唐小明，王昌建，林　源，何世成，王衛(wèi)國(guó)，邱立新，魯杏華

(湖南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖南長(zhǎng)沙 410014)

?

2014年-2015年湖南省規(guī)模豬場(chǎng)豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查

唐小明，王昌建*，林源，何世成，王衛(wèi)國(guó)，邱立新，魯杏華

(湖南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖南長(zhǎng)沙 410014)

摘要：為了解湖南省規(guī)?；i場(chǎng)豬偽狂犬病免疫狀況及豬偽狂犬病病毒(PRV)野毒感染情況，2014年-2015年，采用隨機(jī)抽樣的方式，采集343個(gè)不同規(guī)模豬場(chǎng)血清樣品7 049份，采用ELISA方法開展PRV 抗體血清學(xué)調(diào)查。結(jié)果顯示，160個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)中，檢測(cè)免疫豬血清3 415份，PRVgB抗體合格數(shù)為2 206份，合格率僅為64.60%，表明規(guī)模豬場(chǎng)豬偽狂犬病免疫不確實(shí)；343個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)中，210個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)PRVgE抗體陽(yáng)性，場(chǎng)陽(yáng)性率61.22%；檢測(cè)豬血清樣品7 049份，PRVgE抗體陽(yáng)性數(shù)為1 661份，陽(yáng)性率為23.56%，其中2014年P(guān)RVgE抗體陽(yáng)性率為21.71%，2015年P(guān)RVgE抗體陽(yáng)性率為25.17%，呈上升趨勢(shì)。全省14個(gè)市州的規(guī)模豬場(chǎng)均存在不同程度的PRV感染，不同地區(qū)感染率差異明顯，永州感染率最高，長(zhǎng)沙感染率最低。不同養(yǎng)殖規(guī)模PRV的感染率不盡相同，其中，存欄數(shù)200頭以下PRV感染率較高，存欄數(shù)500～1 000頭感染率較低；種豬場(chǎng)免疫抗體優(yōu)于商品豬場(chǎng)，PRV感染率較商品豬場(chǎng)低。結(jié)果表明,PRV在湖南省感染普遍存在，疫苗免疫在一定程度上可以阻止臨床病例，但仍然無(wú)法根除隱性感染，對(duì)規(guī)模豬場(chǎng)偽狂犬病采取綜合防控和凈化措施勢(shì)在必行。

關(guān)鍵詞：豬偽狂犬?。谎鍖W(xué)；抗體；調(diào)查

偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus PRV)引起的家畜和多種野生動(dòng)物共患的傳染病。臨床上以發(fā)熱、奇癢和腦脊髓炎為主要特征。豬感染后無(wú)奇癢癥狀，主要表現(xiàn)為母豬的繁殖障礙、仔豬的高病死率和呼吸道疾病。偽狂犬病呈全球分布，通過(guò)實(shí)施根除計(jì)劃，美國(guó)、荷蘭等國(guó)家已經(jīng)撲滅了該病，在我國(guó)該病廣泛存在，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。我國(guó)將其列為二類動(dòng)物疫病[1]。

疫苗免疫接種是預(yù)防和控制偽狂犬病的根本措施。目前，國(guó)內(nèi)外普遍采用偽狂犬病病毒(PRV)gE基因缺失疫苗對(duì)該病進(jìn)行免疫預(yù)防，由于該疫苗具有良好的免疫原性，能有效地控制該病的發(fā)生和流行[2]。配套使用PRVgE抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，對(duì)血清中PRV野毒抗體進(jìn)行檢測(cè)，從而監(jiān)測(cè)豬群中PRV野毒感染情況[3]，淘汰確認(rèn)感染的豬只，從而凈化偽狂犬病[4-5],由于疫苗的使用，近來(lái)我國(guó)有效的控制了豬偽狂犬病的發(fā)生。但自2011年以來(lái)，豬偽狂犬病的發(fā)病率有上升趨勢(shì)[6]。為了解湖南省豬偽狂犬的免疫及野毒感染狀況，2014年1月至2015年12月，對(duì)湖南省160個(gè)不同養(yǎng)殖規(guī)模的豬場(chǎng)進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測(cè)，343個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行感染抗體的調(diào)查，以期為湖南省豬偽狂犬病的防控與凈化提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1待檢血清2014年-2015年采集湖南省14個(gè)市(州)343個(gè)不同規(guī)模且免疫過(guò)豬偽狂犬病病毒gE缺失疫苗的豬場(chǎng)，根據(jù)隨機(jī)采樣原則，每個(gè)豬場(chǎng)采集血樣20份～30份，無(wú)菌采集血液樣本2 mL～3 mL，靜置2 h～4 h,3 000 r/mim離心3 min，取上清至滅菌離心管中，置-20 ℃保存?zhèn)溆?。共采集血清樣? 049份。

