劉雨陽(yáng)，侯玉艷，吳素蕊，趙天瑞，樊　建，*（.昆明理工大學(xué)，云南省食品安全研究院，云南昆明650500；.中華全國(guó)供銷合作總社昆明食用菌研究所，云南昆明650）

黃皮疣柄牛肝菌多酚提取及對(duì)Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞抑制作用研究

劉雨陽(yáng)1，侯玉艷1，吳素蕊2，趙天瑞1，樊建1，*
（1.昆明理工大學(xué)，云南省食品安全研究院，云南昆明650500；2.中華全國(guó)供銷合作總社昆明食用菌研究所，云南昆明650221）

以黃皮疣柄牛肝菌為原料，乙醇為提取溶劑，采用Folin-Ciocalteu法測(cè)定多酚含量，研究了乙醇濃度、提取溫度、料液比和提取時(shí)間對(duì)多酚得率的影響。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)之上，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化提取工藝參數(shù)，并測(cè)定了所得多酚組成及其對(duì)Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制作用。結(jié)果表明，最佳提取工藝條件為：溫度為80℃，乙醇濃度為50%，料液比為1∶25 g/mL，提取1 h。在此提取工藝條件下，最佳提取次數(shù)為2次時(shí)，黃皮疣柄牛肝菌多酚的得率為5.46%± 0.04%；在18種酚類物質(zhì)中，在黃皮疣柄牛肝菌中檢出5-磺基水楊酸、兒茶素和肉桂酸等8種多酚類物質(zhì)，其中5-磺基水楊酸含量最高為779.00 mg/100 g；黃皮疣柄牛肝菌多酚對(duì)Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞產(chǎn)生一定程度的抑制作用，當(dāng)其濃度為175 μg/mL時(shí)，抑制率達(dá)55.07%。

黃皮疣柄牛肝菌，多酚，Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞，抗癌

黃皮疣柄牛肝菌又稱黃癩頭（Leccinellum crocipodium），屬真 菌 界（Fungi），擔(dān)子菌 門（Basidiomycota），傘菌綱（Agaricomycetes），牛肝菌目（Boletales），牛肝菌科（Boletaceae），疣柄牛肝菌屬（Leccinellum），菌肉細(xì)嫩、味道鮮美［1］。外生菌根菌，夏秋季生于針闊葉混交林或闊葉林下，子實(shí)體粗壯堅(jiān)實(shí)，商品性狀極佳［2］。云南、江蘇、浙江、安徽、福建、湖南、湖北、廣東、西藏、貴州和臺(tái)灣均有分布［3］。黃皮疣柄牛肝菌蛋白質(zhì)含量為35.1%，可作為蛋白質(zhì)來(lái)源之一，滿足人們對(duì)蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)的需求。黃皮疣柄牛肝菌含有許多生物活性物質(zhì)，如多酚、多糖等［4］，還含有鎂、鐵、鈣、鋅等礦物質(zhì)元素。

野生菌多酚是一類廣泛存在于野生菌內(nèi)的大分子化合物。其具有較強(qiáng)的抗氧化性［5］、抑制癌細(xì)胞［6］、降血壓［7］和降血脂［8］等特點(diǎn)，并應(yīng)用于食品、化妝品、藥品及保健品等領(lǐng)域。早于1957年，Lucas E H［9］首次研究并報(bào)道了美味牛肝菌能夠發(fā)揮抗腫瘤作用。但對(duì)于黃皮疣柄牛肝菌中提取的多酚類物質(zhì)抑制癌細(xì)胞的研究鮮有報(bào)道。本文以云南地區(qū)的黃皮疣柄牛肝菌為原料，采用乙醇溶劑浸提法，提取黃皮疣柄牛肝菌中的粗多酚，優(yōu)化提取工藝條件，測(cè)定其多酚組成，并探究其對(duì)Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制作用，旨在為黃皮疣柄牛肝菌的進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

