劉潤(rùn)強(qiáng),王清峻,曹前輝

(1.河南科技學(xué)院 資源與環(huán)境學(xué)院, 河南新鄉(xiāng)　453003；2.河南淇林園林科技有限公司,鄭州　450045；3.河南省輝縣農(nóng)業(yè)局， 河南輝縣　453600)

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胺苯吡菌酮和葉菌唑混配對(duì)5種花卉病菌的聯(lián)合毒力研究

劉潤(rùn)強(qiáng)1,王清峻2,曹前輝3

(1.河南科技學(xué)院 資源與環(huán)境學(xué)院, 河南新鄉(xiāng)453003；2.河南淇林園林科技有限公司,鄭州450045；3.河南省輝縣農(nóng)業(yè)局， 河南輝縣453600)

為尋求防治花卉病害的高效、低毒殺菌劑，采用室內(nèi)毒力測(cè)定方法，以玫瑰銹病菌、文竹葉斑病菌、郁金香灰霉病菌、菊花褐斑病菌和茶花炭疽病菌為測(cè)試菌株，研究胺苯吡菌酮和葉菌唑混配對(duì)5種花卉病害的聯(lián)合毒力作用。結(jié)果顯示：當(dāng)葉菌唑和胺苯吡菌酮的混配比例為5∶1時(shí)，對(duì)玫瑰銹病菌的共毒系數(shù)為188.16；混配比例為10∶1時(shí)，對(duì)文竹葉斑病菌的共毒系數(shù)為198.07；混配比例為1∶1時(shí)，對(duì)郁金香灰霉病菌的共毒系數(shù)為190.29,對(duì)菊花褐斑病菌的共毒系數(shù)為192.55；混配比例為3∶1時(shí)，對(duì)茶花炭疽病菌的共毒系數(shù)為200.04。表明胺苯吡菌酮和葉菌唑按適當(dāng)比例混配對(duì)此5種花卉病原菌菌絲和孢子具有明顯抑制作用。

胺苯吡菌酮；葉菌唑；玫瑰銹病菌；文竹葉斑病菌；郁金香灰霉病菌；菊花褐斑病菌；茶花炭疽病菌；聯(lián)合毒力

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，環(huán)境綠化、美化的進(jìn)程加快，對(duì)以觀賞為目的的花卉需求量日益增大，花卉生產(chǎn)已經(jīng)形成產(chǎn)業(yè)，遍布大江南北。然而花卉作為一種觀賞產(chǎn)品，一旦感染病害，嚴(yán)重影響花卉的產(chǎn)量和商品價(jià)值，易造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，對(duì)于花卉病害的防治主要采取“預(yù)防為主、防治為輔”，而防治時(shí)大多以化學(xué)藥劑為主[1-2]。而今國(guó)內(nèi)用于防治花卉病害的化學(xué)藥劑較少，絕大多數(shù)為單劑，且很大部分效果并不理想，有部分藥劑已經(jīng)產(chǎn)生了很強(qiáng)的抗藥性[3]。選擇高效低毒廣譜的殺菌劑已成花卉種植的當(dāng)務(wù)之急。

胺苯吡菌酮(Fenpyrazamine，CAS號(hào)473798-59-3)是日本住友化學(xué)株式會(huì)社研發(fā)的吡啶雜環(huán)類新型殺菌劑，具有新穎化學(xué)結(jié)構(gòu)，能迅速滲入作物體內(nèi)，對(duì)感染的真菌能快速發(fā)揮藥效，試驗(yàn)表明胺苯吡菌酮對(duì)核盤菌、鏈核盤菌和假尾孢菌等均表現(xiàn)高活性[4]。主要用于防治保護(hù)地作物的灰霉病[5]。其作用機(jī)制是抑制真菌麥角甾醇生物合成，可抑制菌絲生長(zhǎng)、孢子萌發(fā)和花粉管生長(zhǎng)。另外，胺苯吡菌酮對(duì)哺乳類動(dòng)物安全，在環(huán)境中能迅速降解，可在多種作物采收前應(yīng)用[6]。葉菌唑(Metconazole，CAS號(hào)125116-23-6)是20世紀(jì)90年代開發(fā)的一種三唑類殺菌劑，作用機(jī)制是抑制麥角甾醇生物合成中C-14脫甲基化酶細(xì)胞色素P45014DM，導(dǎo)致麥角甾醇明顯減少并引起24-亞甲基二羥基羊毛甾醇的積累，使菌體細(xì)胞膜功能受到破壞而發(fā)揮作用，具有保護(hù)、治療和鏟除作用[7-8]。雖然作用機(jī)制與其他三唑類殺菌劑一樣，但活性譜差別較大，被廣泛用于由子囊菌、擔(dān)子菌、半知菌等真菌引起的多種真菌病害的防治，且活性極佳，田間施用對(duì)谷類作物殼針孢、鐮孢霉和柄銹菌植病有卓越效果，同傳統(tǒng)殺菌劑相比，劑量極低但防治植物病害范圍卻很廣[9-10]。

