周　平　秦　弦　譚忠友　陳紅兵▲.重慶三峽中心醫(yī)院江南分院兒內(nèi)二科，重慶　404000；.重慶三峽中心醫(yī)院江南分院兒內(nèi)一科，重慶　404000

小兒呼吸道合胞病毒A、B亞型的流行病學(xué)特征及臨床表現(xiàn)

周平1秦弦1譚忠友2陳紅兵1▲
1.重慶三峽中心醫(yī)院江南分院兒內(nèi)二科，重慶404000；2.重慶三峽中心醫(yī)院江南分院兒內(nèi)一科，重慶404000

目的 分析小兒呼吸道合胞病毒（hRSV）A、B亞型的流行病學(xué)特征及臨床表現(xiàn)。方法 選擇2014～2015年重慶三峽中心醫(yī)院江南分院以呼吸道感染首診的500例患兒為研究對(duì)象。將鼻咽吸取物標(biāo)本采用直接免疫熒光及RT-PCR方法篩選出hRSV感染陽(yáng)性標(biāo)本，通過(guò)核酸電泳法鑒定A、B亞型。對(duì)照分析hRSV感染的A、B亞型患兒的年齡、性別、住院時(shí)間；分析A、B亞型流行病學(xué)特征及臨床表現(xiàn)差異。結(jié)果 hRSV感染陽(yáng)性患者200例，其中，A亞型71例（35.5%），B亞型129例（64.5%）。hRSV A、B亞型患兒中，男性多于女性，間質(zhì)性肺炎、毛細(xì)支氣管占比高于支氣管肺炎、支氣管炎、哮喘急性發(fā)作。hRSV A、B亞型感染的患兒均以咳嗽、喘息為主要癥狀，其次為鼻塞流涕、發(fā)熱、呼吸困難，hRSV A亞型與B亞型各癥狀占比比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。hRSV A、B亞型感染患兒中，≤6個(gè)月患兒占比最高，且隨著年齡的增長(zhǎng)，患兒所占比例明顯降低；≤6個(gè)月、＞6～12個(gè)月、＞1～2歲、＞2～5歲hRSV A亞型與B亞型患兒占比比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。每年1、2月及11、12月是hRSV感染的高峰期，不同月份A、B亞型患兒的感染情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 2014～2015年hRSV A、B兩亞型在重慶地區(qū)共同流行，以B亞型優(yōu)勢(shì)流行為主。兩亞型在臨床表現(xiàn)、年齡等方面并無(wú)明顯差異。hRSV A、B亞型的分布均與年齡、月份有關(guān)，hRSV A、B亞型均以咳嗽、喘息為主要臨床表現(xiàn)。

呼吸道合胞病毒；分型；流行病學(xué)特征；臨床表現(xiàn)

［Abstract］Objective To analyze the epidemiological characteristics and clinical manifestations of subtype A and B of respiratory syncytial virus（hRSV）.Methods From 2014 to 2015，500 children with respiratory tract infection first diagnosed in Jiangnan Branch Hospital of Chongqing Three Gorges Central Hospital were selected as the research objects. Children with hRSV infection was screened by the method of direct immunofluorescence and RT-PCR，and classified into subtype A and B by nucleic acid electrophoresis.Age，gender，length of hospital stay of patient with subtype A and B of hRSV infection were compared；epidemiological features and clinical manifestations of patient with subtype A and B were analyzed.Results 200 cases of HRSV infection were detected，of which 71 cases（35.5%）with subtype A of hRSV infection，and 129 cases（64.5%）with subtype B infection.In children with subtype A and B of hRSV infection，boys were more than girls，proportions of interstitial pneumonia and capillary bronchus were higher than bronchial pneumonia，bronchitis，asthma acute author.Cough and breathing were the main symptoms of children with subtype A and B of HRSV infection，followed by stuffy nose，runny nose，fever，difficulty breathing；there was no statistically significant difference in the clinical manifestations between subtype A and B of hRSV（P＞0.05）.0-6 months children with the highest proportion in children with subtype A and B of hRSV infection，and as the growth of the age，the proportion was significantly lower；there was no statistically significant difference in the proportion of children aged ≤ 6 months，＞6-12 months，＞1-2 years，and＞2-5 years between subtype A and B of hRSV（P＞0.05）.January， February，December and November every year were the peak of hRSV infection；there was no statistically sig-nificant difference in proportion of children with subtype A and B of hRSV at different months（P＞0.05）.Conclusion Distribution of subtype A and B of hRSV is common popular from 2014 to 2015 in Chongqing，and give priority to subtype B of hRSV.There is no obvious difference of two subtypes in clinical manifestations，age.The distribution of subtype A and B of hRSV is related to age and month，coughing and wheezing are the main manifestations of two subtypes.