1.1.2試劑PRVgB抗體檢測(cè)ELISA試劑盒和PRVgE抗體檢測(cè)ELISA試劑盒,美國(guó)IDEXX公司產(chǎn)品。

1.2方法

血清樣品抗體檢測(cè)均按照IDEXX公司生產(chǎn)的PRVgB抗體與gE抗體檢測(cè)試劑盒嚴(yán)格操作說(shuō)明書進(jìn)行。該次調(diào)查檢測(cè)的血清樣品來(lái)自用 PRVgE基因缺失疫苗免疫的豬場(chǎng)，如果PRV gE抗體陽(yáng)性，則判定為PRV野毒株感染。在對(duì)豬場(chǎng)結(jié)果判定和統(tǒng)計(jì)時(shí)，如果豬場(chǎng)有一個(gè)樣品判定為陽(yáng)性，則判定該豬場(chǎng)為野毒感染陽(yáng)性場(chǎng)。對(duì)結(jié)果運(yùn)用SPASS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2　結(jié)果

2.1不同年份不同飼養(yǎng)類型PRVgB抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)160個(gè)不同規(guī)模豬場(chǎng)免疫抗體檢測(cè)中，58個(gè)為種豬場(chǎng)，102個(gè)為商品代豬場(chǎng)，共計(jì)3 415份血清樣品進(jìn)行了PRVgB抗體檢測(cè)，2014年血清樣品1 379份，抗體合格數(shù)為893份，合格率為64.76%(893/1 379)；2015年血清樣品2 036份，抗體合格數(shù)為1 313份，合格率為64.49%(1313/2 036)，不同年份之間PRV免疫抗體合格率差異不明顯(P>0.05)；種豬場(chǎng)血清樣品1 305份，抗體合格數(shù)為1 020份，合格率為78.16%(1 020/1 305)，商品場(chǎng)血清2 110份，抗體合格數(shù)為1 186份，合格率為56.21%(1 186/2 110)。表明不同飼養(yǎng)類型PRV免疫抗體合格率差異顯著(P<0.05)。

2.2不同年份規(guī)模豬場(chǎng)PRVgE抗體檢測(cè)結(jié)果

在監(jiān)測(cè)的343個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)中，2014年監(jiān)測(cè)場(chǎng)數(shù)為160個(gè)，血清樣品為3 266份，PRVgE抗體陽(yáng)性場(chǎng)數(shù)為97個(gè)，場(chǎng)陽(yáng)性率為60.63%(97/160)，樣品陽(yáng)性數(shù)為709份，樣品陽(yáng)性率為21.71%(709/3 266)；2015年監(jiān)測(cè)的場(chǎng)數(shù)為186個(gè)，血清樣品數(shù)為3 783份，PRVgE抗體陽(yáng)性場(chǎng)數(shù)為113個(gè)，場(chǎng)陽(yáng)性率為61.75%(113/186)，樣品陽(yáng)性數(shù)為952份，樣品陽(yáng)性率為25.17% (952/3 783)；呈上升的趨勢(shì)(表1)。

