熱比姑麗·伊斯拉木，阿布都吉力力·阿布都艾尼，冷英莉，王　靜

(1. 新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，烏魯木齊，新疆　830049；2. 新疆銀朵蘭維藥股份有限公司，烏魯木齊，新疆　830013)

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尿通卡克乃其片大鼠長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)的血液指標(biāo)變化

熱比姑麗·伊斯拉木1，阿布都吉力力·阿布都艾尼1，冷英莉2，王靜2

(1. 新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，烏魯木齊，新疆830049；2. 新疆銀朵蘭維藥股份有限公司，烏魯木齊，新疆830013)

目的探討尿通卡克乃其片大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)血液學(xué)指標(biāo)變化。方法SD大鼠120只，雌雄各半，隨機(jī)分為對(duì)照組，尿通卡克乃其片低、中、高劑量組。對(duì)照組為灌胃給予0.5%羧甲基纖維素鈉混懸液，低、中、高劑量組分別灌胃給予尿通卡克乃其片0.32g、1.6g、3.2g(生藥)/kg·d，每周6 d，連續(xù)180 d，分別觀察大鼠在給藥90 d、180 d及停藥后30 d一般狀況、血液細(xì)胞變化、血生化變化，電解質(zhì)及血凝指標(biāo)變化。結(jié)果在實(shí)驗(yàn)期間大鼠未見(jiàn)死亡或無(wú)明顯毒性反應(yīng)。與對(duì)照組比較，在實(shí)驗(yàn)期間大鼠紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、淋巴細(xì)胞百分含量(LYMP%)；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、肌酐(Crea)、總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、肌酸磷酸激酶(CK)；鉀離子濃度(K+)、鈉離子濃度(Na+)、氯離子濃度(Cl-)、凝血酶原時(shí)間(PT)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05～P<0.01)，但未見(jiàn)時(shí)間、劑量規(guī)律性，無(wú)病理意義。結(jié)論0.32 g、1.6 g、3.2 g(生藥)/kg·d 劑量下灌胃尿通卡克乃其片原料粉180 d對(duì)大鼠血液指標(biāo)無(wú)明顯異常，該藥在臨床劑量下長(zhǎng)期使用是安全的。

尿通卡克乃其片；大鼠；長(zhǎng)期毒性；血液指標(biāo)

尿通卡克乃其片是在古代維醫(yī)秘方的基礎(chǔ)上采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)研制而成的片劑，由酸漿、黃瓜子、血竭、西黃耆膠、阿拉伯膠、巴旦仁等10味維吾爾藥材組成，具有鎮(zhèn)痛、利尿的功效。臨床上用于治療尿痛、尿不盡、尿血、尿道流膿等[1]。本文初步探討尿通卡克乃其片(100%處方原藥粉)的大鼠灌胃長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)血液學(xué)指標(biāo)變化，對(duì)其臨床應(yīng)用安全性進(jìn)行再評(píng)價(jià)。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)環(huán)境

SD大鼠140只，SPF級(jí)，雌雄各半，體重60～90 g，由新疆醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK (新) 2003-0001。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(新)2003-0002。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所藥物安全性評(píng)價(jià)中心(GLP)審核，符合動(dòng)物倫理委員會(huì)的管理準(zhǔn)則。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前檢疫，經(jīng)一般行為觀察，選用符合要求的120只大鼠(♀、♂各半)進(jìn)行長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)。

1.2儀器與試劑

PM4000/3全自動(dòng)生化分析儀，意大利·羅馬；BC300全血細(xì)胞分析儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；HK2003電解質(zhì)分析儀，鄭州市匯科電子有限公司；SZZ血凝分析儀，深圳市鵬瑞佳電子有限公司；高速冷凍離心機(jī)，TGL-16G，金壇市華峰儀器有限公司。

