他物質(zhì)被消耗有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)根據(jù)余甘子的化學(xué)性質(zhì)及沒(méi)食子酸、單寧酸、β-PGG、β-胡蘿卜素的化學(xué)特性，考察余甘子在相對(duì)密封、相對(duì)恒溫條件下的褐變過(guò)程中沒(méi)食子酸、單寧酸、β-PGG、β-胡蘿卜素含量及可滴定酸、pH值的變化。

1 材料

1.1 材料與試劑

云南楚雄采摘的新鮮余甘子果實(shí)。乙腈(色譜純)，甲醇(色譜純)，丙酮(分析純)，正己烷(分析純)，磷酸(分析純)均購(gòu)自云南丹赤貿(mào)易有限公司，純凈水。β-PGG對(duì)照品(成都普瑞法科技開(kāi)發(fā)有限公司，批號(hào)：14021908，純度：98%)、沒(méi)食子酸(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110831-201204)、單寧酸對(duì)照品(成都邁斯克醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào)：130721)、β-胡蘿卜素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100445)。

1.2 儀器

D2KW-D電熱恒溫水浴鍋，Agilent1200型高效液相色譜儀(VWD檢測(cè)器)，萬(wàn)分之一分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，酸度計(jì)[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]。

2 方法

2.1 儲(chǔ)藏方法

將適量余甘子果實(shí)用棕色廣口瓶封口膠密封放入20 ℃恒溫箱中避光儲(chǔ)藏。

2.2 沒(méi)食子酸、單寧酸、β-PGG、β-胡蘿卜素對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)定沒(méi)食子酸對(duì)照品0.40 mg，用50%甲醇制成40 μg·mL-1的溶液，備用。精密稱(chēng)取0.60 mg單寧酸對(duì)照品，用乙醇、水、丙酮(70∶29∶1)溶液溶解并定容，制備成質(zhì)量濃度為60 μg·mL-1的單寧酸對(duì)照品溶液，備用。精密稱(chēng)定β-PGG對(duì)照品1.00 mg，用甲醇制成100 μg·mL-1的溶液，備用。精密稱(chēng)定β-胡蘿卜素4.00 mg，用正己烷制成400 μg·mL-1的溶液，備用。

2.3 沒(méi)食子酸、單寧酸、β-PGG、β-胡蘿卜素供試品溶液的制備

2.3.1 沒(méi)食子酸、單寧酸、β-PGG供試品溶液制備 取50 g余甘子果肉(去核)，精密稱(chēng)定，加入適量石英砂研磨，盡量搗碎，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱(chēng)定重量，加熱至70 ℃回流1.5 h。放冷，再稱(chēng)定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，用0.45 μm濾膜過(guò)濾。即得。

2.3.2 胡蘿卜素供試品溶液的制備 取2.5 g余甘子果肉(去核)，置具塞錐形瓶中，錐形瓶用錫箔紙包裹已避光，加入50 mL正己烷-丙酮-乙醇(6∶3∶1)，放于避光處?kù)o置4 h后，搖晃錐形瓶靜置2 min，取上層清液，用0.45 μm濾膜過(guò)濾。即得。

2.4 沒(méi)食子酸含量測(cè)定方法

2.4.1 色譜條件 色譜柱為Agilent C18ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇-0.2%磷酸溶液(5∶95)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)：273 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL[16]。

2.4.2 沒(méi)食子酸線性關(guān)系考察 精密稱(chēng)取對(duì)照品0.50 mg，用50 %的甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶中，搖勻作為儲(chǔ)備液。按上述沒(méi)食子酸色譜條件分別取2、4、6、10、12 μL進(jìn)樣，以沒(méi)食子酸的峰面積(Y)對(duì)對(duì)照品的質(zhì)量(X)進(jìn)行線性回歸，得方程Y=1 892.4X-68.546，r=0.996 5。結(jié)果表明：沒(méi)食子酸峰面積值與質(zhì)量有良好的線性關(guān)系，線性范圍為0.1～0.6 μg。

