駱春華羅騫黃運(yùn)英

枳實(shí)-白芍藥對(duì)干預(yù)肝郁脾虛型IBS大鼠的配伍及藥效學(xué)研究*

駱春華①羅騫①黃運(yùn)英①

目的：研究枳實(shí)、白芍不同配比對(duì)肝郁脾虛型IBS大鼠腸道的影響，探討枳實(shí)-白芍藥對(duì)干預(yù)肝郁脾虛型IBS大鼠的配伍及藥效學(xué)特點(diǎn)。方法：選取48只大鼠，隨機(jī)平均分為8組，分別采用生理鹽水、0.025g/kg匹維溴銨溶液、不同比例枳實(shí)-白芍溶液灌胃6 g/kg，對(duì)各組大鼠的小腸推進(jìn)率、糞點(diǎn)數(shù)、體重進(jìn)行比較。結(jié)果：不同配比枳實(shí)-白芍對(duì)肝郁脾虛型IBS大鼠排便、體重均有影響。結(jié)論：枳實(shí)-白芍對(duì)肝郁脾虛型IBS大鼠具有干預(yù)作用。

枳實(shí)； 白芍； 肝郁脾虛； IBS； 配伍

First-author’s address：The Fifth Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510700，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.22.005

腸易激綜合征（IBS）是臨床常見胃腸道功能紊亂疾病，以腹痛、腹瀉和腹部不適為主要臨床改變。患者多存在大便性狀改變、次數(shù)增多表現(xiàn)，患者的癥狀隨排便減輕［1-2］。IBS具有病程長(zhǎng)、易反復(fù)特點(diǎn)，嚴(yán)重降低患者的生活質(zhì)量，也給患者帶來沉重的經(jīng)濟(jì)和心理負(fù)擔(dān)。目前西醫(yī)缺乏治療IBS的特效藥物，中醫(yī)臨床研究報(bào)道枳芍散治療IBS的優(yōu)勢(shì)明顯，中醫(yī)認(rèn)為IBS主要病機(jī)為肝郁脾虛，應(yīng)根據(jù)調(diào)和肝脾、疏肝健脾原則用藥［3-4］。因此，本文建立肝郁脾虛型IBS大鼠模型，使用枳實(shí)—白芍干預(yù)大鼠模型，分析枳實(shí)—白芍對(duì)該病的干預(yù)作用及其干預(yù)機(jī)制，并重點(diǎn)對(duì)藥物配伍進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1材料 選擇48只模型大鼠，結(jié)合肝郁脾虛IBS中醫(yī)病機(jī)特點(diǎn)，采用腸道灌注乙酸+夾尾激怒、限制活動(dòng)等方式制備肝郁脾虛IBS模型大鼠［5］。首先，使用乙醚麻醉并石蠟油潤(rùn)滑模型大鼠，將硅膠管經(jīng)肛門插入大鼠體內(nèi)，并與注射器相連。腸內(nèi)灌注1 mL乙酸（40 mL/L）后拔出硅膠管，使用1 mL PBS沖洗結(jié)腸，放回籠內(nèi)，大鼠蘇醒后自由活動(dòng)及進(jìn)食。灌腸2個(gè)月后束縛大鼠和夾尾刺激，再將大鼠放于特制透明筒束縛器內(nèi)。反復(fù)操作，使大鼠激怒并與其他大鼠廝打，全籠內(nèi)大鼠打斗，造模時(shí)間維持3周。

1.2 藥物制備 中藥組采用水煎藥制備，根據(jù)文獻(xiàn)［5］記錄的配比上下成倍浮動(dòng)，設(shè)計(jì)三個(gè)不同配比，分別為1∶1、1∶2、2∶1。稱取適量藥液后放于圓底燒瓶?jī)?nèi)，加入6倍蒸餾水?dāng)嚢柚练序v，持續(xù)30 min后及時(shí)過濾。將濾液放于干燥蒸發(fā)皿內(nèi)，水浴蒸干后放入烘箱內(nèi)恒重，獲得浸膏，計(jì)算煎出率。

