郝晶晶，甄會(huì)賢，史正文，郭云，張府君

（山西藥科職業(yè)學(xué)院，山西太原030031）

黃芫花特征圖譜研究

郝晶晶，甄會(huì)賢，史正文，郭云，張府君

（山西藥科職業(yè)學(xué)院，山西太原030031）

●中醫(yī)藥學(xué)在世界上首先發(fā)現(xiàn)了中藥并首創(chuàng)了方劑，醫(yī)方是“除疾保性命之術(shù)”，而劑則有“調(diào)百藥齊，和之所宜”之功。采用現(xiàn)代藥物制劑技術(shù)重新研究并升華古典方劑之術(shù)，開(kāi)創(chuàng)未來(lái)藥物制劑技術(shù)和新劑型藥物研究的全新思維和方向。

目的：建立黃芫花藥材及制劑的HPLC特征圖譜對(duì)照測(cè)定法，為黃芫花質(zhì)量控制提供參考。方法：采用Agilent高效液相色譜儀、島津2010高效液相色譜儀，甲醇-水為流動(dòng)相梯度洗脫，測(cè)定黃芫花藥材的HPLC特征圖譜，分別從化學(xué)成分對(duì)不同產(chǎn)地黃芫花的HPLC特征圖譜進(jìn)行定性與定量相似性評(píng)價(jià)。結(jié)果：建立黃芫花藥材及制劑的HPLC特征圖譜測(cè)定條件分離良好、專屬性強(qiáng)、可用于黃芫花質(zhì)量的比較與控制。結(jié)論：以特征對(duì)照品為參照進(jìn)行黃芫花藥材及制劑特征圖譜相似性評(píng)價(jià)，重復(fù)性和耐用性良好。因此，黃芫花藥材的質(zhì)量和安全性亟待提高。

黃芫花；特征圖譜；木犀草素

1 儀器與試藥

Agilent高效液相色譜儀，島津2010高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器。對(duì)照品木犀草素（供含量檢測(cè)用；批號(hào)為：MUST-11051001），購(gòu)于北京恒元啟天化工技術(shù)研究院。黃芫花樣品來(lái)自采集和采購(gòu)共計(jì)10批。甲醇為色譜純，水為純化水，磷酸及其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

取本品適量，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇10 mL，密塞，稱定重量，超聲處理1 h（250W，33 KHz），放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

黃芫花經(jīng)HPLC分析出現(xiàn)多個(gè)色譜峰，木犀草素可以通過(guò)對(duì)照品確認(rèn)，且相對(duì)穩(wěn)定，因此選用木犀草素峰作為參照物峰中的S峰。

取木犀草素對(duì)照品，精密稱取10.22 mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液0.5mL，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每毫升含木犀草素0.05mg的對(duì)照品溶液［2］。

2.3 檢測(cè)方法

依照高效液相色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VID），結(jié)合指紋圖譜要求測(cè)定。

2.3.1 流動(dòng)相的確定在進(jìn)行流動(dòng)相考察時(shí)用水代替0.1%磷酸溶液，無(wú)論分離度還是色譜峰的峰形均比較差，故選擇0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相的成分之一。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中共選擇了以下流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相系統(tǒng)的選擇

通過(guò)該流動(dòng)相系統(tǒng)對(duì)供試品溶液進(jìn)行出峰的篩查，可大致判斷出峰時(shí)的流動(dòng)相比例，通過(guò)該系統(tǒng)可知在流動(dòng)相比例為（30∶70）時(shí)才有色譜峰的出現(xiàn)，而在比例變?yōu)榧状?00%時(shí)也再未出現(xiàn)其他色譜峰［4］，故采用表2進(jìn)行梯度洗脫。

表2 梯度洗脫程序

結(jié)果表明，以表2進(jìn)行梯度洗脫為最佳，譜圖上各個(gè)色譜峰的分離度較好，保留時(shí)間適中，因此選此流動(dòng)相作為黃莞花的HPLC指紋圖譜檢測(cè)的流動(dòng)相。

2.3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇文獻(xiàn)中木犀草素的測(cè)定波長(zhǎng)有260 nm、328 nm、340 nm、349 nm、355 nm等，對(duì)木犀草素的甲醇溶液進(jìn)行紫外光譜掃描，在254 nm和350 nm有最大吸收，且350 nm處吸收強(qiáng)度大于254 nm處，故選擇350 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.3.3 色譜柱的選擇實(shí)驗(yàn)過(guò)程中選擇了迪馬色譜柱進(jìn)行考察：DM C18（5μm，4.6mm×250mm），從結(jié)果看，多個(gè)色譜峰且分離效果較好。綜合考慮，選定DM C18（5u m，4.6mm×250mm）為色譜柱。