2.3不同地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)PRVgE抗體檢測(cè)結(jié)果

2014年1月～2015年12月，共監(jiān)測(cè)來(lái)自湖南14個(gè)市(州)343個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)，血清樣品7 049份，經(jīng)PRVgE抗體檢測(cè)，場(chǎng)陽(yáng)性數(shù)為210個(gè)，陽(yáng)性率為61.22%(210/343)，血清樣品陽(yáng)性數(shù)為1 661份，PRVgE抗體陽(yáng)性率為23.56%(1661/7 049)。14個(gè)市州均存在PRV的感染，不同地區(qū)感染率差異明顯，其中永州地區(qū)場(chǎng)陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性均為最高，分別為78.57%(22/28)和36.21%(193/533)，長(zhǎng)沙場(chǎng)陽(yáng)性率與個(gè)體陽(yáng)性率最低，分別為34.38%(11/32)和9.78%(67/685)(表2)。

2.4不同養(yǎng)殖規(guī)模PRVgE抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)不同養(yǎng)殖規(guī)模的豬場(chǎng)PRVgE抗體陽(yáng)性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，存欄數(shù)小于200頭PRVgE抗體陽(yáng)性率最高，為32.59%(410/1 258)，200頭～500頭陽(yáng)性率為28.75%(552/1 920)，500頭～1 000頭陽(yáng)性率為17.22%(348/2 021)，大于1 000頭陽(yáng)性率為20.05%(371/1 850)。小型規(guī)模豬場(chǎng)PRVgE抗體陽(yáng)性率明顯高于其他規(guī)模豬場(chǎng)(表3)。

表1　不同年份規(guī)模豬場(chǎng)PRVgE抗體檢測(cè)結(jié)果

表2　不同地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)PRVgE抗體檢測(cè)結(jié)果

表3　不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場(chǎng)PRVgE抗體檢測(cè)結(jié)果

2.5不同季度規(guī)模豬場(chǎng)PRVgE抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)不同季節(jié)養(yǎng)殖規(guī)模的豬場(chǎng)PRVgE抗體陽(yáng)性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示,第1季度PRVgE抗體陽(yáng)性率最低，為18.31%(417/2 278)，第4季度PRVgE抗體陽(yáng)性率最高，為29.94%(356/1 446),第2、3季度PRVgE抗體陽(yáng)性率分別為26.17%(267/1 020)和23.60%(544/2 305)(表4)。

表4　不同季節(jié)規(guī)模豬場(chǎng)PRVgE抗體檢測(cè)結(jié)果

3　討論

3.1豬偽狂犬病的免疫情況

疫苗免疫接種是預(yù)防和控制豬偽狂犬病的有效手段，但建立豬場(chǎng)合理科學(xué)的免疫程序十分重要[7]。本次調(diào)查中，對(duì)全省采集的3 415份豬血清樣品進(jìn)行了免疫抗體檢測(cè)，抗體合格率僅為64.60%，其中種豬場(chǎng)抗體合格率為78.16%，商品場(chǎng)抗體合格率為56.21%。謝海波等[8]研究指出，豬偽狂犬病免疫抗體合格率達(dá)到80%以上才能有效的預(yù)防該病的流行。湖南省免疫抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，種豬場(chǎng)免疫抗體水平略低于80%，而商品場(chǎng)抗體水平遠(yuǎn)低于80%的群體保護(hù)水平，本次調(diào)查雖沒有對(duì)所有血清樣品進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)，但部分檢測(cè)結(jié)果在很大程度上反映湖南省偽狂犬病免疫的實(shí)際狀況，免疫效果不理想、不確實(shí)，發(fā)生該病的風(fēng)險(xiǎn)較大。結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查表明，未選擇優(yōu)質(zhì)高效的疫苗、沒有科學(xué)合理的免疫程序及缺乏有效的疫病監(jiān)測(cè)手段是造成免疫效果不確實(shí)的重要原因。母源抗體對(duì)仔豬免疫的干擾，是導(dǎo)致免疫效果不理想的因素之一。

