王紅霞，廉 博

(呼倫貝爾市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，內(nèi)蒙古海拉爾 021008)

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不同營養(yǎng)液配方對山葡萄幼苗生長的影響

王紅霞，廉 博

(呼倫貝爾市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，內(nèi)蒙古海拉爾 021008)

[目的] 研究山葡萄嫩莖段愈傷組織離體培養(yǎng)最佳配方。[方法]以山葡萄優(yōu)良母株新生枝條嫩梢為外植體，觀察山葡萄在IAA和NAA不同濃度下芽的分化、繼代與生根情況。[結(jié)果]在相同條件下，不同濃度IAA和NAA對山葡萄的芽分化、繼代與生根影響顯著。芽分化NAA濃度為0.05 mg/L的時候效果最好，愈傷組織中等，分化出的芽較多。繼代IAA濃度為 0.10 mg/L的時候效果最好，生長旺盛，繁殖倍數(shù)較高。生根NAA濃度為 0.10 mg/L的時候效果最好，根粗壯，生根率高。[結(jié)論]該研究結(jié)果可為山葡萄離體培養(yǎng)奠定基礎(chǔ)。

山葡萄；IAA；NAA；芽分化

山葡萄是葡萄科葡萄屬落葉藤本植物，其含有豐富的碳水化合物、蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)，生食可口，味酸甜，富含漿汁，是美味的山間野果[1]。山葡萄可作為葡萄酒釀造的原料，用其所釀的葡萄酒深紅艷麗，風味品質(zhì)甚佳。我國自20世紀50年代開始研究山葡萄人工馴化栽培并獲得成功。山葡萄苗木常規(guī)的繁殖方法有嫁接繁殖、壓條繁殖和扦插繁殖，但嫁接繁殖受接穗來源限制，壓條繁殖系數(shù)低，扦插繁殖不易生根[2]。筆者擬采用組織培養(yǎng)的手段來繁殖和培育山葡萄[3-10]，篩選出適合的培養(yǎng)基，以期為山葡萄進一步快繁和大規(guī)模工廠化繁殖提供有效途徑。

1　材料與方法

1.1材料以野生山葡萄為材料，取其優(yōu)良母株新生枝條嫩梢作為外植體材料。

1.2方法

1.2.1外植體消毒。于2014年5月18日在中國農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院組培實驗室對野生山葡萄優(yōu)良母株新生枝條嫩梢進行愈傷組織誘導(dǎo)試驗，先用清水洗去外植體表面的殘留，再浸泡1～2 h，裝到無菌瓶中，放到無菌工作臺上，用70%酒精浸泡15 s，無菌水沖洗2～3次，用0.1%HgCl2進行表面消毒8～10 min，無菌水沖洗4～5次，在無菌條件下剝?nèi)[片與幼葉，切取0.3～0.5 m長的莖尖，接種于培養(yǎng)瓶中。

1.2.2培養(yǎng)條件?；九囵B(yǎng)基為MS，加20 g/L蔗糖、720 g/L瓊脂，pH 5.6～5.8，培養(yǎng)溫度24 ℃，每日光照16 h，光強2 000 lx，濕度70%～80%。

1.3試驗設(shè)計

1.3.1不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。 該試驗設(shè)4個處理：I.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.010 mg/L +LH 100 mg/L；II.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.005 mg/L +LH 100 mg/L；III.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.020 mg/L +LH 100 mg/L；IV.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.050 mg/L +LH 100 mg/L，每個處理重復(fù)3次，每次重復(fù)20瓶，每瓶接6個外植體。

為了促進愈傷組織的形成和芽分化，可將接種于培養(yǎng)基I～IV上的外植體先放置于黑暗中處理48～60 h，然后置于2 000 lx光照下，經(jīng)35～40 d愈傷組織誘導(dǎo)出芽。

1.3.2繼代培養(yǎng)。該試驗設(shè)4個處理：V.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.10 mg/L +GA 30.2 mg/L；VI.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.05 mg/L +GA 30.2 mg/L；VII.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.20 mg/L +GA 30.2 mg/L；VIII.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.50 mg/L +GA 30.2 mg/L，每個處理重復(fù)3次，每次重復(fù)20瓶。將高5 cm以上的山葡萄試管苗切段(帶1～2個側(cè)芽)接種于繼代培養(yǎng)基V～VIII上進行繼代增殖。當芽分化較多時，會影響莖的伸長，成苗率會降低，此時宜先將叢生芽切下接種于繼代培養(yǎng)基上，使其成苗后再進行切段培養(yǎng)。

1.3.3生根培養(yǎng)。選擇NAA和IAA作為誘導(dǎo)生根的因素，該試驗設(shè)5個處理：IX.1/2 MS+NAA 0.10 mg/L；X.1/2 MS+NAA 0.20 mg/L；XI.1/2 MS+NAA 0.05 mg/L；XII.1/2 MS+IAA 0.10 mg/L；XIII.1/2 MS+IAA 0.05 mg/L，每個處理重復(fù)3次，每次重復(fù)20瓶。

在繼代培養(yǎng)中，切下莖段可接種于生根培養(yǎng)基IX～XIII上進行生根培養(yǎng)。

1.4調(diào)查指標及方法接種后，每隔5～8 d觀察并統(tǒng)計愈傷組織分化情況，生根數(shù)、生根率、根生長等指標。

2　結(jié)果與分析

2.1芽分化情況由表1可知，接種于培養(yǎng)基IV上的莖尖，愈傷組織中等，平均分化出芽5.0個；接種于培養(yǎng)基I上的莖尖，愈傷組織較大，平均分化出芽0.5個；接種于培養(yǎng)基III上的莖尖，愈傷組織過大，平均分化出芽1.5個；接種于培養(yǎng)基II上的外植體形成愈傷組織很小，外植體啟動困難，沒有分化出芽。

表1不同營養(yǎng)液配方對芽分化的影響

Table 1Effects of different nutrient solution formulas on the bud differentiation ofV.amurensis

培養(yǎng)基Medi-um芽分化情況Buddifferentiation愈傷組織情況CallusI++ 較大II- 無 III+ 過大IV++++中等

注：- 沒有生長；+生長緩慢；++生長較顯著；++++生長旺盛。

Note：-，+，++，and ++++ mean not growing，growing slowly，growing obviously，and growing luxuriantly respectively.

