吳成，程剛，趙志強，王蕾（.山東省農業(yè)環(huán)境保護和農村能源總站，濟南 5000； .濟南市歷城區(qū)綜合檢驗檢測中心，濟南 5000）

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液相色譜-串聯(lián)質譜法測定蘋果中水胺硫磷

吳成1，程剛2，趙志強1，王蕾1
（1.山東省農業(yè)環(huán)境保護和農村能源總站，濟南 250100； 2.濟南市歷城區(qū)綜合檢驗檢測中心，濟南 250100）

建立蘋果中水胺硫磷殘留的液相色譜-串聯(lián)質譜檢測方法。樣品以乙腈提取，采用電噴霧正離子源（ESI+）和多重反應監(jiān)測（MRM）模式測定，基質匹配標準曲線定量。結果表明：蘋果基質中，水胺硫磷色譜峰面積響應值與其質量濃度呈良好線性關系（r2=0.999），方法的線性范圍為0.3～100 μg/L，檢出限為0.15 μg/L，定量限為0.5 μg/L。在5，50，100 μg/kg添加水平下，水胺硫磷回收率為77.3%～95.2%，測定結果的相對標準偏差為5.7%～8.9%（n=6）。方法精密度和準確度滿足殘留限量監(jiān)測要求。

液相色譜-串聯(lián)質譜法；水胺硫磷；蘋果

水胺硫磷是硫代磷酰胺類殺蟲殺螨劑［1-2］。GB 2763-2014 《食品安全國家標準食品中農藥最大殘留限量》規(guī)定蘋果中水胺硫磷最大殘留限量為0.01 mg/kg［3］，推薦的檢測方法GB/T 5009.20-2003 《食品中有機磷農藥殘留量的測定》為氣相色譜法，方法定量限為0.005 mg/kg［4］，符合GB 2763-2014殘留限量監(jiān)測要求，但方法干擾嚴重，在農藥多殘留分析中應用困難；GB/T 19648-2006 《水果和蔬菜中500種農藥及相關化學品殘留的測定 氣相色譜-質譜法》抗干擾能力強，可檢測蘋果中水胺硫磷，但方法的檢出限僅為0.012 5 mg/kg［5］，將樣品濃縮后方法定量限才能滿足GB 2763-2014殘留限量監(jiān)測要求，而樣品濃縮不僅費時費力，還會造成分析目標物的損失和基質干擾物的加重［6 ］。近年來出現(xiàn)了抗干擾能力強和靈敏度高的氣相色譜-串聯(lián)質譜法［7-10］和液相色譜-串聯(lián)質譜法（LC-MS/MS）［11-15］。蘋果是水胺硫磷用藥殘留問題較多的水果，筆者用LC-MS/MS開展蘋果中水胺硫磷殘留檢測方法的研究，所建方法靈敏度、準確度和精密度均滿足分析要求。

1　實驗部分

1.1主要儀器與試劑

液相色譜-串聯(lián)質譜儀：LCMS-8040型，配電噴霧離子源（ESI），日本Shimadzu公司；

離心機：LDZ5-2型，北京京立離心機公司；

食品加工機：Philips k600型，荷蘭Philips公司；

均質器：IKA T18型，德國IKA公司；

天平：JY2001型，感量0.1 g，上海精密儀器公司；

水胺硫磷標準溶液：1 000 mg/L ，農業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所；

乙腈、甲醇：色譜純，德國Merck公司；

甲酸、乙酸銨、氯化鈉：分析純，上?；瘜W試劑有限公司；

蘋果：市售；

實驗用水為超純水（電阻率為18.2 MΩ·cm）。

1.2標準溶液配制

用甲醇稀釋1 000 mg/L水胺硫磷標準溶液制成100 mg/L單標準儲備液，置于-20.0℃冰箱中保存，使用時用甲醇-水溶液（1+1）稀釋至所需濃度。

1.3儀器工作條件

1.3.1液相色譜條件

色譜柱：Waters symmetry C18柱（150 mm×3.9 mm，5 μm，美國Waters公司）；柱溫：40℃；流動相：甲醇-0.1%甲酸水溶液（含5 mmol/L乙酸銨）（體積比為75∶25），流量為0.4 mL/min；等度洗脫；進樣體積：1 μL；信號采集時長：10.0 min。

1.3.2質譜條件

電噴霧正離子源（ESI+）；接口電壓：4.5 kV；霧化氣：氮氣，流量為3.0 L/min；干燥氣：氮氣，流量為15.0 L/min；碰撞氣：氬氣；脫溶劑管溫度：250℃；加熱模塊溫度：400℃；掃描模式：多反應監(jiān)測（MRM）；駐留時間：20 ms；延遲時間：3 ms；各監(jiān)測離子對的質譜參數(shù)見表1。

表1　LC-MS/MS 測定水胺硫磷的監(jiān)測離子對

1.4樣品前處理

按GB/T 8855-2008 《新鮮水果和蔬菜取樣方法》抽取蘋果樣品，取可食部分［16］，縮分、切碎、混勻，放入食品加工機粉碎，制成待測樣，于-20.0℃冰箱中保存。稱取樣品15.0 g于50 mL具塞離心管，加入30.0 mL乙腈，用均質器以12 000 r/min均質2 min，加入5.0 g氯化鈉，劇烈震搖2 min，以5 000 r/min離心5 min，取上清液10.0 mL于100 mL燒杯中，于60℃水浴氮吹至近干，用甲醇-水溶液（1+1）轉移定容至2.0 mL，過0.22 μm有機濾膜，按儀器工作條件進行測定。