3.2豬群野毒感染情況

本次調(diào)查共采集全省14個(gè)市(州)343個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)，統(tǒng)計(jì)血清樣品7 049份，結(jié)果顯示，規(guī)模豬場(chǎng)PRVgE抗體陽(yáng)性率為61.22%，血清樣品的PRVgE抗體陽(yáng)性率為23.56%。相比較于周緒賓等[9]報(bào)道的血清樣品陽(yáng)性率14.80%，豬場(chǎng)陽(yáng)性率63.40%，血清陽(yáng)性率出現(xiàn)的大幅升高，豬場(chǎng)陽(yáng)性率變化不大；相比較于占松鶴等[10]報(bào)道的血清陽(yáng)性率18.96%，豬場(chǎng)陽(yáng)性率66.67%，血清陽(yáng)性率出現(xiàn)小幅升高，而豬場(chǎng)陽(yáng)性率出現(xiàn)小幅下降。相關(guān)報(bào)道[11]表明，PRV野毒感染在我國(guó)豬場(chǎng)中普遍存在，但不同豬場(chǎng)感染率存在一定差異，與本次調(diào)查結(jié)果基本一致。本次血清樣品檢測(cè)結(jié)果未對(duì)不同生長(zhǎng)階段進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，但整體情況反映湖南省規(guī)模豬場(chǎng)豬偽狂犬病病毒污染面積大，感染程度較嚴(yán)重,并呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。

按照不同地區(qū)監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，全省14個(gè)市(州)PRV野毒感染率存在一定差異，PRV野毒感染率最高的為永州，場(chǎng)陽(yáng)性率為78.57%，血清樣品陽(yáng)性率為36.21%，根據(jù)采樣調(diào)查結(jié)果，該地區(qū)采集的血清樣本中，中小規(guī)模豬場(chǎng)較多，養(yǎng)殖場(chǎng)防疫意識(shí)相對(duì)淡薄，導(dǎo)致PRV野毒感染率偏高，這與吳波平等[12]報(bào)道中小型規(guī)模豬場(chǎng)PRV野毒感染率較高相一致。PRV野毒感染率最低的為長(zhǎng)沙，場(chǎng)陽(yáng)性率為34.38%，血清樣品陽(yáng)性率為9.78%，近年來(lái)，長(zhǎng)沙地區(qū)大力推進(jìn)規(guī)模豬場(chǎng)PR的凈化工作，并取得一定成效，場(chǎng)陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率遠(yuǎn)低于全省整體陽(yáng)性率。

按照不同養(yǎng)殖規(guī)模對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示，存欄小于200頭存欄豬場(chǎng)PRV野毒感染率最高，200頭～500頭存欄豬場(chǎng)次之，500頭～1 000頭存欄豬最低，不同養(yǎng)殖規(guī)模PRV野毒感染率存在一定差別，中小規(guī)模豬場(chǎng)感染率較高，中等以上規(guī)模豬場(chǎng)感染率較低。引種檢疫不嚴(yán)、免疫程序不合理、生產(chǎn)水平低下是造成中小規(guī)模豬場(chǎng)PRV感染率較高的重要原因。

按照不季節(jié)規(guī)模豬場(chǎng)PRVgE抗體陽(yáng)性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示，第4季度PRVgE抗體陽(yáng)性率明顯高于其他3個(gè)季度，達(dá)到了29.94%，其次為第2季度，第1季度最低，為18.31%，監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，氣候也是影響豬偽狂病野毒感染的因素之一。

當(dāng)前，疫苗免疫接種是預(yù)防豬偽狂犬病的主要方法，PRVgE基因缺失疫苗具有良好的免疫原性，能有效地阻止該病的發(fā)生和流行。但僅靠疫苗免疫不能徹底控制豬偽狂犬病的流行，結(jié)合高水平的生物安全措施，定期開展血清學(xué)監(jiān)測(cè)，制定合理的免疫程序，確保疫苗的免疫效果。結(jié)合豬場(chǎng)的實(shí)際情況，通過(guò)免疫、監(jiān)測(cè)、提高生物安全水平及淘汰感染豬只等一系列措施，逐步控制，以達(dá)到最終凈化的目的，促進(jìn)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

[1]田克恭，李明.動(dòng)物疫病診斷技術(shù)——理論與應(yīng)用[M].2版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2014.

[2]王莉娟，陸明哲，陳義平，等.PR病檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2005，32(6)：42-44.

[3]旅素芳，郭廣軍，魏鳳，等.豬偽狂犬病病毒gE-/gI-/TK-多基因缺失活疫苗對(duì)豬的安全性與免疫力研究[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014,35(4)：1-5.