實(shí)踐證明，化學(xué)農(nóng)藥單劑的長(zhǎng)期使用極易出現(xiàn)抗性問題，導(dǎo)致用量不斷加大，抗藥性風(fēng)險(xiǎn)增加，不利于環(huán)境生態(tài)安全。尋求科學(xué)、合理的農(nóng)藥復(fù)配，是解決這一問題較好的辦法。將胺苯吡菌酮和葉菌唑進(jìn)行復(fù)配，達(dá)到協(xié)同增效的作用，提高胺苯吡菌酮和葉菌唑的應(yīng)用范圍和對(duì)不同病原菌的防治效力。本試驗(yàn)測(cè)定這2種藥劑混配對(duì)玫瑰銹病菌等5種花卉病菌的聯(lián)合毒力，旨在明確兩者不同比例混配對(duì)5種常見花卉病原菌的增效作用，篩選出最佳配比，為2種藥劑在花卉上的實(shí)際混配應(yīng)用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1　材料與方法

1.1供試藥劑

胺苯吡菌酮(Fenpyrazamine，標(biāo)準(zhǔn)品)，由成都思天德生物科技有限公司提供； 95% 葉菌唑原藥(Metconazole，技術(shù)級(jí)原藥)，由遼寧春華藥業(yè)科技股份有限公司提供。

1.2供試菌株

玫瑰銹病菌[Phragmidiummucronatum(Pers.) Schl.]、文竹葉斑菌(RamulariaasparagiZ.Y. Zhang et W.Q. Chen)、郁金香灰霉病菌(BotrytistulipaeLind)、菊花褐斑病菌(Septoriachrysan-themiindiciBubak et Kabat)和茶花炭疽病菌(Camelliajapoica)均由河南科技學(xué)院植物病理實(shí)驗(yàn)室采集、分離、鑒定并提供。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1單劑抑制作用測(cè)定文竹葉斑病菌、郁金香灰霉病菌、菊花褐斑病菌和茶花炭疽病菌參照《農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則 NY/T 1156.2-2006》[11]，采用含藥培養(yǎng)基生長(zhǎng)速率法進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)前，菌株在PDA平板培養(yǎng)基中，置于20～25 ℃條件下培養(yǎng)24 h活化，然后轉(zhuǎn)移菌種于斜面培養(yǎng)基上，4 ℃保存?zhèn)溆谩４_定胺苯吡菌酮和葉菌唑原藥藥劑的最低抑制質(zhì)量濃度(Minimal Inhibitory Concentration, MIC)。以MIC為依據(jù)將胺苯吡菌酮和葉菌唑原藥的乙醇水溶液(體積比為3∶7)配置的母液用無菌水分別配成0.10、0.20、0.40、0.80、1.60、3.20、6.40、12.80 mg/L系列質(zhì)量濃度梯度，向直徑為90 mm滅菌后的培養(yǎng)皿內(nèi)注入1 mL上述不同質(zhì)量濃度梯度的待測(cè)藥液，倒入融化好的(55～65 ℃)PDA 培養(yǎng)基5 mL，混勻，制成含藥平板培養(yǎng)基，對(duì)照只加等量的無菌水。每個(gè)處理重復(fù)3次。待平培養(yǎng)基冷凝后于培養(yǎng)基平面接種直徑為5 mm 的菌絲餅，置于25 ℃條件下恒溫培養(yǎng)6～10 d，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算殺菌劑對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率[12]。抑制率公式為：抑制率=[(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/對(duì)照菌落直徑]×100%。由處理質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值和相應(yīng)的抑制幾率值求出毒力回歸方程，并求出抑制中質(zhì)量濃度(EC50)及相關(guān)系數(shù)(r)，以上計(jì)算是用SAS 6.12統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析完成。

