鄭金鳳 王景紅 宗志勇 路廣義

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基于HPLC技術分析白芍根莖與主根部分的主成分含量差異

鄭金鳳 王景紅 宗志勇 路廣義

目的 采用高效液相色譜法檢測亳芍不同的樣品處理方法下主根和根莖部分芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量。方法 采用高效液相色譜法，色譜條件：C18柱（phenomenex公司，250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（25：75）；檢測波長為230 nm；柱溫：30℃；流速為1.0 mL/min。結果 經(jīng)過煮制后的白芍去皮主根或根莖所含芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的總含量低于未煮制；白芍的主根和根莖部分去皮后芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷總含量高于未去皮的主根和根莖；無論是否煮制，是否去皮，白芍根莖中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量均高于主根。結論 白芍根莖有作為藥用部位的基礎。

白芍根莖； 芍藥苷； 芍藥內(nèi)酯苷； 高效液相色譜法

白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。采挖后，洗凈，除去頭尾和細根，置沸水中煮后除去外皮或去皮后再煮，曬干，具有養(yǎng)血調經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽的作用［1］。白芍主要含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷等單萜類成分，主產(chǎn)于安徽亳州、浙江杭州、四川中江等地。根莖在白芍的加工過程中，屬于非藥用部位，被去除，但目前市場收購者眾多，前期實驗也表明同株白芍根莖的芍藥苷含量高于主根。為探討白芍根莖與主根之間的差異，是否可作為藥材使用，本文從有效成分含量角度來探討白芍根莖和主根之間的差異。

1 儀器與材料

安捷倫1200B型高效液相色譜儀（G1312B型二元泵，G1315C型DAD檢測器，ChemStation化學工作站）；電子天平：BP211D（Sautoris，德國）d=0.1 mg/0.01 mg，max=210 g/80 g；超聲波清洗器：KQ5200DB型，昆山市儀器有限公司。

乙腈（迪馬公司，色譜純）、水為重蒸水，磷酸等其他試劑均為分析純。試藥：芍藥苷對照品（批號：110736-201337）購于中國藥品生物制品檢定所；芍藥內(nèi)酯苷對照品（P/N：ABF-378105）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：C18柱（phenomenex公司，250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（25∶75）；檢測波長為230 nm；柱溫：30℃；流速為1.0 mL/min。

2.2 藥材及加工處理方法

取同一種植基地3年生亳芍30株，分為3組，各10株。洗凈，去除雜質、芽孢、須根，保留主根和根莖。（1）將主根和根莖去除外皮，分別煮制15分鐘，曬干。（2）將主根和根莖分別煮制15分鐘，曬干，得白芍主根、根莖。（3）將主根和根莖去除外皮，直接曬干，得白芍去皮主根、根莖。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷對照品適量，加稀乙醇分別制成每1 mL含芍藥苷83.2 μg和芍藥內(nèi)酯苷34.4 μg的混合對照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備

2.4.1 提取溶劑的選擇 取白芍主根粉末0.1 g，共三份，置50 mL量瓶中，分別加入稀乙醇、95%乙醇、甲醇35 mL，超聲處理30分鐘，放冷，再分別加稀乙醇、95%乙醇、甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。結果表明：稀乙醇提取的芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷含量最高，故選擇稀乙醇為提取溶媒。具體見表1。

表1 不同提取溶劑的比較

2.4.2 提取方法的選擇 取白芍主根粉末0.1 g，共兩份，置50 mL量瓶中，各加稀乙醇35 mL，分別進行浸漬處理和超聲處理30分鐘，放冷，分別加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。結果表明：超聲提取比浸漬提取含量略高，故選擇超聲提取方法。具體見表2。

表2 不同提取方法的比較

2.4.3 提取時間的選擇 取白芍主根粉末0.1 g，共三份，置50 mL量瓶中，各加稀乙醇35 mL，分別超聲處理15分鐘、30分鐘、45分鐘，放冷，再加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。結果表明：超聲30分鐘即可提取完全，故選擇提取時間為30分鐘。具體見表3。

表3 不同提取時間的比較

2.5 方法學考察

2.5.1 專屬性試驗 按2.4項下供試品制備方法制備陰性對照溶液和供試品溶液。吸取陰性對照溶液和供試品溶液兩種溶液及芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷混合對照品溶液各10 μL注入高效液相色譜儀。結果陰性對照色譜圖中無峰無干擾。見圖1。

2.5.2 線性關系考察 精密吸取芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷混合對照品溶液2、6、10、14、20 μL進樣，測定峰面積，以進樣量（μg）為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。得回歸方程，芍藥苷：Y=1042X -2.129，R2=1；芍藥內(nèi)酯苷：Y=912.8X+6.2729，R2=0.9999。結果表明芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷分別在0.1664～1.664 μg，0.0688～0.688 μg范圍內(nèi)線性關系良好。

圖1 對照品和供試品溶液HPLC圖

2.5.3 精密度試驗 分別精密吸取芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷混合對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，測定各峰面積。結果：芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的RSD分別為0.23%、0.09%，精密度良好。

2.5.4 重復性試驗 取同一批樣品6份，精密稱定，按2.4項下供試品溶液制備方法制成供試品溶液，分別測定芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷峰面積，計算含量，計算RSD。結果：芍藥苷的平均含量為1.25%，RSD為1.05%；芍藥內(nèi)酯苷的平均含量為3.42%，RSD為1.79%。