2.5 單寧酸含量測(cè)定方法

2.5.1 色譜條件 色譜柱為Agilent C18ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇-水(80∶20)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm；流速：0.5 mL·min-1；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：2.0 μL[17]。

2.5.2 單寧酸線性關(guān)系考察 精密稱(chēng)取對(duì)照品0.80 mg，用乙醇-水-丙酮(70∶29∶1)溶液溶解并定容至10 mL容量瓶中，搖勻作為儲(chǔ)備液。按上述單寧酸色譜條件分別取2、4、6、8、10 μL進(jìn)樣，以單寧酸的峰面積(Y)對(duì)對(duì)照品的質(zhì)量(X)進(jìn)行線性回歸，得方程Y=7 330.5X-230.66，r=0.999 3。結(jié)果表明單寧酸峰面積值與質(zhì)量有良好的線性關(guān)系，線性范圍為0.16～0.80 μg。

2.6 β-PGG 含量測(cè)定方法

2.6.1 色譜條件 色譜柱為Agilent C18ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：0 min：乙腈-0.1%磷酸(10∶90)，15 min：乙腈-0.1%磷酸(25∶75)，15.1 min：乙腈-0.1%磷酸(25∶75)，20 min：乙腈-0.1%磷酸(25∶75)；檢測(cè)波長(zhǎng)為281 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.6.2β-PGG線性關(guān)系考察 精密稱(chēng)取對(duì)照品1.0 mg，用50 %的甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶中，搖勻作為儲(chǔ)備液。按上述沒(méi)食子酸色譜條件分別取13、15、17、19、21 μL進(jìn)樣，以β-PGG的峰面積(Y)對(duì)對(duì)照品的質(zhì)量(X)進(jìn)行線性回歸，得方程Y=2 195.4X-48.33，r=1.0。結(jié)果表明β-PGG峰面積值與質(zhì)量有良好的線性關(guān)系，線性范圍為1.3～1.9 μg。

2.7 β-胡蘿卜素含量測(cè)定方法

2.7.1 色譜條件 色譜柱為Agilent C18ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-乙腈(85∶15)；檢測(cè)波長(zhǎng)為450 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.7.2β-胡蘿卜素線性關(guān)系考察 精密稱(chēng)取對(duì)照品4.0 mg，用正己烷溶解并定容至10 mL容量瓶中，搖勻作為儲(chǔ)備液。按上述沒(méi)食子酸色譜條件分別取13、15、17、19、21 μL進(jìn)樣，以β-胡蘿卜素的峰面積(Y)對(duì)對(duì)照品的質(zhì)量(X)進(jìn)行線性回歸，得方程Y=21.309X-99.941，r=0.999 8。結(jié)果表明β-胡蘿卜素峰面積值與質(zhì)量有良好的線性關(guān)系，線性范圍為5.2～8.4 μg。

2.8 pH值與可滴定酸的測(cè)定

取10 g去核余甘子，精密稱(chēng)定，加適量石英砂研勻，加20 mL蒸餾水導(dǎo)入三角瓶。80 ℃水浴30 min，冷卻過(guò)濾，作為儲(chǔ)備液。

用酸度計(jì)測(cè)定pH值，可滴定酸測(cè)定：取貯備液10 mL采用0.1 ml·L-1的NaOH滴定至pH=8.1，以蘋(píng)果酸計(jì)(K=0.067)代入公式(1)。

TTA(%)=(A×0.1×0.067×20)/(10×D)×100

(1)

式中：

TTA—可滴定酸；

D—取儲(chǔ)備液的體積；

A—NaOH消耗的體積。

3 結(jié)果與分析

3.1 精密度試驗(yàn)

