付婷婷李　慧吳洪軍胡　偉么宏偉**　李靖彤　孫德軍

（1.黑龍江省林副特產(chǎn)研究所 省非木質(zhì)林產(chǎn)品研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，牡丹江　157011；2.黑龍江省煙草公司牡丹江煙草科學(xué)研究所，牡丹江　157011；3.黑龍江省林業(yè)科學(xué)院，哈爾濱　150081；4.哈爾濱煙葉公司綏化分公司，黑龍江　綏化　152000）

山杏和山丁子多酚的抗氧化活性研究*

付婷婷1李慧2吳洪軍1胡偉1么宏偉1**李靖彤3孫德軍4

（1.黑龍江省林副特產(chǎn)研究所 省非木質(zhì)林產(chǎn)品研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，牡丹江157011；2.黑龍江省煙草公司牡丹江煙草科學(xué)研究所，牡丹江157011；3.黑龍江省林業(yè)科學(xué)院，哈爾濱150081；4.哈爾濱煙葉公司綏化分公司，黑龍江綏化152000）

對(duì)山杏多酚、山丁子多酚的抗氧化活性的研究結(jié)果表明，2種多酚都具有一定程度的抗氧化活性，均呈劑量依賴性，且山丁子多酚的抗氧化能力略高于山杏多酚。

山杏；山丁子；多酚；抗氧化活性

多酚廣泛分布在水果、蔬菜、谷類等植物組織中，是植物體內(nèi)最豐富的次級(jí)代謝產(chǎn)物。研究發(fā)現(xiàn)，它具有抗氧化［1-2］、抗炎［3］、抗癌［4-5］、輻射損傷防護(hù)性［6］、降血糖、降血脂［7］、護(hù)色保鮮［8］等活性。

山丁子（Malus baccata），薔薇科蘋果屬，主要在我國東北部大興安嶺地區(qū)分布，是一種來源豐富的野生植物資源，其富含多酚等多種植物次級(jí)代謝產(chǎn)物。山杏（Prunus sibirica）薔薇科杏屬植物，是我國北方重要的生態(tài)經(jīng)濟(jì)型樹種，其杏仁廣泛應(yīng)用于面包、糖果、飲料等食品加工業(yè)，其果肉是杏仁加工過程中產(chǎn)生的剩余物。目前國內(nèi)對(duì)植物多酚研究較多，蘋果多酚、葡萄籽多酚是研究熱點(diǎn)，關(guān)于山丁子與山杏多酚鮮有研究，關(guān)于二者多酚抗氧化活性對(duì)比的研究更是未見。

本試驗(yàn)研究了山杏多酚與山丁子多酚的抗氧化活性，對(duì)·OH、DPPH、·O2-的清除能力和對(duì)Fe2+的螯合能力4個(gè)指標(biāo)分別進(jìn)行了對(duì)比，以期為二者在食品行業(yè)上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料及儀器

山丁子，采自牡丹江市東京城，去柄，洗凈，粉碎；山杏，采自牡丹江市，去核留肉，粉碎。取100 g粉碎后的山杏與山丁子果肉，分別浸泡于500 mL 80%（v/v）乙醇中超聲15 min，45℃水浴提取2 h，提取物分別過濾，10 000 r/min離心10 min，收集上清。提取過程重復(fù)3次，分別合并提取物，濃縮至20 mL。濃縮提取物置于冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

試驗(yàn)試劑有：TBA、DPPH、EDTA，購自sigma公司；NADA NBT，購自北京索萊寶公司；H2O2、FeCl2，購自北京化工廠。

試驗(yàn)儀器與設(shè)備有：紫外可見分光光度計(jì)U-3010，日本HITACHI株式會(huì)社產(chǎn)品；渦旋混勻器HYQ-2121A，美國CRASTAL公司產(chǎn)品。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1·OH自由基清除活性測定方法

采用α-脫氧核糖氧化法［9］。分別取5、10、15、20、25 μL的山杏和山丁子多酚濃縮溶液，將FeSO4·7H2O（0.1 mL10 mM）、磷酸緩沖液（0.9 mL 0.1 mMpH為7.4）、α-脫氧核糖（0.5 mL 10 mM）、EDTA（0.1 mL 10 mM）和樣品溶液在試管中充分混勻。添加H2O2（0.2 mL10 mM）反應(yīng)開始，置于37℃浴中反應(yīng)1 h。反應(yīng)結(jié)束，添加TCA（1.0 mL 0℃2.8%），隨后加入TBA（1 mL 1%）混勻，沸水浴反應(yīng)20 min，冷卻后于波長532 nm處測吸光值?！H清除率的計(jì)算公式