新鮮黃皮疣柄牛肝菌購(gòu)自云南曲靖馬龍縣；結(jié)腸癌細(xì)胞（Caco-2） 由中科院昆明動(dòng)物所提供；乙腈，HPLC級(jí)德國(guó)Merck KGaA公司；5-磺基水楊酸、沒(méi)食子酸、原兒茶酸、綠原酸、兒茶素、4-羥基苯甲酸、香草酸、咖啡酸、丁香酸、對(duì)香豆酸、蘆丁、鞣花酸、阿魏酸、3，4-二甲氧基苯甲酸、苯甲酸、白藜蘆醇、槲皮素、肉桂酸均≥99%，Sigma公司；二甲基亞砜（AMSO） Biomol公司；3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽（MTT）、胎牛血清、不完全培養(yǎng)基DMEMGibco公司；胰蛋白酶和磷酸鹽緩沖液（PBS）Amresco公司；Na2CO3、Folin-ciocalteu、沒(méi)食子酸、乙酸和乙醇等其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

ZD-F12真空冷凍干燥機(jī)南京載智自動(dòng)化設(shè)備有限公司；AL204型分析天平梅特勒-托利多儀器上海有限公司；HH-4恒溫水浴鍋金壇市科析儀器有限公司；YHZ82恒溫振蕩器常州國(guó)華電器有限公司；L500臺(tái)式低速自動(dòng)平衡離心機(jī)湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司；1260高效液相色譜儀Agilent，Germany；CCL-170B-8二氧化碳培養(yǎng)箱ESCO，Singapore；SpectraMax M5多功能酶標(biāo)儀Molecular Devices，America；生物顯微鏡重慶澳浦光電技術(shù)有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1黃皮疣柄牛肝菌多酚的提取流程

1.2.2黃皮疣柄牛肝菌多酚含量測(cè)定

1.2.2.1多酚得率的測(cè)定多酚含量的測(cè)定使用Folin-ciocalteu方法并經(jīng)過(guò)適當(dāng)修改進(jìn)行測(cè)定［11］。取黃皮疣柄牛肝菌多酚提取液0.5 mL加入2.5 mL 0.2 mol/L福林酚試劑，振蕩均勻后靜置5 min，加入2.0 mL 7.5% Na2CO3溶液，搖勻，避光靜置1 h后765 nm下測(cè)定吸光值。

1.2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制配制20、40、60、80 μg/mL沒(méi)食子酸溶液，參照1.2.2.1方法測(cè)定吸光值，同時(shí)等體積蒸餾水代替沒(méi)食子酸溶液調(diào)零，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2.3多酚得率的計(jì)算取不同條件下提取的樣液，測(cè)定吸光值，按下式計(jì)算得率。

多酚得率（%）=［提取液濃度（mgGAE/mL）×提取液體積（mL）×稀釋倍數(shù)］/［菌粉質(zhì)量（g）×1000］×100 1.2.3黃皮疣柄牛肝菌多酚提取實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及優(yōu)化

1.2.3.1單因素實(shí)驗(yàn)以多酚得率為指標(biāo)，考察提取溫度、乙醇濃度、提取時(shí)間、液料比對(duì)多酚得率的影響。

在其他相同的提取條件下（提取溫度80℃，乙醇濃度70%，提取時(shí)間1 h，液料比1∶25 g/mL，提取次數(shù)為2次），分別考察提取溫度（40、50、60、70、80、90℃）、乙醇濃度（30%、40%、50%、60%、70%、80%）、料液比（牛肝菌粉∶提取液）（1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35 g/mL）、提取時(shí)間（0.5、1、1.5、2、2.5、3 h）4個(gè)單因素對(duì)黃皮疣柄牛肝菌多酚得率的影響。

1.2.3.2正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇乙醇濃度、料液比、提取溫度、提取時(shí)間為正交實(shí)驗(yàn)因素，設(shè)計(jì)3個(gè)水平，以多酚提取率為考察指標(biāo)，采用L9（34）正交表優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方案，研究黃皮疣柄牛肝菌中多酚類物質(zhì)提取的最佳工藝條件，因素水平設(shè)計(jì)見表1。