2.2莖段增殖從生長情況看，接種于培養(yǎng)基V上莖段或芽生長快，且同時生出粗壯根系，根與莖同時生長，苗形態(tài)正常，生長健壯，繁殖系數(shù)可達3.5～4.0；接種于培養(yǎng)基VII上的莖段或芽也長出較多根系，生長情況較好；接種于培養(yǎng)基VIII上的莖段或芽生長較差，繁殖系數(shù)較低。

表2不同營養(yǎng)液配方對莖段生長情況的影響

Table 2Effects of different nutrient solution formulas on the growth ofV.amurensis

培養(yǎng)基Medium生長情況Growthstate繁殖系數(shù)ReproductioncoefficientV++++3.5～4.0VI+ 無VII+++ 2.0～3.0VIII++ 1.0～2.0

注：- 沒有生長；+生長緩慢；++生長較顯著；++++生長旺盛。

Note：-，+，++，and ++++ mean not growing，growing slowly，growing obviously，and growing luxuriantly respectively.

2.3生根情況從生根情況看，以接種于培養(yǎng)基X上的莖段生根最多，但根細長，試管苗移栽時不易成活；接種于培養(yǎng)基XI、XII和XIII上的莖段生根數(shù)較少，根細弱；接種于培養(yǎng)基IX上的莖段生根數(shù)適中，根粗壯，生根率也高，該培養(yǎng)基為最佳配方，即莖段生根以1/2 MS+NAA 0.10 mg/L為宜。

表3不同營養(yǎng)液配方對生根情況的影響

Table 3Effects of different nutrient solution formulas on the root growth ofV.amurensis

培養(yǎng)基Medium生根數(shù)Numberofroots∥條生根率Rootingrate∥%生長情況GrowthstateIX3～7100粗壯X10以上85細長XI2～575細長或粗壯XII2～370細、短XIII1～245細、短

3　結(jié)論

用莖尖組織培養(yǎng)方法進行山葡萄快速繁殖，可保持品種優(yōu)良性狀，縮短推廣時間。在進行莖尖誘導(dǎo)時，6-BA單獨使用效果要好。在1/2 MS+6-BA l.0 mg/L+NAA 0.050 mg/L+LH 100 mg/L培養(yǎng)基中，愈傷組織中等，分化出的芽較多。為了提高莖尖成活率，可適當將莖尖切至0.5～1.0 mm，但莖尖切取過大，繁殖系數(shù)會降低。繼代培養(yǎng)以1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L+IAA 0.10 mg/L+GA 30.2 mg/L(肌醇用量為50 mg/L)為宜，此時生長旺盛，繁殖系數(shù)較高。生根培養(yǎng)以1/2 MS+NAA 0.10 mg/L為宜，此時根粗壯，生根率高。繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)同時進行，這樣可縮短試管苗培養(yǎng)時間，移栽易成活，繁殖系數(shù)一般很高。

[1] 高金輝，王玲，張厚良，等.山葡萄組織培養(yǎng)方法[J].東北林業(yè)大學學報，2007，35(7)：37-39.

[2] 王軍，宋潤剛.野生果樹栽培及加工技術(shù)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)技術(shù)出版社，2001：13-14.

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[4] 鞏振輝，申書興.植物組織培養(yǎng)[M].北京：化學工業(yè)出版社，2007：68-69.

[5] 崔鵬，高秀宇，李波，等.葡萄組織培養(yǎng)中愈傷組織的誘導(dǎo)[J].湖北農(nóng)業(yè)科學，2012，51(4)：827-830.

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[7] 顧沛雯，龔玉梅，關(guān)曉慶.葡萄莖尖培養(yǎng)及快速繁殖技術(shù)研究[J].中外葡萄與葡萄酒，2002(4)：16-18.

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Influences of Different Nutrient Solution Formulas on Seedling Growth ofVitisamurensisRupr.

WANG Hong-xia, LIAN Bo

(Hulunbeir Agricultural Technology Extension and Service Center, Hailar, Inner Mongolia 021008)

[Objective] To discuss the optimum formula for the in vitro culture of tender stem callus ofVitisamurensisRupr. [Method] Newborn branch tops of good maternal plants ofV.amurensiswere used as explants, and the bud differentiation, subculture and root growth ofV.amurensiswere analyzed under different concentrations of IAA and NAA. [Result] Under the same conditions, different concentrations of IAA and NAA had obvious effects on the bud differentiation, subculture and root growth ofV.amurensis. When NAA concentration was 0.05 mg/L, callus was moderate, and there were more buds. As IAA concentration was 0.10 mg/L, it grew well, and the breeding rate was high. When NAA concentration was 0.10 mg/L, its roots were thick, and the rooting rate was high. [Conclusion] The study can lay the foundation for the in vitro culture ofV.amurensis.

VitisamurensisRupr.; IAA; NAA; Bud differentiation

王紅霞(1981-)，女，內(nèi)蒙古烏蘭察布人，農(nóng)藝師，從事農(nóng)業(yè)推廣工作。

2016-05-09

S 663.1

A

0517-6611(2016)19-263-02