玫瑰銹病菌采用孢子萌發(fā)法[13]：以胺苯吡菌酮和葉菌唑原藥藥劑的MIC為參考，分別配置成0.10 mg/L至12.80 mg/L的8個(gè)系列濃度梯度，將藥劑按質(zhì)量濃度溶解在PDA培養(yǎng)基中，在載玻片上制成厚度約3 mm的薄片，選取玫瑰銹病發(fā)病葉片上24 h內(nèi)產(chǎn)生的銹菌新鮮夏孢子抖落在載玻片上，然后放入鋪有3層濕吸水紙的直徑90 mm的培養(yǎng)皿中，蓋上皿蓋，于20 ℃溫箱中培養(yǎng)。每處理重復(fù)3次，以無菌水為對(duì)照。48 h顯微鏡下調(diào)查孢子萌發(fā)情況，每個(gè)處理調(diào)查3個(gè)視野，記錄孢子萌發(fā)數(shù)和孢子總數(shù)，每重復(fù)調(diào)查孢子數(shù)不少于300個(gè)，計(jì)算抑制孢子率。[抑制孢子率=(夏孢子萌發(fā)數(shù)/調(diào)查孢子總數(shù))×100%]、校正抑制率，由處理質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值和相應(yīng)的抑制幾率值求出毒力回歸方程，抑制中質(zhì)量濃度(EC50)及相關(guān)系數(shù)(r)。

1.3.2混劑聯(lián)合毒力測(cè)定根據(jù)單劑毒力測(cè)定結(jié)果，以單劑胺苯吡菌酮和葉菌唑的有效中濃度EC50為基礎(chǔ)，按質(zhì)量配比進(jìn)行藥劑配制：對(duì)玫瑰銹病的配比為1∶15、1∶10、1∶5、1∶1、5∶1、10∶1、15∶1；對(duì)文竹葉斑病菌的配比為1∶20、1∶10、1∶5、1∶1、5∶1、10∶1、20∶1；對(duì)蘋果腐爛病菌的配比為1∶10、1∶5、1∶3、1∶1、3∶1、5∶1、10∶1；對(duì)郁金香灰霉病的配比為1∶18、1∶12、1∶6、1∶1、6∶1、12∶1、18∶1；對(duì)菊花褐斑病的配比為1∶10、1∶5、1∶3、1∶1、3∶1、5∶1、10∶1?；旌纤巹┑馁|(zhì)量濃度梯度設(shè)定為0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00 mg/L。按單劑室內(nèi)毒力測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定并求出毒力回歸曲線、EC50值及相關(guān)系數(shù)(r)。根據(jù)單劑和混劑的EC50值和Sun等[14]的共毒系數(shù)法(co-toxicity coefficient，CTC)評(píng)價(jià)藥劑混用的增效作用和最佳配比，即CTC≤80為拮抗作用，80

2　結(jié)果與分析

2.1胺苯吡菌酮和葉菌唑單劑及復(fù)配對(duì)玫瑰銹病菌的毒力

葉菌唑、胺苯吡菌酮及其二者不同比例的混配組合對(duì)玫瑰銹病菌的毒力測(cè)定結(jié)果見表1。由表1可知，葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑對(duì)玫瑰銹病菌的EC50分別為0.14 mg/L和0.662 mg/L。當(dāng)以1∶15、1∶10、1∶5、1∶1、5∶1、10∶1、和15∶1比例進(jìn)行混配，其對(duì)玫瑰銹病菌均表現(xiàn)增效作用，其中當(dāng)葉菌唑∶胺苯吡菌酮=5∶1時(shí)，共毒系數(shù)最大為188.16，表明葉菌唑∶胺苯吡菌酮以5∶1 的比例混合使用時(shí)對(duì)玫瑰銹病菌的增效作用最明顯。綜合考慮，葉菌唑與胺苯吡菌酮對(duì)玫瑰銹病的防治以1∶15～5∶1復(fù)配較好。

表1　葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑及復(fù)配對(duì)玫瑰銹病菌的毒力

2.2胺苯吡菌酮和葉菌唑單劑及復(fù)配對(duì)文竹葉斑病菌的毒力

葉菌唑、胺苯吡菌酮及其二者不同比例的混配組合對(duì)文竹葉斑病菌的毒力測(cè)定結(jié)果見表2。由表2可知，葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑對(duì)文竹葉斑病菌的EC50分別為0.67 mg/L和3.36 mg/L。當(dāng)以1∶20、1∶10、1∶5、1∶1、5∶1、10∶1和20∶1 的比例進(jìn)行混配，其對(duì)文竹葉斑病菌均表現(xiàn)增效作用，其中當(dāng)葉菌唑∶胺苯吡菌酮=10∶1時(shí)，共毒系數(shù)最大為198.07，表明葉菌唑∶胺苯吡菌酮以10∶1的比例混合使用時(shí)對(duì)文竹葉斑病菌的增效作用最明顯。綜合考慮，葉菌唑與胺苯吡菌酮對(duì)文竹葉斑病的防治以1∶10～10∶1復(fù)配較好。