2　結果與討論

2.1提取溶劑的選擇

乙腈和丙酮是蔬菜水果農殘分析的常用提取溶劑，蘋果含水量高，丙酮與水互溶，除去水分困難；乙腈與水部分互溶，加入氯化鈉后，鹽析、分層和除雜效果明顯，因此本實驗選擇乙腈作為蘋果中水胺硫磷殘留檢測的提取溶劑。

2.2質譜條件的優(yōu)化

水胺硫磷相對分子質量為289，采用ESI+進行母離子掃描，掃描圖見圖1。圖1中，328信號對應加鉀峰離子（［M+K］+），312對應加鈉峰離子（［M+Na］+），307對應加銨峰離子（［M+NH4］+），290對應加氫峰離子（［M+H］+）。290，307，312信號強度比約為3∶4∶10，分別作母離子，利用島津LCMS-8040 Optimizer軟件進行子離子、四極桿預桿偏置電壓（Q1和Q3）和碰撞池電壓（CE）等參數(shù)優(yōu)化，優(yōu)化結果見表1。用優(yōu)化的色譜質譜條件，在MRM模式下，進0.1 mg/L水胺硫磷溶液1.0 μL，得監(jiān)測離子對提取離子流圖（ETC）見圖2。由圖2可見，290，307和312分別作母離子，相應子離子對的信號強度，307的遠高于290和312的，290的略高于312的?？梢?，與290和312相比，用307作母離子優(yōu)化選擇的監(jiān)測離子對檢測水胺硫磷時靈敏度更高。計算定性參考離子與定量離子信號強度比（相對離子強度，以%計），依據(jù)歐盟2002/657/EC 文件［17］規(guī)定的質譜技術中相對離子強度的最大允許限度范圍，結合樣品色譜峰保留時間和扣背景質譜圖，可確證樣品中水胺硫磷的存在。

圖2　水胺硫磷監(jiān)測離子對提取離子流圖（ETC）

2.3凈化條件的選擇

蘋果乙腈提取液色素含量低，基質干擾少，若用傳統(tǒng)固相萃取柱凈化，效率低，操作繁瑣。本實驗樣品前處理采取鹽析、乙腈提取、離心和過有機濾膜，能有效去除樣品中色素、糖類和脂類等。LC-MS/MS抗基質干擾能力強，清洗方便。水胺硫磷為弱極性化合物，樣品基質對其電噴霧離子化影響小。

2.4方法的特異性

對于水胺硫磷的LC-MS/MS檢測，選取的監(jiān)測離子對（母離子307，子離子231，273）信號響應值高，特異性強，輔之色譜分離，基質干擾減至最低，可忽略不計。

2.5工作曲線方程及檢出限、定量限

用蘋果空白基質液將水胺硫磷標準儲備液配制成0.1～100 μg/L系列標準工作溶液，在優(yōu)化條件下測定水胺硫磷。以色譜峰面積（y）對水胺硫磷標準工作溶液的質量濃度（x，μg/L）進行線性回歸，分別以3倍和10倍信噪比（S/N）計算方法檢出限（LOD）和定量限（LOQ），方法的線性范圍、線性方程、相關系數(shù)、檢出限和定量限見表2。由表2可知，建立的水胺硫磷檢測方法的色譜峰面積響應值與水胺硫磷標準工作溶液的質量濃度呈良好線性關系，檢出限和定量限分別為0.15 μg/L和0.5 μg/L。方法檢測靈敏度符合GB 2763-2014 對蘋果水胺硫磷殘留檢測方法的要求。

表2　線性范圍、線性方程、相關系數(shù)、檢出限及定量限

2.6回收試驗和精密度試驗

在蘋果空白樣品中分別添加水胺硫磷5，50，100 μg/kg 3個濃度水平，進行加標回收試驗，用蘋果空白基質配制上機標準溶液，外標法定量，每個水平重復測定6 次，平均回收率和相對標準偏差見表3。由表3可知，蘋果中水胺硫磷3水平添加平均回收率為77.3%～95.2%，測定結果的相對標準偏差為5.7%～8.9%。建立的水胺硫磷檢測方法準確度和精密度均符合食品中農藥殘留分析要求［18］。

表3　加標回收及精密度試驗結果

3　結語

以母離子307，子離子231，273為監(jiān)測離子對，以乙腈作提取劑，經(jīng)液相色譜-串聯(lián)質譜法分析，建立了蘋果中水胺硫磷殘留的快速檢測方法，方法簡單、快速，靈敏度高，確證性和實用性強，可作為蘋果中水胺硫磷殘留的確證定性和定量檢測。

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Determination of the Isocarbophos Residues in Apple by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

Wu Cheng1， Cheng Gang2， Zhao Zhiqiang1， Wang Lei1
（1. Shandong Station of Agro-environment Protection and Rural Energy， Jinan 250100， China；2. Comprehensive Inspection and Testing Center of Jinan Licheng District， Jinan 250100， China）

A new method was established for the determination of isocarbophos residues in apple by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The test sample was extracted with acetonitrile， electrospray positive ion source（ESI+）and multiple reaction monitoring mode （MRM） and matrix-matched external standard method were applied. The calibration curve showed good linearity with the correlation coefficient of 0.999， the linear range was 0.3-100 μg/L， the detection limit was 0.15 μg/L， and the quantification limit was 0.5 μg/L. With addition of 5， 50， 100 μg/kg， the recoveries were 77.3%-95.2%， and the relative standard deviation was 5.7%-8.9%（n=6）. The precision and accuracy of this method can meet the requirement of the monitoring of residue limit of isocarbophos.

liquid chromatography-tandem mass spectrometry； isocarbophos； apple

O657.63

A

1008-6145（2016）04-0078-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.04.021

聯(lián)系人：吳成；E-mail: wucheng7745@sina.com

2016-04-17