[4]Mikulska Skupien E，Szweda W,Procajlo Z.Evaluation of specific hummoral immune response in pigs vaccinated intradermally with deleted Aujeszky’s disease vaccine and challenged with virulent strian of Herpesvirus suis type1[J].Pol J Vet Sci,2005，8(1):11-16.

[5]Grabowska A K,Lipiska A D,Rohde J,et al.New baculovirus recombinants expressing pseudorsbies virus(PRV) glycoproteins protect mice against lethal challenge infection [J].Vaccine,2009,27(27):2384-3591.

[6]彭金美，安同慶，趙鴻遠(yuǎn)，等.豬偽狂犬病病毒新流行株的分離鑒定及抗原差異性分析[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，35(1)：1-4.

[7]吳文輝，金愛華，方桂明，等.上海部分豬場(chǎng)偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查[J].畜牧獸醫(yī)，2011，43(6)：102-103.

[8]謝海波，何小華.豬偽狂犬病的流行情況和預(yù)防措施[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2001，37(6)：212-213．

[9]周緒賓，秦云，丹尼，等.2007年規(guī)模豬場(chǎng)偽狂犬病野毒血清流行病學(xué)系統(tǒng)監(jiān)測(cè)與分析[J].豬業(yè)科學(xué)，2008,25(10):84-90.

[10]占松鶴，劉華，周迎春，等.安徽省規(guī)?；N豬場(chǎng)豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015,36(3)：124-127.

[11]張顯浩，陳瑞愛，李冰，等.2012年-2013年我國(guó)集約化豬場(chǎng)豬偽狂犬病病毒感染情況的調(diào)查[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015,36(3)：133-136.

[12]吳波平，黃文華，金顏輝，等.福建省2010年豬群偽狂犬gE抗體監(jiān)測(cè)報(bào)告[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2011,28(8)：57-59.

收稿日期：2015-12-22

基金項(xiàng)目：農(nóng)業(yè)支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2014NK3037)

作者簡(jiǎn)介：唐小明(1978-)，男，湖南邵陽(yáng)人，碩士，主要從事動(dòng)物疫病防控研究。*通訊作者

中圖分類號(hào):S852.659.1；S858.28

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

文章編號(hào):1007-5038(2016)07-0123-04

Serological Investigation on Porcine Pseudorabies in Scaled Pig Farms of Hunan Province During 2014 to 2015

TANG Xiao-ming,WANG Chang-jian,LIN Yuan,HE Shi-cheng,WANG Wei-guo,QIU Li-xin,LU Xing-hua

(HunanprovincialCenterforAnimalDiseaseControlandPrevention,Changsha,Hunan,410014,China)

Abstract:A serological investigation was carried out to get a better understanding of the immunization and infection status of porcine pseudorabies virus(PRV) in scaled pig farm in Hunan province.By means of random sampling,7 049 serum samples were collected in 343 different scale pig farms during 2014 to 2015.ELISA method was used to carry out the PRV antibody serology survey.The results showed that:In 160 scale pig farms,3 415 immune serum samples were detected,PRVgB antibody qualified number is 2 206,the qualified rate is only 64.60%;In 343 scale pig farms,PRVgE antibody is positive in 210 scale pig farms,a positive rate of 61.22%.PRVgE antibody positive number is 1 661 in 7 049 serum samples,positive rate is 23.56%,Among them PRVgE antibody positive rate is 21.71% in 2014,PRVgE antibody positive rate is 25.17% in 2015.There was clear difference in prevalence between different regions,the highest was in Yongzhou,the lowest was in Changsha.There are varying degrees of PRV infections in scale pig farms of 14 cities of Hunan province,PRV infection rate is higher in less 200 head pig farms than in 500 to 1 000 head pig farms.The immune antibody titer in breeding pig farms is superior to that in commercial pig farms.The results showed that the PRV infection is widely prevalennt in our province,the vaccine can prevent clinical cases to a certain extent,but still not be able to eradicate the recessive infections.PR comprehensive prevention and control measures and purification are imperative in scale pig farms.

Key words:Porcine pseudorabies;serology;antibody;investigation