表1　實(shí)驗(yàn)因素與水平Table 1　Factors and levels of the experiment

1.2.4提取次數(shù)的確定準(zhǔn)確稱取2 g黃皮疣柄牛肝菌粉，每份加入50%的乙醇溶液50 mL，80℃水浴提取1 h。提取次數(shù)超過(guò)1次的，合并提取液，測(cè)定吸光值，計(jì)算得率。

1.2.5HPLC法測(cè)定多酚的種類樣品配制：提取黃皮疣柄牛肝菌中多酚類物質(zhì)，55℃真空濃縮至膏狀，加少量水將提取物溶出后定容，測(cè)定提取物中多酚類物質(zhì)含量。進(jìn)樣前用0.45 μm有機(jī)膜過(guò)濾，備用。

參照Liang等［12］的方法并適當(dāng)修改：色譜柱：Agilent C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，柱溫25℃，進(jìn)樣量10 μL，流速1 mL/min，流動(dòng)相A為0.1%乙酸溶液，流動(dòng)相B為0.1%乙酸乙腈溶液。梯度洗脫程序：0～2 min、10%B；2～27 min、10～30%B；27～40 min、30～90%B；40～41 min、100%B；梯度均為線性變化。

1.2.6黃皮疣柄牛肝菌多酚類物質(zhì)對(duì)Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞抑制作用

1.2.6.1細(xì)胞培養(yǎng)在無(wú)菌環(huán)境下吸出溶有Caco-2細(xì)胞的凍存液，加入5 mL 37℃預(yù)熱的含10%胎牛血清的完全DMEM培養(yǎng)基中，1000 r/min離心5 min。棄去上清液，加入適量的培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)皿中，置于37℃5%CO2濃度以及飽和濕度環(huán)境的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24 h后更換培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24 h［13］，觀察生長(zhǎng)情況。

1.2.6.2MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率稀釋合適的倍數(shù)使細(xì)胞濃度約為1×104個(gè)/孔。吸取200 μL稀釋后的細(xì)胞液至96孔板中，邊緣的孔中加入150 μL PBS。37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。取出后將孔板中的培養(yǎng)基完全吸出，加入不同濃度的樣液（將冷凍干燥的乙醇提取物，用少量二甲基亞砜（DMSO）溶解，然后加入完全培養(yǎng)基稀釋）200 μL到96孔板中，置于37℃5% CO2濃度以及飽和濕度環(huán)境的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。然后棄去其中的培養(yǎng)液，加入150 μL 0.5 mg/mL MTT溶液至孔板中，37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，將MTT溶液吸取干凈，然后每孔加入150 μL DMSO溶液，紫色結(jié)晶產(chǎn)物完全溶解后［14］于570 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。按照如下方法計(jì)算細(xì)胞存活率：

細(xì)胞存活率（%）=（A0-A1）（/A2-A1）×100

式中：A0為單個(gè)樣品處理組吸光度，A1為培養(yǎng)板本底吸光度，A2為未加樣品的對(duì)照組Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞吸光度。

1.3數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用Origin 8.5統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果用表示，并用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

2　結(jié)果與分析

2.1回歸方程確立

以沒(méi)食子酸濃度（線性范圍：0.002～0.010 mg/mL）與吸光度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：C=6.323A+0.01495 （R2=0.9986）。沒(méi)食子酸溶液在0.002～0.010 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