1.3陽(yáng)性對(duì)照藥液制備 將匹維溴銨片碾碎成粉末狀，加入蒸餾水制成2.5 mg/mL藥液，參照人體用量的10倍給藥，10 mL/kg灌服。

1.2方法

1.2.1 給藥方法 將48只模型大鼠平均分為8組，分別為空白組、模型組、陽(yáng)性組及5個(gè)中藥組，每組各6只?？瞻捉M、模型組和陽(yáng)性組分別所使用生理鹽水、造模后使用生理鹽水、0.025 g/kg匹維溴銨溶液灌胃，其中3個(gè)中藥組分別用不同比例的枳實(shí)—白芍溶液灌胃，灌胃劑量6 g/（kg·d），1次/d，連續(xù)灌胃1周。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 （1）小腸推進(jìn)率處理：給藥結(jié)束1 h后，給予0.2 mL/只碳末溶液進(jìn)行灌胃，0.5 h后腹腔注射水合氯醛致死，打開腹腔分離腸系膜，剪取幽門至回盲部腸管，以幽門至碳末前沿距離作為碳末在腸內(nèi)推進(jìn)距離。拉直小腸，測(cè)量小腸長(zhǎng)度，根據(jù)幽門至碳末前沿的距離與幽門至回盲部全長(zhǎng)距離計(jì)算推進(jìn)率。（2）糞點(diǎn)數(shù)及體重增長(zhǎng)率測(cè)量：造模后將大鼠放回籠內(nèi)，籠底部放置清潔濾紙，觀察給藥24 h內(nèi)排便糞點(diǎn)數(shù)及形狀，測(cè)量連續(xù)給藥7 d后大鼠體重情況。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，藥理數(shù)據(jù)使用單因素方差分析，方差不齊使用Dunnett’s T3分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠小腸推進(jìn)率比較 模型組大鼠的小腸推進(jìn)率最高，且顯著高于空白組，單用枳實(shí)的效果最佳，單獨(dú)使用白芍最差。枳實(shí)-白芍不同配伍大鼠組間比較及與空白組、陽(yáng)性組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），且枳實(shí)-白芍作用與陽(yáng)性組相似，枳實(shí)-白芍1∶1組大鼠腸胃恢復(fù)情況更加接近空白組，表明給藥大鼠腸胃運(yùn)動(dòng)恢復(fù)正常，見表1。3.2 各組大鼠糞點(diǎn)數(shù)比較 模型組24 h內(nèi)糞點(diǎn)數(shù)增加明顯，顯著高于空白組及給藥組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明給藥組大鼠的糞點(diǎn)數(shù)量減少；枳實(shí)-白芍1：1組及枳實(shí)-白芍2∶1組的糞點(diǎn)數(shù)與空白組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），且其糞點(diǎn)數(shù)與陽(yáng)性組相似，見表2。

表1　各組大鼠小腸推進(jìn)率比較

表2　各組大鼠糞點(diǎn)數(shù)比較

3.3各組大鼠體重比較 除空白組大鼠外，造模前其余各組大鼠的體重比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；空白組顯著高于其他各組大鼠，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療后，給藥大鼠體重有所上升，枳實(shí)組大鼠體重增長(zhǎng)率最慢，顯著低于其他給藥組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；白芍組、枳實(shí)-白芍1∶1組、2∶1組及1∶2組之間大鼠體重比較差異不顯著，見表3。

3　討論

腸易激綜合征（IBS）發(fā)病是多種因素綜合作用的結(jié)果，西醫(yī)認(rèn)為IBS發(fā)病與內(nèi)臟感覺、腸動(dòng)力異常、腸黏膜屏障功能紊亂、飲食、精神狀態(tài)有關(guān)，精神狀態(tài)不佳是IBS發(fā)病的重要誘因，因而IBS也被視為功能性身心疾?。?-7］。雖然該病不威脅生命安全，但是IBS可嚴(yán)重降低患者的生活質(zhì)量，影響患者正常工作。IBS分為4個(gè)亞型，腹瀉型（IBS-D）為常見亞型，占患者總數(shù)的74%以上。文獻(xiàn)［8］將IBS-D定義為糊狀、水樣糞便超過25%，硬糞或球糞比例低于25%。目前西醫(yī)缺少治療特效藥物，主要依據(jù)止痛、止瀉、止攣原則對(duì)癥治療，并配合腸道菌群調(diào)整藥物或腸道黏膜保護(hù)藥物治療，近期療效較好，癥狀緩解效果顯著，但是遠(yuǎn)期療效不理想，并且毒副作用較多。根據(jù)IBS的臨床表現(xiàn)，其屬于中醫(yī)郁證、腹痛、便秘和腹瀉范疇?！吨嗅t(yī)病癥治法術(shù)語》將BIS歸為腸郁，認(rèn)為情志不暢引起腸道運(yùn)化失常為主要發(fā)病原因，腹痛、腹瀉和便秘為常見表現(xiàn)［9］。中醫(yī)從整體角度對(duì)IBS病因、病機(jī)和診治具有獨(dú)特的見解，并且中醫(yī)治療IBS的療效顯著，辨證治療可有效緩解患者的臨床癥狀。大量臨床研究也證實(shí)中醫(yī)辨證治療IBS的療效顯著，如黃連可降低的結(jié)腸4-HT釋放水平和CCK表達(dá)水平，痛瀉方通過調(diào)節(jié)免疫M(jìn)C細(xì)胞降低胃腸道敏感性，改善腹痛癥狀［10-12］。