［Key words］hRSV；Subtype；Epidemiological characteristics；Clinical manifestation

人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus，hRSV）屬于肺炎病毒屬副黏液病毒科，是一種單負(fù)鏈呼吸道病毒。hRSV是導(dǎo)致嬰幼兒嚴(yán)重呼吸道感染的重要病原［1］。研究顯示，世界范圍內(nèi)hRSV暴發(fā)流行的月份和持續(xù)時(shí)間因地區(qū)和年份而異，但流行規(guī)律大致一致［2-4］。但關(guān)于hRSV在重慶萬(wàn)州區(qū)乃至三峽庫(kù)區(qū)的研究尚未見報(bào)道，而且在三峽大壩蓄水后，對(duì)整個(gè)三峽庫(kù)區(qū)包括重慶萬(wàn)州區(qū)的氣候造成了一定的影響，氣候的改變是否改變了hRSV流行特點(diǎn)，且是否同時(shí)存在其他國(guó)家新近發(fā)現(xiàn)的BA流行株，甚至于出現(xiàn)新的變種，尚不得而知。本研究旨在探討重慶地區(qū)2014～2015年hRSV的流行病學(xué)特征和臨床表現(xiàn)特點(diǎn)。現(xiàn)報(bào)道如下：

1　資料與方法

1.1一般資料

采取2014年1月～2015年12月于重慶三峽中心醫(yī)院江南分院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）首診的500例呼吸道感染患兒，均符合第7版《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》中關(guān)于呼吸道感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］。其中，男273例，女227例，平均年齡（6.39±4.38）個(gè)月。排除先天性心臟病、閉塞性細(xì)支氣管炎、支氣管擴(kuò)張、肺大泡、支氣管肺發(fā)育不良等心肺疾病患兒。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，參與研究的患兒家屬均知情同意并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1直接免疫熒光法檢測(cè)呼吸道合胞病毒抗原患兒入院當(dāng)日或入院第2天，規(guī)范、無(wú)菌地使用鼻咽拭子深入患兒鼻腔至耳根部4～5 cm，旋轉(zhuǎn)1周提取上皮細(xì)胞，放入有3 mL病毒轉(zhuǎn)移液的無(wú)菌離心管中，至于冰盒上，4 h轉(zhuǎn)移至我院檢驗(yàn)科，2000 r/min離心5 min，棄上清，沉淀后用PBS洗滌并調(diào)整濃度，病毒抗原檢測(cè)采用直接免疫熒光法（direct fluorescence assay，DFA）。采用呼吸道病毒診斷試劑盒（D3 Ultra DFA Respiratory Virus Screening and ID Kit，美國(guó)DHI公司）在玻片上點(diǎn)7個(gè)樣（25 μL/孔），置于37℃恒溫培養(yǎng)箱烘干，冷丙酮固定8～10 min。各玻片上分別滴加異硫氰酸熒光素標(biāo)記的7種呼吸道病毒抗原的特異性單克隆抗體，37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育15～20 min，PBS濃縮洗液沖洗3次，風(fēng)干后滴加封固液封片，并于200倍熒光顯微鏡（日本尼康）下觀察，對(duì)觀察結(jié)果進(jìn)行判讀，每孔觀察100個(gè)細(xì)胞，黃綠色熒光≥2個(gè)為抗原陽(yáng)性，反之為陰性。