2.2.1溫度對(duì)多酚類物質(zhì)提取效果的影響由圖1可知，黃皮疣柄牛肝菌多酚得率隨提取溫度的升高先增加后降低，在溫度達(dá)到80℃時(shí)，多酚提取率達(dá)最大值。溫度升高，提取液的粘度下降，分子運(yùn)動(dòng)加速，氫鍵更易斷裂，多酚的滲透、溶解、擴(kuò)散速度也加快，因而多酚類物質(zhì)更易于溶出。但溫度過(guò)高也會(huì)使多酚發(fā)生氧化或者降解等一些不可逆的化學(xué)反應(yīng)。另外，溫度過(guò)高也會(huì)導(dǎo)致提取劑乙醇的揮發(fā)，導(dǎo)致多酚得率的下降［15］。

圖1　溫度對(duì)黃皮疣柄牛肝菌多酚得率的影響Fig.1　Effect of temperature on the extraction of Leccinellum crocipodium polyphenols

2.2.2乙醇濃度對(duì)多酚類物質(zhì)提取效果的影響由圖2可知，隨著乙醇濃度增大，黃皮疣柄牛肝菌多酚的提取率不斷增加。當(dāng)乙醇濃度達(dá)到60%時(shí)，多酚得率最高，超過(guò)此濃度，提取得率下降。可能是因?yàn)橐掖紳舛冗^(guò)高，一部分乙醇會(huì)揮發(fā)影響提取率。另外，乙醇濃度過(guò)高會(huì)使醇溶性雜質(zhì)、色素成分溶出，導(dǎo)致提取率下降，而乙醇濃度較低時(shí)，糖類物質(zhì)和水互溶會(huì)影響多酚的提取率［16］。

圖2　乙醇濃度對(duì)黃皮疣柄牛肝菌多酚得率的影響Fig.2　Effect of ethanol concentration on the extraction ofLeccinellum crocipodium polyphenols

2.2.3料液比對(duì)提取效果的影響由圖3可知，在相同提取條件下，隨著料液比的增大，黃皮疣柄牛肝菌多酚得率不斷增加。當(dāng)料液比達(dá)到1∶25時(shí)，大多數(shù)多酚被提取出來(lái)。加大溶劑量后，多酚得率沒(méi)有顯著提高。另外，料液比過(guò)高，醇溶性雜質(zhì)浸出率也會(huì)增高，對(duì)后續(xù)處理不利。因此，綜合考慮到溶劑的用量以及節(jié)能減排等需要，選取最佳料液比為1∶25。

圖3　料液比對(duì)黃皮疣柄牛肝菌多酚得率的影響Fig.3　Effect of solid-liquid on the extraction of Leccinellum crocipodium polyphenols

圖4　時(shí)間對(duì)黃皮疣柄牛肝菌多酚得率的影響Fig.4　Effect of time on the extraction of Leccinellum crocipodium polyphenols

2.2.4時(shí)間對(duì)多酚類物質(zhì)提取效果的影響理論上說(shuō)，提取率隨提取時(shí)間的增加而增大［17］。但是提取達(dá)到一定時(shí)間時(shí)，多酚的溶出達(dá)到平衡，即使再延長(zhǎng)提取時(shí)間，提取率也不會(huì)顯著增加。另外，浸提時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)，多酚物質(zhì)會(huì)發(fā)生降解、氧化等化學(xué)反應(yīng)致使多酚分子結(jié)構(gòu)發(fā)生一定的破壞。由圖4可知，提取1 h后，多酚提取率有所下降，故選取1 h為最佳提取時(shí)間。

2.3牛肝菌多酚提取工藝的正交實(shí)驗(yàn)

在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以黃皮疣柄多酚得率為考察指標(biāo)，采用L9（34）正交表研究最佳提取條件，結(jié)果見表2。

表2　實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2　Experimental design and result

由表2結(jié)果可知，4個(gè)因素對(duì)黃皮疣柄牛肝菌多酚浸提效果影響最大的是浸提溫度，其次是料液比和時(shí)間，影響最小的是乙醇濃度。浸提黃皮疣柄牛肝菌多酚的最佳工藝條件組合為A2B1C2D2，即溫度為80℃，乙醇濃度為50%，料液比為1∶25 g/mL，提取1 h。對(duì)照正交表，正交實(shí)驗(yàn)9組實(shí)驗(yàn)中沒(méi)有A2C2D2B1，按A2C2D2B1條件補(bǔ)加實(shí)驗(yàn)，重復(fù)三次取平均值，得黃皮疣柄牛肝菌多酚的得率為5.46%±0.04%，且高于正交實(shí)驗(yàn)表中其他組合的多酚得率。