精密吸取沒(méi)食子酸、單寧酸、β-PGG、β-胡蘿卜素對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣4次.以峰面積計(jì)算RSD值，沒(méi)食子酸、單寧酸、β-PGG、β-胡蘿卜素RSD值分別為0.27%、0.79%、0.03%、1.61%。精密度試驗(yàn)結(jié)果表明，儀器精密度良好。色譜圖見(jiàn)圖2～5。

注：A.沒(méi)食子酸對(duì)照品；B.沒(méi)食子酸樣品。圖2 沒(méi)食子酸色譜圖

注：A.單寧酸對(duì)照品；B.單寧酸樣品。圖3 單寧酸色譜圖

注：A.PGG對(duì)照品；B.PGG樣品。圖4 β-PGG色譜圖

注：A.胡蘿卜素對(duì)照品；B.胡蘿卜素樣品。圖5 β-胡蘿卜素色譜圖

3.2 結(jié)果分析

在恒溫相對(duì)密封儲(chǔ)存條件下，余甘子自采摘后22 d中沒(méi)食子酸、單寧酸、β-PGG含量與β-胡蘿卜素含量變化見(jiàn)表1。余甘子中的沒(méi)食子酸在自采摘后第19天左右含量最高，剛采摘第1天含量最低，隨著儲(chǔ)存天數(shù)的增加，沒(méi)食子酸的含量總體呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)(見(jiàn)圖6)；余甘子中的單寧酸在剛采摘第1天含量最高，余甘子中的PGG在自采摘后第1天左右含量最高，到第4天左右隨著儲(chǔ)存天數(shù)的增加，單寧酸減少時(shí)PGG含量呈增加趨勢(shì)，單寧酸含量增加時(shí)PGG含量呈減少趨勢(shì)(見(jiàn)圖7、8)；胡蘿卜素含量在第1天含量最高，到第4天含量呈急劇下降趨勢(shì)，第4天后下降趨勢(shì)逐漸平穩(wěn)，19 d后無(wú)法測(cè)得胡蘿卜素含量(見(jiàn)圖9)。

沒(méi)食子酸含量增多，可能因?yàn)椴烧蟀l(fā)生呼吸躍變等原因?qū)е掠喔首訂螌幩帷ⅵ?PGG等化合物發(fā)生分解反應(yīng)，使沒(méi)食子酸從這些化合物中解離、脫落，并發(fā)生褐變[18]。余甘子果實(shí)中的單寧酸是一種易水解的多酚化合物，其能水解產(chǎn)生沒(méi)食子酸、β-PGG等中間產(chǎn)物，由此推測(cè)單寧酸和PGG水解產(chǎn)生沒(méi)食子酸，使沒(méi)食子酸含量增大，同時(shí)單寧酸也水解為PGG使PGG含量增加，此外，這些中間產(chǎn)物之間存在相互轉(zhuǎn)化的可能，果實(shí)中的其他生物活性成分也可能對(duì)余甘子中單寧酸、沒(méi)食子酸、β-PGG的含量變化產(chǎn)生相應(yīng)影響。β-胡蘿卜素在第1天到第4天含量變化明顯，隨時(shí)間增加出現(xiàn)平穩(wěn)趨勢(shì)，且19 d后無(wú)法測(cè)出β-胡蘿卜素，推測(cè)其在果實(shí)成熟時(shí)作為前體物質(zhì)產(chǎn)生脫落酸(ABA)或生成其他物質(zhì)，故在余甘子采摘后測(cè)定胡蘿卜素對(duì)研究余甘子褐變意義不大。