2.5.5 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、4、8、16、24小時進樣10 μL，測定供試品溶液的峰面積，計算RSD。結果：芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的RSD分別為0.33%、0.11%，二者穩(wěn)定性良好。

2.5.6 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品約0.05 g，共6份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入各對照品適量，按照2.4項下供試品制備方法制備加樣回收供試品溶液，精密吸取10 μL注入液相色譜儀，計算加樣回收率。結果：芍藥內(nèi)酯苷平均回收率為97.02%，RSD為1.93%；芍藥苷平均回收率為97.61%，RSD為1.46%，加樣回收率良好。

2.6 樣品含量測定

按2.2項下藥材及加工處理方法處理藥材，分別取3組樣品粉末0.1 g，精密稱定，按照2.4項下供試品制備方法操作，10個批次，每個批次平行2份，測定白芍主根和根莖部分中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量。結果：經(jīng)過煮制后的白芍去皮主根或根莖芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷總含量低于未煮制。無論是否煮制，白芍根莖中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量均高于主根。具體見表4。

表4 白芍樣品（是否煮制）主成分的含量測定（n=10）

白芍的主根和根莖部分去皮后芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷總含量高于未去皮的方法。其中芍藥苷的含量去皮的方法高于未去皮，而芍藥內(nèi)酯苷的含量則低于未去皮的方法，說明在皮中可能芍藥內(nèi)酯苷的含量較高。無論是否去皮，白芍根莖中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量均高于主根。具體見表5。

表5 白芍樣品（是否去皮）主成分含量測定（n=10）

3 討論

本文對白芍中主要成分芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的色譜方法進行優(yōu)化，對色譜柱型號、流動相的選擇、流速、柱溫等進行篩選，最終建立了含量測定方法，此方法所測成分色譜峰與其他成分分離良好。實驗結果顯示：白芍主根或根莖經(jīng)過煮制后的芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷低于未煮制的總含量；白芍的主根和根莖部分去皮后芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷總含量高于未去皮相同部位；無論是否煮制，是否去皮白芍根莖中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量均高于主根，與相關文獻報道一致。吳雄壯等［2］實驗結果顯示：相同生長年限的白芍其根莖部位的芍藥苷含量比主根部位明顯偏高，不同生長年限的白芍根莖部位的芍藥苷含量相差不大。周學剛等［3-4］實驗結果顯示：白芍地下各部分芍藥苷含量差異明顯，均呈現(xiàn)根莖＞須根＞主根。《中華人民共和國藥典》（一部）規(guī)定白芍藥用部位為根，加工方法為置沸水中煮后除去外皮或去皮后再煮，曬干。但從本實驗不同藥用部位的白芍主要成分芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷含量可以看出，采集部位建議保留根莖。實驗僅以亳芍為樣本，未對不同產(chǎn)地的白芍加以比較，且僅對主要成分芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷進行測定，需進一步研究白芍根莖和主根HPLC指紋圖譜之間的成分差異。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：105.

［2］ 吳雄壯，王美芳，楊思沅，等.不同部位和不同生長年限白芍中的芍藥苷含量測定［J］.中國現(xiàn)代應用藥學雜志，2006，23（4）：291-293.

［3］ 周學剛，張麗萍，王艷芳，等.煮制對白芍中芍藥苷含量的影響［J］.醫(yī)藥導報，2011，30（1）：82-85.

［4］ 周學剛，陳淑欣，魏東華，等.不同種質和不同部位白芍原植物中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量測定［J］.醫(yī)藥導報，2011，30 （11）：1477-1480.

（本文編輯：董歷華）

Determination of paeoniflorin and albiflorin in taproot and rhizome of Paeonia lactiflora Pall.

ZHENG Jin-feng，WANG Jing-hong，ZONG Zhi-yong，et al. Wangjing Hospital of China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100102，China

LU Guang-yi，E-mail：lulutong200504@163.com

Objective To determine the content of paeoniflorin and albiflorin in the different sample treatment of Paeonia lactiflora Pall..Methods The HPLC method was used to detected，the chromatographic condition was RP-C18（4 mm×250 mm，5 μm）column with HCN-water（25∶75）as mobile phase，flow velocity was 1.0 mL/min，with the detection wavelength was 230 nm，column temperature was 30℃.Results The content of paeoniflorin and albiflorin in taproot and rhizome of Paeonia lactiflora Pall. was increased after peeled.Whether boiled or peeled，the content of paeoniflorin and albiflorin in rhizome was higher than taproot of Paeonia lactiflora Pall..Conclusion Rhizome of Paeonia lactiflora Pall.has the potential to use as medicinal parts，it could be exploited and used in further.

Rhizome of Paeonia lactiflora Pall.； Paeoniflorin； Albiflorin； HPLC

R284

A doi：10.3969/j.issn.1674-1749.2016.08.006

中國中醫(yī)科學院望京醫(yī)院院級科研課題（WJYY2014-YY-052）

100102 北京，中國中醫(yī)科學院望京醫(yī)院藥學部

鄭金鳳（1987-），女，碩士，藥師。研究方向：臨床藥學。E-mail：jinfeng317@126.com

路廣義（1959-），本科，副主任藥師。研究方向：中藥調劑與研究。E-mail：lulutong200504@163.com

（2016-04-28）