通過(guò)選擇，選定如下色譜條件為黃莞花特征圖譜的測(cè)定色譜條件。

色譜柱：DM C18（5u m，4.6 mm×250 mm）色譜分析柱；甲醇-0.1%磷酸溶液（30：70）為流動(dòng)相，依表2進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)：350 nm，流速：1 mL/min；檢測(cè)方法：分別精密吸取參照物溶液10 μL、供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀。按中藥色譜特征圖譜操作要求，供試品色譜中以木樨草苷為參比標(biāo)準(zhǔn)峰，另外兩個(gè)色譜峰的保留時(shí)間與參比峰保留時(shí)間進(jìn)行比值，算出其相對(duì)保留時(shí)間，作為判斷依據(jù)。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 精密度試驗(yàn)取同一供試品（批號(hào)：H-JX）溶液，同一進(jìn)樣量，連續(xù)進(jìn)樣6次，按實(shí)驗(yàn)條件依法測(cè)定，計(jì)算其相對(duì)保留時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果（min）

結(jié)果顯示，黃莞花的制備樣品通過(guò)HPLC分析結(jié)果穩(wěn)定，精密度RSD分別為0.61%，0.46%。結(jié)果表明，精密度良好。

2.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品（批號(hào)：H-JX）溶液，在24 h內(nèi)不同時(shí)間進(jìn)樣5次，按實(shí)驗(yàn)條件依法測(cè)定，并按計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間，供試品相對(duì)保留時(shí)間與參比對(duì)照保留時(shí)間比值，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（min）

以上結(jié)果顯示，黃莞花的制備樣品在24 h內(nèi)通過(guò)HPLC分析結(jié)果穩(wěn)定，穩(wěn)定性的RSD分別為0.76%，0.57%。結(jié)果表明，樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.3 重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一批號(hào)的供試品（批號(hào)：H-JX）6份，按上述方法進(jìn)行制備并進(jìn)行檢測(cè)，并進(jìn)行計(jì)算，圖譜及相似度結(jié)果見(jiàn)圖1及表5。

圖1 S木犀草苷參比峰

表5 黃芫花指紋圖譜重復(fù)性的相似度（min）

以上結(jié)果顯示，6份供試品中相對(duì)保留時(shí)間的RSD均為0.24。結(jié)果表明其重現(xiàn)性良好。

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)12批不同產(chǎn)地藥材的考察，選用保留時(shí)間為19 min和21 min附近的色譜峰作為共有峰，而已知的木犀草素保留時(shí)間為37 min作為參照峰，用相對(duì)保留時(shí)間計(jì)算，得出黃芫花的特征圖譜的相對(duì)保留時(shí)間的區(qū)間，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 不同藥品指標(biāo)峰保留時(shí)間考察（min）

通過(guò)相對(duì)保留時(shí)間的評(píng)價(jià)得出，分別在0.511 min、0.570min相對(duì)保留時(shí)間為特征圖譜，并設(shè)定（0.511±5）%、（0.570±5）%作為一個(gè)相對(duì)保留時(shí)間的判定區(qū)間。即相對(duì)保留時(shí)間比例在0.485～0.537min，0.542～0.598min范圍內(nèi)即可。標(biāo)準(zhǔn)特征圖譜見(jiàn)圖1。

［1］秦永祺.黃芫花有效成分的研究［J］.植物學(xué)報(bào)，1982（6）：558-561.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1977：514-516.

［3］山西省衛(wèi)生廳.山西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)［M］.太原：山西省衛(wèi)生廳，1987：47-49.

［4］王成瑞.抗生育有效成分河朔蕘花素的分離與鑒定［J］.中草藥，1981（12）：2-4.

［5］謝宗萬(wàn)，余友芩.全國(guó)中草藥名鑒（上）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：302-303.

［6］《中國(guó)植物志》編輯委員會(huì).中國(guó)植物志52（1）［M］.北京：中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社，2004：322-324.

［7］《山西植物志》編輯委員會(huì).山西植物志4［M］.北京：中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社，2004：264-266.

［8］南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大詞典（下）［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006：2 843-2 845.

［9］康少文，于永芳，李麗華，等.黃芫花中期引產(chǎn)有效成分的研究［J］.承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1984（1）：5-6.

［10］董倩.芫花及其炮制品的質(zhì)量評(píng)價(jià)［D］.沈陽(yáng)：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

［11］魚(yú)愛(ài)和.黃芫花乙醇液的毒性及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中成藥，1999（3）：119-121.

［12］冉先德.中華藥海（上冊(cè)）［M］.哈爾濱：哈爾濱出版社，1993：567-569.

［13］國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草（5）［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：420-422.

（編輯：張世霞）

Study on specific chromatogram of flower of Lowdaphne stringbush

Hao Jingjing，Zhen Huixian，Shi Zhengwen，Guo Yun，Zhang Fujun
（Shanxi Pharmaceutical Vocational College，Taiyuan Shanxi030031）

Objective：To establish HPLC specific chromatogram control determination method to provide the reference on quality control of Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf.Methods：Qualitative and quantitative similarity were evaluated by both qualitative and quantitative aspects of chemical composition of HPLC specific chromatogram of different origin of Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf.Result：The establishment of HPLC specific chromatogram of Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf and preparation conditions for determination of separation，good specificity can be used to compare and control quality of Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf.Conclusion：The features were used as reference for Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf medicinal materials and preparations of feature similarity evaluation，good repeatability and durability.Therefore，the quality and safety of Lowdaphne Stringbush Flower and Leafneeds to be improved.

Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf；specific chromatogram；luteolin

R285

A

1671-0258（2016）06-0016-03

郝晶晶，E-mail：94581403@qq.com