王丹陽，李洋洋，王彬，向梅

·論著·

Tn抗原在宮頸癌組織中的表達及臨床意義

王丹陽，李洋洋，王彬，向梅

目的：探討Tn抗原在宮頸癌組織中的發(fā)生、發(fā)展中的作用，為宮頸癌的早期診斷、治療提供一定的參考依據。方法：選擇2013—2015年吉林大學第二醫(yī)院的102例臨床樣本，其中正常宮頸組織14例，宮頸上皮內瘤變（CIN）組織22例，宮頸癌組織66例，采用免疫組織化學方法以半乳糖胺特異性凝集素蠶豆凝集素（vicia villosa lectin，VVL）作為抗體檢測不同宮頸組織中Tn抗原表達情況。結果：Tn抗原極少表達于正常宮頸鱗狀上皮（7.1％），在CIN和宮頸鱗癌中表達率分別為45.5％和68.8％，而在宮頸腺癌中表達率高達94.1％。在宮頸鱗癌中，Tn抗原的表達與是否存在淋巴結轉移有關（r=0.363，P＜0.05）。在宮頸腺癌中，Tn抗原表達與肌層浸潤深度有關（r=0.361，P＜0.05）。結論：Tn抗原可能作為宮頸腺癌的一種腫瘤標志物，有助于宮頸腺癌的篩查診斷，并可能更早地提示宮頸鱗癌淋巴結轉移的潛在風險。

宮頸腫瘤；Tn抗原；宮頸上皮內瘤樣病變；免疫組織化學

【Abstract】Objective：To investigate the expression of Tn antigen in cervical carcinoma.To explore the role of Tn antigen in the occurrence and development of cervical carcinoma，and to provide a reference for the early diagnosis，treatment of cervical carcinoma.Methods：We screened 102 cervical samples from the Second Hospital of Jilin University from 2013 to 2015，including 66 invasive cervical carcinomas，22 cervical intraepithelial neoplasia（CIN），14 normal cervical squamous epithelia，by immunohistochemistry using biotinylated vicia villosa lectin（VVL）.Results：The Tn antigen was rarely observed in normal squamous epithelium（7.1％），and was detected in 45.5％of CIN and in 68.8％of invasive squamous carcinoma，and was highly observed in 94.1％of invasive adenocarcinoma.In invasive squamous carcinoma，expression of Tn antigen was closely related to lymph node metastasis（r=0.363，P＜0.05）.In adenocarcinoma，the correlation was shown between Tn expression and depth of invation（r=0.361，P＜0.05）.Conclusions：Tn antigen could be used as a marker for cervical adenocarcinoma，and Tn antigen could indicate the potent risk of lymph-nodes metastasis in squamous carcinoma.

【Keywords】Uterine cervical neoplasms；Tn antigen；Cervical intraepithelial neoplasia；Immunohistochemistry （J Int Obstet Gynecol，2016，43：446-448）

近年宮頸腺癌的發(fā)病率逐年升高，由于腺癌的特殊性，現有的宮頸癌篩查手段（如宮頸細胞脫落法等）對宮頸腺癌早期診斷的價值有限。目前通過各種檢測方法測定腫瘤標志物含量，為宮頸癌的輔助診斷、復發(fā)檢測和預后判斷提供了新思路，同時對于控制過度醫(yī)療也具有重要意義［1-2］。糖基化的異常改變是細胞癌變的一個重要特征，這些抗原稱腫瘤相關糖抗原（tumor-associated carbohydrate antigen，TACA）。Tn抗原是一種與黏蛋白相關的TACA，大量的研究認為Tn抗原在多種上皮性腺癌中高度表達［3-5］。但目前關于Tn抗原在宮頸癌中的研究很少。本研究通過免疫組織化學方法以蠶豆凝集素（vicia villosa lectin，VVL）檢測正常宮頸組織、宮頸上皮內瘤變（CIN）組織及宮頸癌組織中的表達情況，探討Tn抗原在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為宮頸癌的診治提供參考依據。

1　資料與方法

1.1臨床資料收集吉林大學第二醫(yī)院2013—2015年因子宮腺肌病、子宮肌瘤、CIN、宮頸癌等原因行子宮全切術及宮頸錐切術的臨床標本102例，其中正常宮頸組織14例，CIN組織22例，宮頸癌組織66例（未經任何治療，如放療、化療等，其中宮頸鱗癌32例，宮頸腺癌34例）。所有患者均按照國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）臨床分期（2009）標準進行分期。