尿通卡克乃其片(100%處方原藥粉)由新疆華康藥業(yè)有限責(zé)任公司(現(xiàn)新疆銀朵蘭維藥股份有限公司)提供，批號(hào)：080601。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞容積(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、淋巴細(xì)胞百分含量(LYM%)、中間細(xì)胞百分含量(MID%)、粒細(xì)胞百分含量(GRA%)、網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)(Ret)；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、肌酐(Crea)、總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、肌酸磷酸激酶(CK)；鉀離子濃度(K+)、鈉離子濃度(Na+)、氯離子濃度(Cl-)、凝血酶原時(shí)間(PT)，上述試劑盒均購(gòu)自中生北控生物科技股份有限公司。

1.3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[2-4]

1.3.1動(dòng)物分組及給藥方法:取120只大鼠，雌雄分別按體質(zhì)量隨機(jī)分為4組，分別為對(duì)照組、尿通卡克乃其片(原藥粉)低、中、高3個(gè)劑量組。每組30只，雌雄各半。對(duì)照組0.5% CMC-Na混懸液；尿通卡克乃其片低劑量組為0.32 g(生藥)/kg，中劑量組為1.6 g(生藥)/kg，高劑量組為3.2 g(生藥)/kg(即分別相當(dāng)于臨床成人每日每公斤用的5、25、50倍)。本實(shí)驗(yàn)采用與臨床一致的給藥途徑，灌胃給藥(1 mL/100 g·bw)。每天給藥1次，每周給藥6 d，連續(xù)給藥180 d。分別在給藥90 d結(jié)束時(shí)、給藥180d結(jié)束時(shí)和停藥30 d結(jié)束時(shí)，每組各處死10只(雌雄各半)。

1.3.2觀察指標(biāo):

1.3.2.1一般狀況觀察:每日觀察大鼠一般形態(tài)外觀、行為活動(dòng)、飲食情況、分泌物、排泄物等，同時(shí)觀察動(dòng)物中毒反應(yīng)的癥狀，起始時(shí)間，嚴(yán)重程度，持續(xù)時(shí)間，是否可逆，填寫(xiě)籠旁觀察記錄表肉眼觀察動(dòng)物。

1.3.2.2血細(xì)胞指標(biāo)檢測(cè):分別在給藥90 d結(jié)束時(shí)(處死40只，雌雄各半)、給藥180 d結(jié)束時(shí)(處死40只，雌雄各半)和停藥30 d結(jié)束時(shí)(處死40只，雌雄各半)，檢查各組大鼠血細(xì)胞指標(biāo)(RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、PLT、WBC、LYM%、MID%、GRA%、Ret)1次，總共3次。

1.3.2.3血生化指標(biāo)檢測(cè):分別在給藥90 d結(jié)束時(shí)(處死40只，雌雄各半)、給藥180 d結(jié)束時(shí)(處死40只，雌雄各半)和停藥30 d結(jié)束時(shí)(處死40只，雌雄各半)，檢查各組大鼠血生化指標(biāo)(ALT、AST、ALP、GLU、BUN、TP、ALB、TBIL、Crea、TCHO、TG、CK)1次，總共3次。

1.3.2.4電解質(zhì)及血凝檢測(cè):分別在給藥90 d結(jié)束時(shí)(處死40只，雌雄各半)、給藥180 d結(jié)束時(shí)(處死40只，雌雄各半)和停藥30 d結(jié)束時(shí)(處死40只，雌雄各半)，檢查各組大鼠電解質(zhì)指標(biāo)(K+、Na+、Cl-)及血凝指標(biāo)(PT)1次，總共3次。

2　結(jié)果

2.1一般觀察

與對(duì)照組比較，尿通卡克乃其片組(低、中、高劑量)分別在給藥90 d結(jié)束時(shí)、給藥180 d結(jié)束時(shí)和停藥30 d結(jié)束時(shí)，大鼠未見(jiàn)動(dòng)物死亡或無(wú)明顯毒性反應(yīng)。

2.2血細(xì)胞指標(biāo)檢測(cè)