2.3胺苯吡菌酮和葉菌唑單劑及復(fù)配對(duì)郁金香灰霉病菌的毒力

葉菌唑、胺苯吡菌酮及其二者不同比例的混配組合對(duì)郁金香灰霉病菌的毒力測(cè)定結(jié)果見表3。由表3可知，葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑對(duì)郁金香灰霉病菌的EC50分別為0.47 mg/L和0.19 mg/L。當(dāng)以1∶18、1∶12、1∶6、1∶1、6∶1、12∶1和18∶1的比例進(jìn)行混配，其中當(dāng)葉菌唑∶胺苯吡菌酮=1∶6時(shí)，共毒系數(shù)最大為190.29。表明，葉菌唑∶胺苯吡菌酮以1∶6的比例混合使用時(shí)對(duì)郁金香灰霉病菌的增效作用最明顯。綜合考慮，葉菌唑與胺苯吡菌酮對(duì)郁金香灰霉病的防治以1∶12～6∶1復(fù)配較好。

2.4胺苯吡菌酮和葉菌唑單劑及復(fù)配對(duì)菊花褐斑病菌的毒力

葉菌唑、胺苯吡菌酮及其二者不同比例的混配組合對(duì)菊花褐斑病菌的毒力測(cè)定結(jié)果見表4。由表4可知，葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑對(duì)菊花褐斑病菌的EC50分別為0.23 mg/L和0.75 mg/L。當(dāng)以1∶9、1∶3、1∶3、1∶1、3∶1、6∶1和9∶1的比例進(jìn)行混配，其對(duì)菊花褐斑病菌表現(xiàn)增效作用，其中當(dāng)葉菌唑∶胺苯吡菌酮=1∶1時(shí)，共毒系數(shù)最大為192.55，表明葉菌唑∶胺苯吡菌酮以1∶1的比例混合使用時(shí)對(duì)菊花褐斑病菌的增效作用最明顯。綜合考慮，葉菌唑與胺苯吡菌酮對(duì)菊花褐斑病的防治以1∶3～6∶1復(fù)配較好。

表2　葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑及復(fù)配對(duì)文竹葉斑病菌的毒力

表3　葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑及復(fù)配對(duì)郁金香灰霉病菌的毒力

2.5胺苯吡菌酮和葉菌唑單劑及復(fù)配對(duì)茶花炭疽病菌的毒力

葉菌唑、胺苯吡菌酮及其二者不同比例的混配組合對(duì)茶花炭疽病菌的毒力測(cè)定結(jié)果見表5。由表5可知，葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑對(duì)茶花炭疽病菌的EC50分別為0.55 mg/L和1.71 mg/L。當(dāng)以10∶1、1∶5、1∶3、1∶1、3∶1、5∶1和10∶1比例進(jìn)行混配，其對(duì)茶花炭疽病菌表現(xiàn)增效作用，其中當(dāng)葉菌唑∶胺苯唑菌酮=3∶1時(shí)，共毒系數(shù)最大為200.04，表明葉菌唑∶胺苯吡菌酮以3∶1的比例混合使用時(shí)對(duì)茶花炭疽病菌的增效作用最明顯。綜合考慮，葉菌唑與胺苯吡菌酮對(duì)茶花炭疽病的防治以1∶5～10∶1復(fù)配較好。