1.2方法手術均由婦科高年資腫瘤?？漆t(yī)生進行，手術標本均由2位有經驗的婦科高年資病理學醫(yī)師讀片核對。所有的標本固定在10％福爾馬林中，經過石蠟包埋，將石蠟組織切成4 μm厚的切片。采用免疫組織化學法檢測Tn抗原。取4 μm厚石蠟組織切片，脫蠟、水化，5％過氧化氫甲醇溶液封閉（室溫下30 min）；以10％羊血清室溫30 min封片，以半乳糖胺特異性凝集素蠶豆凝集素（vicia villosa lectin，VVL，由Vector Labs，Burlingame，CA生產）1∶2 000稀釋在室溫下并與玻片反應30 min，以磷酸鹽緩沖液（PBS）作陰性對照；隨后加適度稀釋過氧化物酶標記的鏈霉親和素（Vector Labs），室溫30 min；用二氨基聯苯胺（DAB）顯色，水洗，蘇木素復染。常規(guī)脫水透明，中性樹膠封固。

1.3結果判定每張切片均取5個高倍視野，每個視野計數大于100個細胞，根據抗原反應的陽性細胞百分比分為5個級別：0（＜5％），1+（5％～10％），2+（10％～25％），3+（25％～50％），4+（≥50％）。

1.4統(tǒng)計學方法用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行分析。定性資料用率表示，組間比較采用卡方檢驗和四格表確切概率法。等級資料組間比較采用秩和檢驗。Tn抗原陽性表達與宮頸癌病理因素的關系用Pearson列聯系數表明變量間的關聯程度。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1Tn抗原在不同宮頸組織中的表達Tn抗原主要表達于細胞膜及富有胞質的癌細胞中。在宮頸鱗癌中，Tn抗原主要分布在癌巢中央及邊緣，主要表達于細胞質中；在宮頸腺癌中，Tn抗原主要分布在細胞膜表面及分泌物中，見圖1（見封三）。Tn抗原極少表達于正常宮頸鱗狀上皮（7.1％），在CIN和宮頸鱗癌中表達率分別為45.5％、68.8％，而在宮頸腺癌中的表達率高達94.1％。Tn抗原在宮頸正常鱗狀上皮中的陽性表達低于其在CIN、宮頸癌中的表達，差異有統(tǒng)計學意義（χ2分別為5.918，29.979，均P＜0.05），其中宮頸腺癌組織中Tn抗原的陽性表達高于其在CIN、宮頸鱗癌中的表達，差異有統(tǒng)計學意義（χ2分別為16.870，7.131，均P＜0.05）。Tn抗原在宮頸癌中的染色評分高于CIN（Z=-5.070，P＜0.01），見表1。

表1　Tn抗原在各種宮頸組織中的陽性表達情況

2.2Tn抗原陽性表達與宮頸癌病理因素的關系在宮頸鱗癌中，Tn抗原的表達與是否存在淋巴結轉移有關（r=0.363，P＜0.05），但與臨床分期、組織學分級、肌層浸潤深度以及淋巴脈管瘤栓無關（P＞0.05）。Tn抗原高度表達于宮頸腺癌中，其表達與肌層浸潤深度有關（r=0.361，P＜0.05），但與其他臨床病理特征無關（P＞0.05），見表2。

表2　Tn抗原的表達與宮頸癌臨床病理特征的關系

3　討論

目前腫瘤藥物治療的靶點主要有細胞周期和細胞信號轉導通路，因為對腫瘤細胞選擇性不高，藥物治療存在不良反應，因此眾多研究者致力于尋找新的腫瘤特異性分子作為腫瘤診斷和治療的靶點，以糖生物學為基礎的靶點研究正逐漸成為腫瘤研究熱點。而Tn抗原是近年來備受矚目的一種TACA，在多種上皮性惡性腫瘤中高表達，且在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用，但在各自相對應的正常組織中則很少或不表達。

3.1Tn抗原在不同宮頸組織中的表達情況本研究發(fā)現Tn抗原極少表達于正常宮頸鱗狀上皮，與以往的研究結果一致［7-8］。Tn抗原在CIN及宮頸癌中陽性表達率均高于宮頸正常鱗狀上皮組織，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），這與Carrilho等［9］的研究結果一致。Tn抗原在宮頸癌中的表達率達81.8％，其中在宮頸鱗癌中表達率為68.8％，而在宮頸腺癌中表達率高達94.1％。因此，Tn抗原可能作為宮頸癌的標志物。

3.2Tn抗原在宮頸癌中的表達情況本研究采用VVL來檢測Tn抗原，VVL與Tn抗原具有高度特異結合能力，其已用于檢測胰腺癌、乳腺癌、肺癌及前列腺癌等腫瘤細胞［10-11］。目前薄層液基細胞學檢查（TCT）以及人乳頭狀瘤病毒（HPV）聯合應用于宮頸癌早期診斷，其對宮頸鱗癌的早期診出率高于宮頸腺癌，因TCT對宮頸腺癌的漏診率很高［12］，而本研究發(fā)現Tn抗原在宮頸腺癌中陽性表達率高達94.1％，這提示Tn抗原可能作為宮頸腺癌的一種高效的腫瘤標志物，從而對目前篩查診斷宮頸腺癌有一定幫助。