2.4浸提次數(shù)對(duì)多酚類物質(zhì)提取效果的影響

在黃皮疣柄牛肝菌多酚提取的最佳工藝條件下，連續(xù)提取5次，分別測(cè)取單次浸提多酚類物質(zhì)的含量并累計(jì)相加，浸提次數(shù)對(duì)黃皮疣柄牛肝菌多酚類物質(zhì)提取效果的影響如圖5所示。提取2次和提取3次的提取物中多酚無(wú)顯著性差異（p＞0.05），考慮到節(jié)約能源和人力，選取最佳浸提次數(shù)為2次。

圖5　提取次數(shù)對(duì)黃皮疣柄牛肝菌多酚得率的影響Fig.5　Effect of extraction times on Leccinellum crocipodium polyphenols

2.5HPLC法測(cè)定多酚的成分

在1.2.5所述色譜條件下，將黃皮疣柄牛肝菌樣品進(jìn)樣，測(cè)定18種多酚類物質(zhì)的含量，各成分的含量以毫克等量每100克牛肝菌干重（mg/100 g）來(lái)表示，測(cè)定結(jié)果見表3。

表3　黃皮疣柄牛肝菌樣品多酚測(cè)定結(jié)果Table 3　Determination results of Leccinellum crocipodium samples

由表3可以看出，在該色譜條件下測(cè)定黃皮疣柄牛肝菌樣品，檢測(cè)出8種酚類物質(zhì)，且5-磺基水楊酸在所檢測(cè)的18種酚類物質(zhì)中含量最高。在黃皮疣柄牛肝菌中還檢測(cè)出綠原酸、兒茶素、對(duì)香豆酸、鞣花酸、苯甲酸、槲皮素和肉桂酸共8種多酚類物質(zhì)。

在此色譜條件下，18種酚類物質(zhì)得到了較好的分離，說(shuō)明該色譜條件適合測(cè)定黃皮疣柄牛肝菌中5-磺基水楊酸、綠原酸、兒茶素、肉桂酸等多酚類物質(zhì)。黃皮疣柄牛肝菌中所含多酚類物質(zhì)的含量存在差異，其中5-磺基水楊酸含量最高為779.00 mg/100 g。

2.6MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率分析

黃皮疣柄牛肝菌對(duì)Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制作用如圖6所示（對(duì)照組細(xì)胞存活率設(shè)為100%）。

由圖6可知，Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞經(jīng)過(guò)不同濃度的黃皮疣柄牛肝菌多酚提取物誘導(dǎo)培養(yǎng)48 h后，細(xì)胞存活率均有一定程度的下降。與對(duì)照組相比，呈顯著性差異（p＜0.05）。且細(xì)胞存活率與多酚濃度呈良好的線性關(guān)系，隨濃度的增加而遞減。當(dāng)其多酚濃度為175 μg/mL時(shí)，細(xì)胞存活率為44.93%，抑制率達(dá)55.07%。

圖6　黃皮疣柄牛肝菌乙醇提取物對(duì)細(xì)胞存活率的影響Fig.6　Effect of polyphenolic extracts from Leccinellum crocipodium on cell viability

