樊海平，林　煜，鐘全福，鄭　磊，秦志清

(福建省淡水水產(chǎn)研究所　350002)

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中草藥對(duì)刺激隱核蟲幼蟲的殺滅效果

樊海平，林煜，鐘全福，鄭磊，秦志清

(福建省淡水水產(chǎn)研究所350002)

選擇幾種具有殺蟲功效的中草藥或中草藥提取物開展對(duì)刺激隱核蟲幼蟲的防治效果試驗(yàn)，結(jié)果表明：苦參、鶴芽草、鴉膽子、蓽澄茄、使君子、苦楝皮濃度25～800 mg/L作用4 h內(nèi)均無殺蟲效果。雙氫青蒿素濃度200 mg/L、400 mg/L和800 mg/L 3個(gè)處理的殺蟲效果相當(dāng)，作用 3 h內(nèi)無殺蟲效果，作用 3 h以上死亡率超過50%?？嗥ぬ偎貪舛?00 mg/L和400 mg/L 2個(gè)處理效果相當(dāng)，作用10 min開始出現(xiàn)部分幼蟲死亡，作用4 h的死亡率為100%； 濃度800 mg/L作用10 min開始出現(xiàn)部分幼蟲死亡，作用 2 h死亡率100%。貫眾濃度40 mg/L以上的各處理均表現(xiàn)出一定的殺蟲效果，作用10 min死亡率大于50%，作用2 h各處理死亡率均為100%，其中濃度200 mg/L作用1 h的死亡率達(dá)100%，濃度400 mg/L和800 mg/L 2個(gè)處理作用 10 min 的死亡率達(dá)100%。說明：貫眾殺蟲效果最佳，其次為苦皮藤素，貫眾和苦皮藤素具有針對(duì)性藥用開發(fā)價(jià)值。

中草藥；刺激隱核蟲；幼蟲；殺蟲效果

刺激隱核蟲是對(duì)海水養(yǎng)殖魚類危害最大的寄生蟲之一，對(duì)宿主的種類和年齡沒有嚴(yán)格的選擇性，感染石斑魚、大黃魚和卵形鯧鲹后造成的死亡率分別可達(dá)50%、75%和100%[1-2]。刺激隱核蟲寄生在魚類的體表和鰓絲，生活史一般要經(jīng)歷滋養(yǎng)體、胞囊前體、胞囊和幼體4個(gè)時(shí)期，無中間宿主[3]。幼蟲遇到合適的宿主后營寄生生活，發(fā)育成滋養(yǎng)體。用化學(xué)藥物如硫酸銅、乙酸、硫酸亞鐵、鹽酸奎寧、苯扎氯銨、苯氧乙醇、三氯異氰尿酸、甲醛、吖啶黃等浸浴病魚有一定的治療效果[4-9]，但所帶來的環(huán)境污染和水產(chǎn)品質(zhì)量安全等問題不容忽視。因此，尋找安全有效、環(huán)境友好、易于獲得的殺蟲藥物對(duì)防控刺激隱核蟲病具有重要的實(shí)踐意義。

本研究選擇幾種具有殺蟲功效的中草藥或中草藥提取物開展對(duì)刺激隱核蟲幼蟲的防治效果試驗(yàn)，并進(jìn)一步對(duì)幼蟲殺滅效果良好的貫眾進(jìn)行臨床滋養(yǎng)體殺滅治療試驗(yàn)?，F(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下，以期為刺激隱核蟲的防治和藥物選擇提供參考。

1　材料與方法

1.1供試材料

1.1.1藥物中草藥貫眾、苦參、鶴草芽、鴉膽子、蓽澄茄、使君子和苦楝皮購自市場(chǎng)中草藥店，粉碎至100目左右細(xì)度；苦皮藤素(純度6%)購自陜西天之潤生物科技有限公司；雙氫青蒿素(純度98%)購自西安昊軒生物科技有限公司。