與對(duì)照組比較，給藥180 d RBC(♀：M)、HGB(♀：M、H)降低(P<0.05)，分別在給藥90 d和停藥后30 d均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；給藥90 d MCH(♂：L、H)升高(P<0.05)，分別在給藥180 d和停藥后30 d均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；MCHC在給藥90 d(♂♀：L、M、H)，給藥180 d(♂：L、M，♀：H)，停藥30 d(♀：L、M)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；給藥90 d WBC(♀：M、H)、LYMP%(♀：L)、PLT(♂：M)升高(P<0.05)，給藥180 d均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)(P>0.05)，但停藥30 d PLT(♂：M)升高(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3血生化指標(biāo)檢測(cè)

與對(duì)照組比較，AST(♂)在給藥90 d(L)、給藥180 d(H)、停藥30 d(H)降低(P<0.05)；給藥180 d ALT(♂：M、H)降低、BUN(♀：H)升高(P<0.01)，停藥30 d ALT(♂：M)、BUN(♂：M)均升高(P<0.05)；分別在給藥180 d和停藥30 d ALP(♂，H)降低，GLU(♀，H)升高(P<0.05～P<0.01)；給藥90 d CK(♂：L)、ALB(♀：H)、TCHO(♀：L)降低(P<0.05)，分別在給藥180 d和停藥30 d除TCHO，♂M外均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；停藥30 d TBIL(♂：H)降低(P<0.01)，分別在給藥90 d、180 d均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；給藥180 d Crea(♂：M)、TG(♂：L，M，H)降低，分別在給藥90 d、停藥30 d均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4電解質(zhì)及血凝檢查

與對(duì)照組比較，給藥90 d，K+(♂♀：L、M、H)、Na+(♂：L，♀：L、M、H)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～P<0.01),分別在給藥180 d、停藥30 d差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。給藥90 d Cl-(♂：L，♀：L、M、H)，停藥30 d(♂：L，H)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～P<0.01)。給藥180 d PT(♂：L)升高，給藥90 d、停藥30 d差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表3。

3　討論

尿通卡克乃其片是維吾爾醫(yī)經(jīng)典方劑。藥性干寒，具有生干生寒，清熱消炎，除腐排膿，利尿通阻等功效[5]。同時(shí)可作為異常粘液質(zhì)清除劑，具有清除異常黏液質(zhì)，恢復(fù)黏液質(zhì)的正常狀態(tài)，平衡體液，調(diào)整氣質(zhì)，用于治療疾病[6-8]。本文初步探討尿通卡克乃其片(100%處方原藥粉)的大鼠灌胃長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)血液學(xué)指標(biāo)變化，對(duì)其臨床應(yīng)用安全性進(jìn)行再評(píng)價(jià)。

血細(xì)胞結(jié)果表明，給藥180 d RBC(♀：M)、HGB(♀：M、H)降低(P<0.05)，分別在給藥90 d和停藥后30 d均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；說(shuō)明RBC、HGB變動(dòng)在正常范圍內(nèi)(一般雌性大鼠正常范圍比雄性低)。給藥90 d MCH(♂：L、H)升高(P<0.05)，分別在給藥180 d和停藥后30 d均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；說(shuō)明MCH變化無(wú)時(shí)間和劑量規(guī)律性。MCHC在給藥90 d(♂♀：L、M、H)，給藥180 d(♂：L、M，♀：H)，停藥30d(♀：L、M)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；此變化無(wú)規(guī)律性。給藥90 d WBC(♀：M、H)、LYMP%(♀：L)、PLT(♂：M)升高(P<0.05)，給藥180 d均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但停藥30 d PLT(♂：M)升高(P<0.05)；說(shuō)明此變化無(wú)時(shí)間、劑量規(guī)律性，且變動(dòng)量在正常范圍內(nèi)。