實(shí)驗(yàn)表明，黃皮疣柄牛肝菌對(duì)Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞產(chǎn)生一定程度的抑制作用。Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞數(shù)量的減少可能是黃皮疣柄牛肝菌多酚對(duì)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用，也可能是對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用。細(xì)胞增殖、凋亡調(diào)控的異常與腫瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)［18］。此前有報(bào)道指出，美味牛肝菌粗多糖對(duì)MCF-7細(xì)胞48 h抑制率僅為19.12%［19］，低于黃皮疣柄牛肝菌多酚對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制作用。Fridrich等［20］研究表明，蘋果多酚能夠抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖，而對(duì)正常細(xì)胞增殖作用不明顯?？煽煞鄱喾犹崛∥飳?duì)Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率高達(dá)70%，主要原理是使細(xì)胞周期阻滯于G2/M期［21］。此外，Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞數(shù)量的減少可能與牛肝菌多酚的抗氧化作用相關(guān)。Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞細(xì)胞數(shù)量的減少還可能受黃皮疣柄牛肝菌提取物中所含多酚類物質(zhì)的種類和含量的影響。黃皮疣柄牛肝菌對(duì)Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞抑制作用的機(jī)理有待探究，對(duì)其他癌細(xì)胞的作用效果有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。

3　結(jié)論

在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)之上，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化提取工藝，確定了最佳提取工藝條件為：溫度為80℃，乙醇濃度為50%，料液比為1∶25 g/mL，提取1 h，提取次數(shù)為2次時(shí)，黃皮疣柄牛肝菌多酚的得率為5.46%± 0.04%。黃皮疣柄牛肝菌中多酚含量存在較大的差異，在18種多酚類物質(zhì)中，5-磺基水楊酸、兒茶素和肉桂酸等8種多酚類物質(zhì)均被檢出，其中5-磺基水楊酸含量最高，為779.00 mg/100 g；體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黃皮疣柄牛肝菌中提取的多酚類物質(zhì)對(duì)Caco-2結(jié)腸癌細(xì)胞產(chǎn)生一定程度的抑制作用，可以開發(fā)為癌癥有效的治療劑。研究表明黃皮疣柄牛肝菌中多酚類化合物含量較高，具有一定的開發(fā)利用前景。

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The polyphenol extraction of Leccinellum crocipodium and their inhibitory effect on proliferation of Caco-2 cells

LIU Yu-yang1，HOU Yu-yan1，WU Su-rui2，ZHAO Tian-rui1，F(xiàn)AN Jian1，*
（1.Yunnan Institute of Food Safety，Kunming University of Science and Technology，Kunming 650500，China；
2.Kunming Edible Fungi Institute of All China Federation of Supply and Marketing Cooperatives，Kunming 650221，China）

The polyphenols were extracted from the Leccinellum crocipodium by ethanol as extraction solvent extraction and Folin-Ciocalteu method.The effect of ethanol concentration，temperature，solid-liquid ratio and time on the extraction efficiency of polyphenols were identified.Based on single factor test，an orthogonal design was applied to optimize extraction process.The polyphenol composition and inhibitory effect on Caco-2 cells of Leccinellum crocipodium were investigated in the present work.The results showed that the optimum conditions for extraction of polyphenols were temperature of 80℃，ethanol concentration of 50%，solid-liquid ratio of 1∶25，extracted 1 h，two times.Under this condition，polyphenol extraction rate was 5.46%±0.04%. Among 18 kinds of polyphenols，the polyphenols of this wild edible fungi were mainly composed of 5-sulfosalicylic acid，catechin，cinnamon and other five kinds of polyphenols，and the content of 5-sulfosalicylic acid up to 779.00 mg/100 g.The inhibitory effects on colon carcinoma cells showed that the cell inhibition rate was up to 55.07%，when the polyphenols concentration was 175 μg/mL.

Leccinellum crocipodium；polyphenol；colon carcinoma cells；anticancer

TS201.3

B

1002-0306（2016）04-0278-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.04.047

2015－09－10

劉雨陽(yáng)（1991-），女，碩士研究生，研究方向：發(fā)酵工程，E-mail：303245011@qq.com。

樊建（1964-），男，碩士，副教授，研究方向：食品科學(xué)與工程，E-mail：fanj333@163.com。

國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題（2013BAD16B01）。