1.1.2刺激隱核蟲幼蟲收集從大黃魚體表和鰓脫落于玻璃鋼桶底的刺激隱核蟲包囊，放入裝有海水的玻璃燒杯內(nèi)，水浴鍋25～27℃、充氣孵化40 h，觀察到幼蟲孵出時(shí)換入新鮮海水再孵化2 h，倒出含幼蟲海水計(jì)數(shù)后調(diào)整密度。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1試驗(yàn)藥物制備貫眾、苦參、鶴草芽、鴉膽子、蓽澄茄、使君子和苦楝皮原料經(jīng)粉碎后分別與蒸餾水在燒杯中按1∶10比例混合，浸泡20 min后，煮開30 min，80目篩絹過濾取汁，再用蒸餾水調(diào)整容積至原體積即為母液(藥物濃度為10%)，冰箱冷藏5 d內(nèi)使用；苦皮藤素與二甲基亞砜按1∶6溶解制成母液；雙氫青蒿素與無水乙醇按1∶20溶解制成母液。

1.2.2刺激隱核蟲幼蟲密度計(jì)算及調(diào)整取100 μL混勻的含幼蟲海水，用等量10%福爾馬林溶液固定，搖勻后取10μL于顯微鏡下計(jì)數(shù)，重復(fù)5次，平均值即為刺激隱核蟲幼蟲密度。用清潔海水將幼蟲密度調(diào)整至400個(gè)/mL左右用于試驗(yàn)。

1.2.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)將1.2.1制備的試驗(yàn)藥物分別用海水稀釋成濃度分別為50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L、800 mg/L和1600 mg/L的工作藥液，各取50 μL工作藥液加至96孔細(xì)胞板內(nèi)，加入調(diào)整密度后(400個(gè)/mL左右)的含幼蟲海水50 μL，試驗(yàn)載藥終濃度分別為25 mg/L、50 mg/L 100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L和800 mg/L；對(duì)照組用50 μL無藥物海水加等量幼蟲海水。將96孔板放入25℃培養(yǎng)箱內(nèi)，分別在10 min、30 min、1 h、2 h、3 h、4 h時(shí)，將培養(yǎng)板于倒置顯微鏡下觀察刺激隱核蟲幼蟲的死亡情況。以幼蟲沉底、纖毛不擺動(dòng)作為死亡的判斷標(biāo)準(zhǔn)，記錄：100%死亡(+++)、大于50%死亡(++)、小于50%死亡(+)、無死亡(-)的各類蟲數(shù)。貫眾最低濃度組出現(xiàn)幼蟲死亡后，補(bǔ)充載藥終濃度分別為5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L和40 mg/L進(jìn)行進(jìn)一步試驗(yàn)。

2　結(jié)果與分析

2.1苦參、鶴草芽、鴉膽子、蓽澄茄、使君子、苦楝皮的防效

苦參、鶴芽草、鴉膽子、蓽澄茄、使君子、苦楝皮6種中草藥，在試驗(yàn)設(shè)計(jì)的6種濃度(25～800 mg/L)條件下作用4 h之內(nèi)對(duì)刺激隱核蟲幼蟲均無殺滅效果。

2.2貫眾的防效

由表1看出，貫眾濃度10 mg/L作用4 h時(shí)出現(xiàn)少量幼蟲死亡；濃度20 mg/L和25 mg/L作用30 min開始出現(xiàn)少量幼蟲死亡；濃度40 mg/L作用10 min開始出現(xiàn)大量幼蟲死亡，2 h死亡率達(dá)100%；濃度200 mg/L作用1 h的死亡率100%；濃度400 mg/L和800 mg/L作用 10 min的死亡率達(dá)100%。

表1　貫眾對(duì)刺激隱核蟲幼蟲滅殺效果

注：①濃度組數(shù)字標(biāo)注“*”為二次補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)；②幼蟲死亡情況根據(jù)其死亡率分為4類 ，死亡率100%(+++)、死亡率大于50%(++)、死亡率小于50%(+)、無死亡(-)，下表同。

2.3苦皮藤素的防效

由表2 看出，苦皮藤素濃度25 mg/L作用4 h內(nèi)無死亡； 濃度50 mg/L作用2 h，開始出現(xiàn)部分幼蟲死亡；濃度100 mg/L作用30 min，開始出現(xiàn)部分幼蟲死亡；濃度200 mg/L和400 mg/L兩處理作用10 min時(shí)開始出現(xiàn)部分幼蟲死亡，4 h的死亡率100%；濃度800 mg/L作用2 h死亡率100%。