3　小結(jié)與討論

栽培花卉由于人工栽培環(huán)境條件與其自然生長(zhǎng)環(huán)境有區(qū)別，使得其在生理上和外部形態(tài)上會(huì)發(fā)生一定的變化，極易感染許多病害。其中絕大部分病害是由真菌引起的，約占花卉病害種類的70%～80%[15]。簡(jiǎn)單地采取單一的藥劑防治方法難以取得滿意的效果。因此，花卉的病害防治必須堅(jiān)持“防重于治”的方針，發(fā)揮綜合防治效能，將病害控制在花卉觀賞價(jià)值允許的水平以內(nèi)。目前，花卉生產(chǎn)上防治其病害的藥劑以甲基硫菌靈、百菌清、代森錳鋅等為主，長(zhǎng)年的使用已經(jīng)出現(xiàn)了抗藥性[16]。胺苯吡菌酮和葉菌唑?yàn)樾滦蛷V譜型藥劑，都能以葉面噴灑方式施藥，且在環(huán)境中能迅速降解，土壤滲瀝性均較小，對(duì)哺乳動(dòng)物毒性小等特點(diǎn)，特別適合在室內(nèi)溫室花卉的種植中使用[17]。雖然二者作用機(jī)制相似，但是并不完全相同，葉菌唑施用后內(nèi)吸輸導(dǎo)性不強(qiáng)，其除導(dǎo)致麥角甾醇明顯減少并使菌體細(xì)胞膜功能受到破壞外，還能抑制或干擾菌體附著胞及吸器的發(fā)育、菌絲和孢子的形成，還可致使膜滲漏加劇，從而降低病原菌致病力[18]。而胺苯吡菌酮具有良好的內(nèi)吸傳導(dǎo)性，不僅能降低病害的發(fā)病嚴(yán)重度，同時(shí)還能降低病菌毒素污染，促進(jìn)植物轉(zhuǎn)青及增產(chǎn)增收的功效。本研究表明胺苯吡菌酮和葉菌唑按適當(dāng)比例混配對(duì)5種不同花卉病原菌都具有明顯的協(xié)同增效作用，可以達(dá)到降低農(nóng)藥用量、擴(kuò)大殺菌譜、提高防治效果和治理抗藥性的目標(biāo)，有進(jìn)一步在花卉上使用研究和推廣的價(jià)值。但其藥劑組合協(xié)同增效作用的機(jī)制和田間實(shí)際防治效果，還有待進(jìn)一步深入研究。

表4　葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑及復(fù)配對(duì)菊花褐斑病菌的毒力

表5　葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑及復(fù)配對(duì)茶花炭疽病菌的毒力

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(責(zé)任編輯：潘學(xué)燕Responsible editor:PAN Xueyan)

Studies on Co-toxicity of Fenpyrazamine/Metconazole Complex against Five Species Diseases in Flower

LIU Runqiang1, WANG Qingjun2and CAO Qianhui3

(1.College of Resources and Environment, Henan Institute of Science and Technology, Xinxiang Henan 453003, China;2.Henan Qilin Garden Technology Co. Ltd., Zhengzhou450045, China; 3.Huixian Agricultural Bureau of Henan Province,Huixian Henan 453600,China)

In order to seek high efficiency and low toxicity fungicide for preventing and controlling the diseases in flowers.The co-toxicity of fenpyrazamine,metconazole and its mixture against rust germs rose,the plaque bacteria Zhuyeshan, tulip gray country bacteria,daisy-chained speckle disease and daisy-chained speckle disease were studied. The co-toxicity of fenpyrazamine/metconazole complex against five species diseases in flowers was studied based on combination toxicity. Bioassay results showed that the co-toxicity cofficient (CTC) against mycelial growth of rust germs rose were 188.16 when ratio of the mixture of fenpyrazamine and metconazole was 5∶1；the CTC against mycelial growth of plaque bacteria Zhuyeshan was 198.07 when the ratio of the mixture was 10∶1; the CTC against mycelial growth of tulip gray country bacteria and daisy-chained speckle disease were 190.29 and 192.55 respectively when the ratio of the mixture was 1∶1 ; CTC against mycelial growth of daisy-chained speckle disease was 200.04 when the ratio of the mixture was 3∶1.The results suggested that fenpyrazamine and metconazole had significant inhibited activity against hyphae and spores of 5 species diseases in flower when mixtures of appropriate ratio were used.

Fenpyrazamine; Metconazole; Rust germs rose;Plaque bacteria Zhuyeshan;Tulip gray country bacteria;Daisy-chained speckle disease;Daisy-chained speckle disease; Co-toxicity

2016-02-24Returned2016-04-20

Project for Introducing Talents of Henan Institute of Science and Technology(No. 103010615001); Postdoctoral Fund Project of Henan Province(No.159831).

LIU Runqiang,male,lecturer,Ph.D,master supervisor.Research area:pesticide compound and pesticide residue analysis and testing research.E-mail:liurunqiang1983@126.com

2016-02-24

2016-04-20

河南科技學(xué)院高層次人才引進(jìn)啟動(dòng)項(xiàng)目(103010615001)；河南省博士后基金(159831)。

劉潤(rùn)強(qiáng)，男，講師，博士，碩士生導(dǎo)師，主要從事農(nóng)藥復(fù)配及農(nóng)藥殘留分析檢測(cè)研究。E-mail：liurunqiang1983@126.com

S436.67

A

1004-1389(2016)08-1237-07

網(wǎng)絡(luò)出版日期：2016-07-14

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1220.S.20160714.1105.036.html