式中，A0為空白對(duì)照的吸光值；A1為樣品反應(yīng)后的吸光值。

1.2.2DPPH自由基清除活性測定［10］方法

分別取5、10、15、20、25 μL的山杏、山丁子多酚濃縮溶液，將樣品溶液加入到DPPH 95%乙醇（1.5 mL 0.l mM）中，混勻，室溫下避光反應(yīng)30 min，在517 nm處測定吸光值。DPPH清除率計(jì)算公式

式中，A0為空白對(duì)照的吸光值；A1為樣品反應(yīng)后的吸光值。

清除活性測定［11］方法

式中，A0為空白對(duì)照的吸光值；A1為樣品反應(yīng)后的吸光值。

1.2.4Fe2+螯合能力測定［12］

分別取5、10、15、20、25 μL的山杏和山丁子多酚濃縮溶液，反應(yīng)混合物包括 45 μL 2 mM FeCl2、450 μL樣品和1 815 μL蒸溜水。劇烈震蕩混合物，于室溫下放置30 min；30 min后，加入ferrozine（90 μL 5 mM）混勻，在562 nm處測定Fe2+-ferrozine復(fù)合物的吸光值。Fe2+螯合能力計(jì)算公式

式中，A0為空白對(duì)照的吸光值；A1為樣品反應(yīng)后的吸光值。

1.2.5統(tǒng)計(jì)分析

2　結(jié)果與分析

2.1山杏、山丁子多酚對(duì)·OH的清除活性

·OH是生物系統(tǒng)內(nèi)活性最高的含氧自由基，它可以誘導(dǎo)鄰近的大分子如蛋白質(zhì)、脂類DNA等遭到嚴(yán)重破壞，引起老化和病變，所以清除·OH自由基是預(yù)防各種疾病的防御機(jī)制之一。如圖1所示，山杏多酚和山丁子多酚均有清除·OH自由基的能力，二者對(duì)·OH自由基的清除率都呈劑量依賴性，且各濃度下山丁子多酚的清除率均高于山杏多酚。在山丁子多酚體積為50 μL時(shí)，·OH自由基清除率可以達(dá)到69%。在相同劑量水平下，山杏多酚對(duì)·OH自由基的清除率為60%。

2.2山杏、山丁子多酚對(duì)DPPH的清除活性

DPPH自由基是一種穩(wěn)定的有機(jī)自由基，最大吸收波長為517 nm。由于其對(duì)低濃度的活性成分十分敏感，所以是應(yīng)用在測定抗氧化活性方面的常用手段。本研究對(duì)山杏多酚和山丁子多酚的DPPH自由基清除活性進(jìn)行了比較，研究發(fā)現(xiàn)，山杏和山丁子多酚都具有清除DPPH自由基的能力，且隨著多酚溶液體積的增加清除率均增大（圖2），清除能力排序：山丁子多酚＞山杏多酚。

圖3　山杏、山丁子多酚對(duì)·O2-的清除能力

2.4山杏、山丁子多酚對(duì)Fe2+的螯合能力

Fe是生物體必需元素，但過量時(shí)是有害的。游離鐵的毒性作用是其可通過Fenton反應(yīng)催化產(chǎn)生自由基。所以，螯合Fe2+也是測試抗氧化能力的常用指標(biāo)。如圖4所示，山杏和山丁子多酚對(duì)Fe2+有較強(qiáng)的螯合能力，在多酚溶液體積為5、10、15 μL時(shí)，山杏多酚與山丁子多酚的螯合能力數(shù)值較接近，且在多酚濃度為25 mg/mL時(shí)，2種物質(zhì)對(duì)Fe2+的螯合能力仍無差異。

圖4　山杏、山丁子多酚對(duì)Fe2+的螯合能力

3討　論

通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，2種多酚都具有一定的清除·OH自由基、DPPH自由基、·O2-自由基能力，并且都有能力螯合Fe2+離子。綜合比較不難看出，山丁子多酚的抗氧化活性略高于山杏多酚。

［1］Tai A，SawanoT，Yazama F，et al.Evaluation ofantioxidant activity of vanillin byusingmultiple antioxidant assays［J］.Biochimica et Biophysica Acta（BBA）-General Subjects，2011，1810（2）:170-177.