3.3Tn抗原陽性表達與宮頸癌不同病理因素的關系在宮頸鱗癌中，Tn抗原的陽性表達與是否發(fā)生淋巴結轉移有關，而其表達與宮頸鱗癌的組織學分級、肌層浸潤深度以及淋巴脈管瘤栓無關，提示Tn抗原可能作為預測宮頸鱗癌是否發(fā)生淋巴結轉移的一項標志物。然而，本研究發(fā)現在宮頸腺癌中，Tn抗原表達僅與肌層浸潤深度有關，Tn抗原的表達是否與癌轉移存在相關性仍存在爭議［8，11，13-14］，還有待于進一步大樣本的研究核實。

［1］何鳳梅.鱗狀細胞癌抗原在宮頸癌中的表達及其臨床意義［J］.中國實驗診斷學，2009，13（7）：965-966.

［2］童紅莉，李娟，溫新宇，等.腫瘤標志物聯合檢測在宮頸癌診斷中的應用價值［J］.標記免疫分析與臨床，2011，18（3）：160-162.

［3］Konska G，Guerry M，Caldefie-Chezet F，et al.Study of the expression of Tn antigen in different types of human breast cancer cells using VVA-B4 lectin［J］.Oncol Rep，2006，15（2）：305-310.

［4］Remmers N，Anderson JM，Linde EM，et al.Aberrant expression of mucincoreproteinsando-linkedglycansassociatedwith progression of pancreatic cancer［J］.Clin Cancer Res，2013，19（8）：1981-1993.

［5］邸曼，陳必良，陳良鳳，等.T-Synthase及Tn、s-Tn抗原在上皮性卵巢癌中的表達及其臨床意義 ［J］.中國生化藥物雜志，2015，（1）：91-93.

［6］Terasawa K，Furumoto H，Kamada M，et al.Expression of Tn and sialyl-Tn antigens in the neoplastic transformation of uterine cervical epithelial cells［J］.Cancer Res，1996，56（9）：2229-2232.

［7］Cao Y，Stosiek P，Springer GF，et al.Thomsen-Friedenreich-related carbohydrate antigens in normal adult human tissues：a systematic and comparative study［J］.Histochem Cell Biol，1996，106（2）：197-207.

［8］RavnV，MandelU，SvenstrupB，etal.Simplemucin-type carbohydrates in normal and malignant human endometrium［J］.Int J Gynecol Pathol，1995，14（2）：158-166.

［9］CarrilhoC，CantelM，GouveiaP，etal.Simplemucin-type carbohydrate antigens（Tn，sialosyl-Tn，T and sialosyl-T）and gp 230 mucin-like glycoprotein are candidate markers for neoplastic transformation of the human cervix［J］.Virchows Arch，2000，437 （2）：173-179.

［10］Kulkarni KA，Sinha S，Katiyar S，et al.Structural basis for the specificity of basic winged bean lectin for the Tn-antigen：a crystallographic，thermodynamic and modelling study［J］.FEBS Lett，2005，579（30）：6775-6780.

［11］Kawaguchi T，Takazawa H，Imai S，et al.Expression of Vicia villosa agglutinin（VVA）-binding glycoprotein in primary breast cancer cells in relation to lymphatic metastasis：is atypical MUC1 bearing Tn antigen a receptor of VVA？［J］.Breast Cancer Res Treat，2006，98 （1）：31-43.

［12］張建新，張長淮，周艷秋，等.15393例宮頸液基細胞學與組織病理學的對照分析［J］.中華病理學雜志，2007，36（7）：485-488.

［13］Hamada S，Furumoto H，Kamada M，et al.High expression rate of Tn antigen in metastatic lesions of uterine cervical cancers［J］.Cancer Lett，1993，74（3）：167-173.

［14］Lin CY，Ho JY，Hsieh MT，et al.Reciprocal relationship of Tn/NF-κB and sTn as an indicator of the prognosis of oral squamous cell carcinoma［J］.Histopathology，2014，64（5）：713-721.

［本文編輯秦娟］

Expression and Clinical Significance of Tn Antigen in Cervical Carcinoma

WANG Dan-yang，LI Yang-yang，WANG Bin，XIANG Mei.Department of Obstetrics and Gynecology，The Second Hospital of Jilin University，Changchun 130041，China

XIANG Mei，E-mail：xiangmei@126.com

130041長春，吉林大學第二醫(yī)院婦產科

向梅，E-mail：xiangmei@126.com

2016-01-11）