表3　各組大鼠體重比較

中醫(yī)診斷本病主要證型為肝脾不和、脾胃虛弱、脾胃陰虛和脾腎陽(yáng)虛型，肝脾不和居多［13］。脾居中焦，通過肝氣疏泄，氣血通達(dá)全身。肝脾相互協(xié)調(diào)，相互為用，并相互影響，因而應(yīng)以疏肝理氣、調(diào)和肝脾為治療原則，恢復(fù)肝脾功能。白芍具有柔肝緩肝、理氣功效，現(xiàn)代藥理學(xué)研究也證實(shí)白芍具有抑制腸道平滑肌痙攣、調(diào)節(jié)植物神經(jīng)功能、鎮(zhèn)痛等功效，可有效改善IBS癥狀。氣機(jī)不暢是IBS的重要病因，情志怫郁、疏泄無權(quán)、氣機(jī)郁滯者應(yīng)堅(jiān)持理氣解郁原則治療。疏肝理氣可有效改善情志及痛覺，治療用藥重在理氣［14］。枳實(shí)為中醫(yī)常用理氣藥物，虛證或?qū)嵶C腹痛腹脹均可使用枳實(shí)治療。即白芍養(yǎng)肝柔肝，枳實(shí)破氣，一柔一剛，剛?cè)嵯酀?jì)，兩者一補(bǔ)一散，行而不伐，斂而不淫，護(hù)肝體助肝用，最宜調(diào)暢氣機(jī)［15］。

根據(jù)枳實(shí)白芍藥對(duì)治療肝郁脾虛型的功效主治，通過止瀉、胃腸動(dòng)力、鎮(zhèn)痛、抗抑郁等藥效試驗(yàn)，從胃腸道作用、鎮(zhèn)痛作用及行為學(xué)作用等相關(guān)指標(biāo)和藥理效應(yīng)相互關(guān)系分析藥對(duì)配伍對(duì)模型大鼠的配伍規(guī)律［16］。國(guó)外研究根據(jù)IBS患者的腹瀉及便秘表現(xiàn)，從腸道動(dòng)力異常角度分析IBS發(fā)病機(jī)制，認(rèn)為IBS患者的食管、腸胃的動(dòng)力學(xué)異常，部分患者的膽囊也存在動(dòng)力學(xué)異常［17-18］。本研究顯示，模型組大鼠的小腸推進(jìn)率最高，且顯著高于空白組。不同配伍組大鼠，組間推進(jìn)率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但是根據(jù)腸推進(jìn)率變化，枳實(shí)-白芍1∶1組大鼠腸胃恢復(fù)情況更加接近空白組。枳實(shí)、白芍及配伍用藥均對(duì)腸胃亢進(jìn)產(chǎn)生效果，可抑制腸運(yùn)動(dòng)，其中單用枳實(shí)的效果最佳，單獨(dú)使用白芍最差，此外，枳實(shí)-白芍不同配伍組大鼠與陽(yáng)性組比較差異不顯著，表明給藥大鼠腸胃運(yùn)動(dòng)恢復(fù)正常，且枳實(shí)-白芍作用與陽(yáng)性組相似。模型組24 h內(nèi)糞點(diǎn)數(shù)增加明顯，顯著高于空白組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），模型組的糞點(diǎn)呈不規(guī)則稀狀，形成慢性腹瀉。給藥組大鼠的糞點(diǎn)數(shù)顯著少于模型組，表明給藥組大鼠的糞點(diǎn)數(shù)量減少。中藥組與空白組比較，枳實(shí)-白芍1∶1組2∶1組的糞點(diǎn)數(shù)與空白組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），且糞點(diǎn)數(shù)與陽(yáng)性組相似，表明枳實(shí)-白芍1∶1和2∶1組大鼠的排便次數(shù)減少，可有效改善大鼠的排便狀況，符合既往研究報(bào)道結(jié)果［19-20］。除空白組大鼠外，造模前其余各組大鼠的體重比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），空白組顯著高于其他各組大鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，枳實(shí)-白芍對(duì)肝郁脾虛型IBS大鼠具有干預(yù)作用。

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Pharmacodynamics of Fructus Aurantii Immaturus-Radix Paeoniae Alba Herb-Pair in IBS Rats with Stagnation of Liver and Spleen Deficiency

LUO Chun-hua，LUO Qian，HUANG Yun-ying.//Medical Innovation of China，2016，13（22）：021-024

Objective：To explore the changes in the chemical composition of Fructus Aurantii Immaturus-Radix Paeoniae Alba herb-pair， the dose-effect relationship， the change of the pharmacological effects and metabolic mechanisms and compatibility discipline in vivo.Method：48 SD rats were randomly divided into 8 groups，they were respectively given normal saline，0.025 g/kg Pinaverium Bromide solution，irrigation stomach to IBS rats with different compatibility ratio of 6 g/kg，the small intestinal propulsion rates， the amount of defecation in 24 h， weight and intestinal sensitivity were observed as pharmacologic index.Result：It was found that Fructus Aurantii Immaturus-Radix Paeoniae Alba herb-pairs of different compatibility ratio significantly decreased defecation number and increased the growth rate of body weight.Conclusion： Fructus Aurantii Immaturus- Radix Paeoniae Alba has intervention effect on stagnation of liver and spleen deficiency IBS rats.

Fructus Aurantii Immaturus； Radix Paeoniae Alba； Stagnation of liver and spleen deficiency； IBS； Compatibility

廣東省中醫(yī)藥局建設(shè)中醫(yī)藥強(qiáng)省科研項(xiàng)目（20151282）
①?gòu)V州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院 廣東 廣州 510700

駱春華