隨儲(chǔ)藏時(shí)間的增加，pH值的變化相對(duì)恒定，到22 d余甘子褐變后期時(shí)pH值最大，而在儲(chǔ)藏第4天時(shí)，可滴定酸值達(dá)到最大(見(jiàn)表2)。隨儲(chǔ)藏時(shí)間增加，pH值變化與余甘子中沒(méi)食子酸、β-PGG、單寧酸、β-胡蘿卜素含量變化無(wú)明顯相關(guān)性，而可滴定酸在第4天單寧酸急劇下降時(shí)達(dá)到最大，對(duì)β-PGG、單寧酸、β-胡蘿卜素含量有一定關(guān)聯(lián)性(見(jiàn)圖10、11)。因此，認(rèn)為可滴定酸、單寧酸、β-PGG在探究余甘子褐變過(guò)程時(shí)可作為早期褐變的敏感指標(biāo)之一，沒(méi)食子酸可作為褐變中期指標(biāo)之一，研究為余甘子果實(shí)品質(zhì)保證提供一定參考。

表1 沒(méi)食子酸、單寧酸、β-PGG含量及β-胡蘿卜素含量(n=3)

圖6 余甘子中沒(méi)食子酸含量變化

圖7 余甘子中單寧酸含量變化

圖8 余甘子中β-PGG含量變化

圖9 余甘子中β-胡蘿卜素含量變化

表2 pH值、可滴定酸值(n=3)

圖10 余甘子褐變過(guò)程中pH值的變化

圖11 余甘子褐變過(guò)程中可滴定酸的變化

4 結(jié)論

余甘子果實(shí)中含有豐富的多酚化合物，通過(guò)測(cè)定不同儲(chǔ)存天數(shù)下余甘子中沒(méi)食子酸、單寧酸、PGG、胡蘿卜素的含量，得出了保證余甘子鮮果中這些活性成分的較適儲(chǔ)存時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)提示單寧酸、β-PGG可作為余甘子褐變過(guò)程中的早期質(zhì)控指標(biāo)，沒(méi)食子酸可作為褐變中期指標(biāo)之一。此外，實(shí)驗(yàn)認(rèn)為可滴定酸測(cè)定可作為余甘子褐變產(chǎn)生的早期敏感指標(biāo)之一，特別是可滴定酸測(cè)定作為余甘子褐變的標(biāo)準(zhǔn)比pH值測(cè)定更加準(zhǔn)確，研究為余甘子果實(shí)開(kāi)發(fā)利用及褐變防控提供一定的參考。

[1] 張?zhí)m珍，趙文華，郭亞健.藏藥余甘子化學(xué)成分研究[J].中國(guó)中藥雜志，2003，28(10)：940-943.

[2] 侯開(kāi)衛(wèi).余甘子化學(xué)成分及在民族民間傳統(tǒng)醫(yī)藥中的應(yīng)用[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志，2000(6)：345-348.

[3] 王輝.余甘子的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2011，13(11)：52-56.

[4] Jason Jerome D’souza，Prema Pancy D’souza，F(xiàn)arhan Fazal，et al.Anti-diabetic effects of the Indian indigenous fruit Emblica officinalis Gaertn：active constituents and modes of action[J].The Royal Society of Chemistry，F(xiàn)ood&Function，2014，5：635-644.

[5] Mahdi Vazirian，Mahnaz Khanavi，Yaghoub Amanzadeh，et al.Quantification of gallic acid in fruits of three medicinal plants[J].Iranian Journal of Pharmaceutical Research，2011，10 (2)：233-236.

[6] Chen K S，Hsiao Y C，Kuo D Y，et al.Tannic acid-induced apoptosis and enhanced sensitivity to arsenic trioxide in human leukemia HL-60cells[J].Leuk Res，2009，33(2)：297-307.

[7] Buyukleyla M，Azirak S，Rencuzogullari E，et al，The genotoxic and antigenotoxic effects of tannic acid in human lymphocytes[J].Drug Chem Toxicol，2012，35(1)：11-9.

[8] Fan H，Wu D，Tian W，et al.Inhibitory effects of tannic acid on fatty acid synthase and 3T3-L1preadipocyte[J].Biochim Biophys Acta，2013，1831(7)：1260-1266.