［2］任飛，杜宏濤，張繼文，等.柿子皮醇提物中多酚含量及其抗氧化活性［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，20（4）:144-147.

［3］Lau F C，Joseph J A，McDonald J E，et al.Attenuation ofiNOS and COX2by blueberry polyphenolsismediatedthroughthe suppression of NF-kappa B activation［J］.Journal of Functional Foods，2009，1（3）:274-283.

［4］Kumar G，Dange P，Kailaje V，et al.Polymeric black tea polyphenolsmodulatethelocalizationandactivityof 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-mediatedkinasesin mouse skin:Mechanisms of their anti-tumor-promoting ction［J］. Free Radical Biologyand Medicine，2012，53（6）:1358-1370.

［5］Park H S，Park K I，Lee D H，et al.Polyphenolic extract isolated from Korean Lonicera japonica Thunb.induce G2/M cell cycle arrest and apoptosis in HepG2 Cells:Involvements of PI3K/Akt and MAPKs［J］.Food and ChemicalToxicology，2012，50（7）:2407 -2416.

［6］王清吉，王友紹，何磊，等.茶多酚和銀杏葉有效成分的抗輻射作用研究［J］.核技術(shù)，2004，27（2）:148-150.

［7］王璐.山荊子多酚分離鑒定及對(duì)γ輻射誘導(dǎo)氧化損傷的防護(hù)作用［D］.哈爾濱:哈爾濱工業(yè)大學(xué)，2014.

［8］Hai ying Liu，Nongxue Qiu，Huihuang Ding，et al.Polyphenols contents and antioxidant capacity of 68 Chinese herbals suitable for medical or food uses［J］.Food Research International，2008，41（4）:363-370.

［9］Ren J，Zhao M，Shi J，et al.Purification and identification of antioxidant peptides from grass carp muscle hydrolysates by consecutive chromatography and electrospray ionization-inass spectrometry［J］.Food Chemistry，2008，108:727-736.

［10］Wu CH，Chen H M，Shiau CY.Free aminoacids and peptides as related to antioxidant properties in protein hydrolysates of mackerel（Scomber austriasicus）［J］.Food Research International，2003，36:949-957.

［11］Jeong J B，De Lumen B O，Jeong H J.Lunasin peptide purified from Solarium nigrum L.protects DNA from oxidative damage by suppressingthe generation ofhydroxyl radical via blockingfenton eaction［J］.Cancer letter，2010，293，58-64.

［12］Velika B，Kron I.Antioxidant properties of benzoic acid derivatives against Superoxide radical［J］.Free Radicals andAntioxidants，2012，2（4）:62-67.

［13］Er T K，Tsai S M，Wu S H，et al.Antioxidant status and superoxide anion radical generation in acute myeloid leukemia ［J］.Clinical Biochemistry，2007，40（13-14）:1015-1019.

［14］張苗.甘薯蛋白酶解肽的抗氧化及結(jié)腸癌活性研究［D］.北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2012.

第1作者簡介：付婷婷（1985-），女，助理研究員，研究方向：林產(chǎn)化學(xué)加工。

（責(zé)任編輯：潘啟英）

Antioxidant Activity of Polyphenols from Prunus armeniaca and Malus baccata

FUTingting
（Heilongjiang Forest By-Product and Speciality Research Institute，Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Nonwood Forest Product Development，Mudanjiang157011）

The aim of this work was to study antioxidant activity of polyphenols which from Prunus armeniaca and Malus baccata.The results showed that they had antioxidant activity and the two were in dependent dose.The polyphenol of Malus baccata was slightly higher than Prunus armeniac's.Thereby provided the data support for the use of polyphenols from Prunus armeniaca and Malus baccata.

Prunus armeniaca；Malus baccata；Polyphenol；Antioxidant activity

S662.2，S662.9

C

1001-9499（2016）04-0060-04

*黑龍江省森林工業(yè)總局青年基金項(xiàng)目（sgzjQ2014002）；黑龍江省林業(yè)科學(xué)院青年基金項(xiàng)目201417

么宏偉（1981-），男，副研究員，研究方向：林產(chǎn)化學(xué)加工。

2016-06-30