1.2.2核酸電泳法鑒定A、B亞型篩選屬于呼吸道感染的首診患兒，采用免疫熒光檢測(cè)hRSV，篩選陽(yáng)性標(biāo)本。采用Trizol一步法提取RAN，提取試劑Tripure reagen購(gòu)自羅氏公司，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，DNA提取試劑盒購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司。通過(guò)PCR技術(shù)進(jìn)行呼吸道合胞病毒A、B亞型鑒定，擴(kuò)增采用Super ScriptⅢ Platinum一步法熒光定量RT-PCR試劑盒，用亞型特異引物和探針對(duì)混合核酸標(biāo)本進(jìn)行RSV A、B亞型的檢測(cè)。根據(jù)Gene Bank中RSV G蛋白編碼基因的核苷酸序列，利用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)3條特異的引物：①A、B亞型通用引物5′-GGCAAATGCAAACATGTC-3′，388～405 bp；②5′-TGTTGTGGGTTGCAGGTT-3′，388～405 bp，與A亞型G蛋白核苷酸序列互補(bǔ)片段；③5′-TGGGTGTGTTTTCGGAGG-3′，824～841 bp，與B亞型G蛋白核苷酸序列互補(bǔ)片段。反應(yīng)體系20 μL：2×反應(yīng)混合液10 μL，上下游引物（RSV-A下游引物為10 μmol/L）0.5 μmol/L，各0.5 μL，提取的總核酸6 μL，探針0.6 μmol/L、酶混合液0.4 μmol/L、無(wú)RNA酶水共2 μL。PCR擴(kuò)增條件：50℃ 30 min，95℃ 2 min，95℃ 5 s，60℃ 1 min，50個(gè)循環(huán)，以反應(yīng)管內(nèi)熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)的循環(huán)次數(shù)（Ct值）＜35為結(jié)果陽(yáng)性［6］。

1.3觀察指標(biāo)

對(duì)照分析hRSV A、B亞型患兒，統(tǒng)計(jì)其年齡、性別、住院時(shí)間；比較A、B亞型患兒的流行病學(xué)特征和臨床表現(xiàn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1呼吸道合胞病毒感染檢出情況

本研究中，共檢出hRSV感染陽(yáng)性200例，陽(yáng)性率為40%，其中男126例（63%），女74例（37%）。A亞型71例（35.5%），B亞型129例（64.5%）。年齡≤6個(gè)月的患兒100例，占50.0%；＞6～12月的患兒55例，占27.5%；＞1～2歲的患兒27例，占13.5%；＞2～5歲的患兒18例，占9.0%。剖宮產(chǎn)87例，陰道分娩113例。住院時(shí)間7～15 d，平均（10.84±3.03）d。間質(zhì)性肺炎82例，毛細(xì)支氣管69例，支氣管肺炎21例，支氣管炎19例，哮喘急性發(fā)作9例。

2.2呼吸道合胞病毒A、B亞型患兒一般資料比較

hRSV A、B亞型感染的患兒中，男性多于女性，間質(zhì)性肺炎及毛細(xì)支氣管炎患兒比例高于支氣管肺炎、支氣管炎、哮喘急性發(fā)作患兒。hRSV A、B亞型患兒年齡、性別、出生方式、疾病構(gòu)成及住院時(shí)間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1　呼吸道合胞病毒A、B亞型感染患兒的一般資料比較

2.3呼吸道合胞病毒A、B亞型的臨床表現(xiàn)

hRSV A、B亞型患兒均以咳嗽、喘息為主要癥狀，其次為鼻塞流涕、發(fā)熱、呼吸困難，兩亞型臨床表現(xiàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2　呼吸道合胞病毒A、B亞型感染患兒的臨床表現(xiàn)［n（%）］

2.4呼吸道合胞病毒A、B亞型的流行病學(xué)規(guī)律

本研究中，2014、2015年A、B兩亞型共同流行，均以B亞型為優(yōu)勢(shì)流行株，≤6個(gè)月、＞6～12個(gè)月、＞1～2歲、＞2～5歲患兒hRSV A亞型與B亞型占比比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；hRSV A、B亞型患兒中，≤6個(gè)月患兒占比最高，且隨著年齡的增長(zhǎng)，患兒所占比例明顯降低。不同年份hRSV A、B亞型患兒占比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。不同月份A、B亞型患兒的感染情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但每年1、2月及11、12月是hRSV感染的高峰期。見表4。