[9] 姚小華，盛能榮.余甘子營(yíng)養(yǎng)(化學(xué))成分研究[J].林業(yè)科學(xué)研究，1992，5(2)：170-176.

[10] 王維聰，王潮，宋學(xué)英，等.44種中藥中1，2，3，4，6-五-D-倍酰-D-葡萄糖含量的測(cè)定[J].中國(guó)中藥雜志，2008，33(6)：656-659.

[11] Huan Yang，Qinying Gu，Tingting Gao，et al.Flavonols and derivatives of gallic acid from young leaves of Toona sinensis (A.Juss.) Roemer and evaluation of their anti-oxidant capacity by chemical methods[J].Pharmacogn Mag，2014，10(38)：185-190.

[12] Yu W S，Jeong S J，Kim J H，et al.The genome-wide expression profile of 1，2，3，4，6-penta-O-galloyl-b-D-glucose-treated MDA-MB-231 breast cancer cells：molecular target on cancer metabolism[J].Molecules and Cells，2011，32：123-132.

[13] Wenhua Zhao，Yuji Wang，Weijia Hao，et al.In vitro inhibition of fatty acid synthase by 1，2，3，4，6-penta-O-galloyl-β-D-glucose plays a vital role in anti-tumour activity[J].Biochemical and Biophysical Research Communications，2014，445：346-351.

[14] Huh J E，Lee E O，Kim M S，et al.Penta-O-galloyl-b-D-glucose suppresses tumor growth via inhibition of angiogenesis and stimulation of apoptosis：roles of cyclooxygenase-2 and mitogen-activated protein kinase pathways[J].Carcinogenesis，2005，26：1436-1445.

[15] 郭文雅，趙京獻(xiàn)，郭偉珍.脫落酸(ABA)生物學(xué)作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2014，30(21)：205-210.

[16] 鄒麗，高向軍，包小紅.HPLC法測(cè)定余甘子中沒(méi)食子酸的含量[J].食品與藥品，2009，11(7)：49-51.

[17] 郭佳莉，李國(guó)清，蔡英卿，等.高效液相色譜法測(cè)定余甘子中單寧酸的含量[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2007，24(5)：911-913.

[18] 范源，趙江盛，徐志平，等.余甘子中沒(méi)食子酸等活性成分在自然儲(chǔ)藏時(shí)的變化及分析[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2014，35(2)：57-59.

ChangesandAnalysisofGallicacidTannicacidβ-PGGβ-caroteneofPhyllanthusemblicainBrowning

CHENPing1，GONGJianyu1，ZUOXiaoshuang1，HUAJie1，MADingqian1，F(xiàn)ANYuan2*

(1.YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine，Kunming650500，China；2.TheFirstAffiliatedHospitalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine，Kunming650500，China)

Objective：To determine the change of gallic acid，tannic acid，β-PGG，beta-carotene in freshPhyllanthusemblicain browning process in storage.Methods：FreshPh.emblicafruit was stored without light and with brown wide-mouth bottle at 20 ℃.Gallic acid，tannic acid，β-PGG，β-carotene，titration acid and pH value inPh.emblicawere determined by RP-HPLC every 3 days，and pH value and titratable acid were also measured.Results：Gallic acid inPh.emblicain 19 days after picking was the highest.Tannic acid，β-PGG，β-carotene inPh.emblicawas the highest.pH value was the highest at day 22.Titratable acid was the highest at day 4.Conclusion：The results suggest that titratable acid more sensitive than pH value in browning process and related to gallic acid，tannic acid，β-PGG andβ-carotene.Gallic acid can be served as one of the browning process quality control index and provide the reference forPh.emblicastorage or prevention of browning.

Phyllanthusemblica；gallic acid；tannic acid；β-carotene；β-PGG；RP-HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.11.016

2015-10-31)

*

范源，教授，研究方向：天然活性產(chǎn)物及糖尿病治療；E-mail：1647909799@qq.com