血生化結(jié)果表明，AST(♂)在給藥90 d(L)、給藥180 d(H)、停藥30 d(H)降低(P<0.05)；給藥90 d CK(♂：L)、TCHO(♀：L)降低；給藥180 d Crea(♂：M)、TG(♂：L，M，H)降低；停藥30 d TBIL(♂：H)降低(P<0.01)；給藥180 d和停藥30 d ALP(♂：H)降低；均無(wú)病理意義。給藥180 d ALT(♂：M、H)降低，BUN(♀：H)、GLU(♀：H)升高(P<0.05～P<0.01)；停藥30 d ALT(♂：M)、BUN(♂：M)、GLU(♀，H)均升高(P<0.05～P<0.01)；說(shuō)明升高作用無(wú)明顯劑量規(guī)律性，且變動(dòng)量在正常范圍內(nèi)。給藥90 d ALB(♀：H)降低(P<0.05)，給藥180 d和停藥30 d均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明降低作用無(wú)時(shí)間規(guī)律性，且變動(dòng)在正常范圍內(nèi)。

電解質(zhì)與血凝結(jié)果表明，給藥90 d，K+(♂♀：L、M、H)、Na+(♂：L，♀：L、M、H)，給藥90 d Cl-(♂：L，♀：L、M、H)、停藥30 d Cl-(♂：L，H)，給藥180 d PT(♂：L)均有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～P<0.01)，說(shuō)明變動(dòng)在正常范圍之內(nèi)，無(wú)病理意義。

總而言之，0.32 g、1.6 g、3.2 g(生藥)/kg·d(相當(dāng)于擬推薦成人臨床劑量的5、25、50倍) 劑量下的尿通卡克乃其片原料粉灌胃大鼠180 d，雖大鼠個(gè)別劑量組、血液個(gè)別指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～P<0.01)，但無(wú)劑量、時(shí)間規(guī)律性，均無(wú)病理意義。因此，尿通卡克乃其片原料粉灌胃大鼠180 d對(duì)大鼠血液指標(biāo)無(wú)明顯異常，在臨床用劑量下長(zhǎng)期使用是安全的。

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A long-term study of the toxicity of an Uyghur medicine,Kursi Kaknaq, on hematological parameters in rats

Rabigul·Islam1, Abdujilil·abdugheny1, LENG Ying-li2, WANG Jing2

(1. Institute of Xinjiang Traditional Uyghur Medicine, Urumqi 830049, China;2. Xinjiang Yinduolan Uyghur Medicine Co. Ltd., Urumqi 830013)

【Abstract】ObjectiveTo investigate the long-term toxicity of an Uyhgur medicine, Kursi Kaknaq, on hematological parameters in the rats. Methods A total of 120 healthy Sprague-Dawley rats were randomly divided into the control, low dose (0.32 g/kg·d ), moderate dose (1.6 g/kg·d) and high dose (3.2g/kg·d) Kursi Kaknaq groups.The drug was given orally, 6 days per week for 180 days. The control group was given 0.5% sodium carboxymethyl cellulose suspension. ResultsNo death was recorded in the rats and no obvious toxic events were observed during the experiment. Hematological parameters including RBC,HGB, MCH, MCHC, LYMP%, WBC, and PLT; biochemical parameters including ALT,AST, ALP, GLU, BUN, ALB ,TBIL, Crea, TCHO, TG, and CK; electrolyte time parameters such as K+, Na+, Cl- and prothrombin time(PT) showed statistically significant differences (P<0.05 andP<0.01), but did not show time and dose effect regularity, and no pathological significance. ConclusionsNo obvious toxic effects on hematological parameters are observed in the SD rats treated with Kursi Kaknaq at doses of 0.32 g, 1.6 g, or 3.2 g (crude drug)/ kg·d orally administered for 180 days, indicating that this drug is safe for long-term clinical use.

Kursi Kaknaq, Uyghur medicine; Rats; Chronic Toxicity, Blood parameters

新疆維吾爾自治區(qū)專(zhuān)利實(shí)施計(jì)劃項(xiàng)目基金(編號(hào)2009002)；新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目基金(編號(hào)C111110002)。

熱比姑麗·伊斯拉木(1970-)，女，研究方向：維藥藥理毒理學(xué)研究。E-mail：rabiya272@126.com。

冷英莉(1976-)，女，研究方向：新藥開(kāi)發(fā)。E-mail：719803232@qq.com。

研究報(bào)告

R-33

A

1671-7856(2016) 08-0059-07

10.3969.j.issn.1671-7856.2016.08.009

2016-03-30