表3　呼吸道合胞病毒A、B亞型在不同年齡患兒及年份的感染分布情況［n（%）］

表4　呼吸道合胞病毒A、B亞型感染在不同月份的分布情況［n（%）］

3　討論

hRSV感染有明顯的季節(jié)性，主要暴發(fā)流行于冬春季節(jié)，每年的11月～次年2月為暴發(fā)流行的高峰季節(jié)［7］。BA株首次于2004年在北京被報(bào)道，2007年重慶首次發(fā)現(xiàn)BA株，2008～2009年，BA株迅速成為重慶地區(qū)的優(yōu)勢(shì)流行株［8］。BA株的高優(yōu)勢(shì)流行可能主要是選擇優(yōu)勢(shì)的結(jié)果，但具體機(jī)制還不清楚，可能與G蛋白基因突變導(dǎo)致免疫逃逸有關(guān)，也可能是因?yàn)?0個(gè)核苷酸的插入導(dǎo)致了G蛋白抗原表位的改變，從而導(dǎo)致hRSV的特異性抗體不能有效與之識(shí)別。

hRSV最顯著的特征是每一次hRSV感染只能調(diào)節(jié)以后感染的嚴(yán)重程度，產(chǎn)生的抗體并不能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生永久保護(hù)，因此hRSV可反復(fù)感染［9］。hRSV根據(jù)抗原性的不同可分為A、B兩亞型，A、B兩亞型間的主要區(qū)別在于G蛋白的基因差異［10］。G蛋白是hRSV毒株中變異最大的蛋白，亞型間G蛋白的氨基酸差異達(dá)53%，但在同一亞型內(nèi)，B亞型的氨基酸抗原變異低于A亞型，分別為9%和20%。阿根廷于1999年首次報(bào)道了在G基因上有60個(gè)核苷酸插入的BA株［11］。

本研究選擇我院首診的200例hRSV感染患兒為研究對(duì)象，并采用核酸電泳法鑒定A、B亞型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)hRSV B亞型較為常見，未發(fā)現(xiàn)BA株。A亞型及B亞型患兒中，男性多于女性；間質(zhì)性肺炎及毛細(xì)支氣管炎患兒比例高于支氣管肺炎、支氣管炎、哮喘急性發(fā)作者，與Hall等［12］研究報(bào)道相似。本研究還發(fā)現(xiàn)，hRSV A、B亞型感染的患兒均以咳嗽、喘息為主要癥狀，其次為鼻塞流涕、發(fā)熱、呼吸困難，≤6個(gè)月患兒占比最高，且隨著年齡的增長(zhǎng)，患兒所占比例明顯降低，提示hRSV感染與患兒的年齡存在一定的相關(guān)性，與其他地區(qū)［13-21］的報(bào)道相似。此外，本次研究發(fā)現(xiàn)，2014、2015年hRSV A、B亞型患兒所占比例無(wú)明顯差異。鐘慧玲等［22］研究發(fā)現(xiàn)，1、2、11、12月是hRSV檢出高峰，hRSV的檢出率與月平均氣溫、月總?cè)照諘r(shí)間及月平均風(fēng)速呈負(fù)相關(guān)，尤其與氣溫關(guān)系最為密切。本研究也發(fā)現(xiàn)，11月～次年2月是hRSV感染的高峰期，與其他地區(qū)的報(bào)道相似［23-24］。

綜上所述，hRSV A、B亞型的分布有一定的年齡、月份規(guī)律，2014～2015年重慶地區(qū)以B亞型hRSV流行為主，且在本地區(qū)尚未發(fā)現(xiàn)BA株。hRSV A、B亞型均以咳嗽、喘息為主要臨床表現(xiàn)。本研究系國(guó)內(nèi)首次嘗試對(duì)三峽庫(kù)區(qū)hRSV流行病學(xué)特征及臨床表現(xiàn)特點(diǎn)進(jìn)行研究分析，研究結(jié)果與國(guó)內(nèi)、國(guó)際流行情況相似，提示目前三峽大壩蓄水后尚未對(duì)hRSV的流行情況產(chǎn)生影響。但本研究時(shí)間尚短，今后將繼續(xù)關(guān)注三峽庫(kù)區(qū)hRSV的流行情況。

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Epidemiological features and clinical manifestations of children with respiratory syncytial virus of subtype A and B

ZHOU Ping1QIN Xian1TAN Zhongyou2CHEN Hongbing1▲
1.Ward Two，Department of Pediatrics，Jiangnan Branch Hospital of Chongqing Three Gorges Central Hospital，Chongqing404000，China；2.Ward One，Department of Pediatrics，Jiangnan Branch Hospital of Chongqing Three Gorges Central Hospital，Chongqing404000，China

R725.6

A

1673-7210（2016）05（b）-0115-04

重慶市萬(wàn)州區(qū)科學(xué)技術(shù)項(xiàng)目（201403028）。

2016-02-12本文編輯：程銘）