表2　苦皮藤素對(duì)刺激隱核蟲幼蟲滅殺效果

2.4雙氫青蒿素的防效

由表3看出，雙氫青蒿素濃度低于100 mg/L的處理，觀察期間4 h內(nèi)無死亡；濃度200 mg/L、400 mg/L和800 mg/L 3個(gè)處理均在作用3 h以上出現(xiàn)幼蟲死亡，死亡率大于50%。各處理不同觀測(cè)時(shí)間均未出現(xiàn)死亡率達(dá)到100%的情況。

表3　雙氫青蒿素對(duì)刺激隱核蟲幼蟲滅殺效果

3　討論

王忠華等[4]報(bào)道，口服復(fù)方中草藥HD-2(主要由檳榔、川楝子、綿馬貫眾、大青葉、穿心蓮等草藥混合而成)能使部分病魚恢復(fù)攝食，刺激隱核蟲病情得到緩解，平均死亡量減少15%～30%不等，鏡檢蟲體活力降低，部分解體死亡。劉金海等[10]報(bào)道，濃度 50 mg/L的中草藥HD-2對(duì)刺激隱核蟲有良好的滅殺效果，口服 HD-2對(duì)大黃魚刺激隱核蟲病均顯示出良好的預(yù)防和治療效果。鄒峰等[11]研究發(fā)現(xiàn)，五倍子、大黃、苦楝、檳榔、虎杖、貫眾等6 種中草藥對(duì)刺激隱核蟲幼蟲有一定的驅(qū)蟲效果。陳章群等[12]報(bào)道，用檳榔、苦參、苦楝3種中草藥熬成藥湯潑灑全池(每667 m2150 g)，治療刺激隱核蟲病，治愈率達(dá)90%。Kawano等[13]使用植物提取物治療刺激隱核蟲病，也取得了良好的效果。

中草藥屬天然產(chǎn)物，在產(chǎn)品質(zhì)量安全及環(huán)境保護(hù)方面有優(yōu)勢(shì)，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，中草藥提取物苦皮藤素、雙氫青蒿素，以及貫眾水提物對(duì)刺激隱核蟲幼蟲具有一定的殺滅作用，尤其是貫眾水提物對(duì)幼蟲的殺滅效果最好，苦皮藤素次之。今后，針對(duì)供試中草藥的有效劑量、防治效果及對(duì)魚體的毒性等方面還需進(jìn)一步深入研究。

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(責(zé)任編輯：楊小萍)

Insecticidal efficacy of Chinese herbal medicine onCryptocryonirritans

FAN Hai-ping, LIN Yu, ZHONG Quan-fu, ZHENG Lei, QIN Zhi-qing

(FujianFreshwaterFisheriesResearchInstitute,FujianProvince350002)

In this paper, control efficacy of some types of Chinese herbal medicines or extracts from Chinese herbal medicine to controlCryptocryonirritanswere studied. The results showed that there was no insecticidal efficacy when 25-800 mg/LSophoraflavescens,Agrimoniapilosa,Bruceajavanica,Pipercubeba,QuisqualisindicaandMeliaazedarachwere used for 4h. When 200 mg/L, 400 mg/L and 800 mg/L dihydroartemisinin were used for 3h, there was no insecticidal efficacy while used for over 3h, mortality exceeded 50%. When 200 mg/L and 400 mg/LCelastrusangulatuswere used for 10min, some larva died while they were used for 4h, mortality reached 100%. When 800 mg/LCelastrusangulatuswas used for 10min, some larva died while they were used for 2h, death rate reached 100%. There was insecticidal efficacy when over 40 mg/LCyrtomiumfortuneiwas used. When 40 mg/LCyrtomiumfortuneiwas used for 10min, mortality exceeded 50% while death rate reached 100% when 40 mg/LCyrtomiumfortuneifor 2h, 200 mg/LCyrtomiumfortuneifor 1h, 400 mg/L and 800 mg/LCyrtomiumfortuneifor 10min were used. The above results indicated that there was best insecticidal efficacy whenCyrtomiumfortuneiwas used,Celastrusangulatusranked the second best insecticidal efficacy. So,Cyrtomiumfortuneiand Celastrus angulatus had medicinal development value targeted toCryptocryonirritans.

Chinese herbal medicine;Cryptocryonirritans; larva; insecticidal effect

2016-02-02

樊海平，男，1967 年生，研究員。

福建省科技重大專項(xiàng)(2013NZ0002-5)；國家水生

10.13651/j.cnki.fjnykj.2016.03.005

動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)計(jì)劃(農(nóng)漁發(fā)[2015]8號(hào))。