王冬，范立僑，馬希中，李勇，趙群，檀碧波，張志棟，崔平

（1.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院 外三科，河北 石家莊 050011；2.河北省人民醫(yī)院 醫(yī)務(wù)處，河北 石家莊 050051）

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莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶對(duì)裸鼠胃癌移植瘤生長(zhǎng)、增殖細(xì)胞核抗原和P27表達(dá)的影響*

王冬1，范立僑1，馬希中1，李勇1，趙群1，檀碧波1，張志棟1，崔平2

（1.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院 外三科，河北 石家莊 050011；2.河北省人民醫(yī)院 醫(yī)務(wù)處，河北 石家莊 050051）

摘要：目的觀察莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶對(duì)胃癌裸鼠皮下移植瘤的影響。方法將人胃癌細(xì)胞株BGC823接種于裸鼠皮下建立荷瘤裸鼠模型。將荷瘤裸鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組（莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶），記錄各組的腫瘤體積和瘤重。應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組腫瘤組織中增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、P27的表達(dá)。結(jié)果對(duì)照組腫瘤體積和重量比其他3組升高（P<0.05）；聯(lián)合用藥組腫瘤體積和重量低于莪術(shù)醇組（P<0.05）；聯(lián)合用藥組腫瘤體積和重量與氟尿嘧啶組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。各實(shí)驗(yàn)組腫瘤組織中PCNA的表達(dá)均低于對(duì)照組（P<0.05）；與莪術(shù)醇組和氟尿嘧啶組比較，聯(lián)合用藥組PCNA的表達(dá)降低（P<0.05）。各實(shí)驗(yàn)組移植瘤組織中P27的表達(dá)均高于對(duì)照組（P<0.05）；與莪術(shù)醇組比較，聯(lián)合用藥組P27的表達(dá)增強(qiáng)（P<0.05）；與氟尿嘧啶組比較，聯(lián)合用藥組P27 mR NA的相對(duì)表達(dá)有升高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與莪術(shù)醇組和氟尿嘧啶組比較，聯(lián)合用藥組P27蛋白陽(yáng)性率升高（P<0.05）。結(jié)論莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶能抑制胃癌裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)PCNA、P27基因有關(guān)。

關(guān)鍵詞：莪術(shù)醇；胃癌；裸鼠皮下移植瘤；增殖細(xì)胞核抗原；P27

胃癌是我國(guó)常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率都居惡性腫瘤前列。目前胃癌的治療是以根治性手術(shù)為主，術(shù)后輔以化療，而化療的毒副作用以及對(duì)機(jī)體的免疫抑制作用，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，故近年來(lái)中藥在胃癌的輔助治療中占有越來(lái)越重要的地位[1-2]。莪術(shù)醇，又稱姜黃環(huán)奧醇，是從中藥莪術(shù)揮發(fā)油中提取的主要有效成分。已有研究表明，莪術(shù)醇對(duì)結(jié)腸癌、肺癌、胃癌、骨肉瘤細(xì)胞均有明顯的抑制作用[2-5]，因而有望用于胃癌治療。但迄今莪術(shù)醇抑制胃癌生長(zhǎng)的體內(nèi)研究還不多見(jiàn)，與其他化療藥物聯(lián)合應(yīng)用效果如何報(bào)道也沒(méi)有一致意見(jiàn)。筆者以人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤動(dòng)物模型作為研究對(duì)象，分別給予莪術(shù)醇、氟尿嘧啶及莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶藥物干預(yù)，研究不同措施對(duì)胃癌裸鼠移植瘤的影響，并檢測(cè)增殖相關(guān)基因增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、P27的表達(dá)，為莪術(shù)醇治療胃癌的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)藥品莪術(shù)醇（中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度>99%），氟尿嘧啶注射液（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，250mg/支），RPMI 1640培養(yǎng)基（洛斯維·帕克紀(jì)念研究所），胎牛血清（杭州四季青公司），胰蛋白酶（美國(guó)Gibco公司）,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自美國(guó)Promega公司，熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成,鼠抗人PCNA、P27單克隆抗體（美國(guó)Santa Cruz公司），免疫組織化學(xué)法試劑盒購(gòu)自北京中杉生物公司。

1.1.2細(xì)胞株人胃癌細(xì)胞株BGC823購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞研究所，細(xì)胞在含有10%牛清及青鏈霉素抗體的RPMI 1640培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)。

1.1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物4周齡BALB/c-nu雄性裸鼠，體重18～23 g，購(gòu)自北京華阜康生物公司，合格證號(hào)：11401300017187，在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院動(dòng)物中心無(wú)特定病原體（specefic pathogen free，SPF）級(jí)環(huán)境下飼養(yǎng)。動(dòng)物室光照充足，溫度26～28℃，相對(duì)濕度40%～60%。

1.2荷瘤裸鼠模型的建立

收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期BGC823細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，無(wú)菌條件下將細(xì)胞懸液以0.2ml/只接種于裸鼠右前肢腋窩皮下，繼續(xù)飼養(yǎng)2周，建立荷瘤裸鼠模型。

1.3動(dòng)物分組與給藥

待裸鼠皮下瘤生長(zhǎng)至直徑大約10 mm時(shí)進(jìn)行分組。20只裸鼠隨機(jī)分為4組：對(duì)照組（等容積生理鹽水）、莪術(shù)醇組（莪術(shù)醇注射液100 mg/kg）、氟尿嘧啶組（氟尿嘧啶注射液50 mg/kg）、聯(lián)合用藥組（莪術(shù)醇注射液100mg/kg和氟尿嘧啶注射液50 mg/kg），每組5只。均每隔4天瘤體內(nèi)給藥1次，連續(xù)給藥4次。

1.4腫瘤抑瘤率的比較

末次給藥4d后脫頸處死裸鼠，完全剝?nèi)×鲶w組織，測(cè)量腫瘤最長(zhǎng)徑A（mm）和最短徑B（mm），體積（mm3）=1/2（A×B2），體積抑制率=（對(duì)照組瘤體積-實(shí)驗(yàn)組瘤體積）/對(duì)照組瘤體積×100%。電子天平稱重瘤塊，按照公式計(jì)算腫瘤抑制率。重量抑制率=（對(duì)照組瘤重-實(shí)驗(yàn)組瘤重）/對(duì)照組瘤重×100%。

1.5形態(tài)學(xué)觀察

取部分剝離的瘤組織以10%中性甲醛固定，石蠟包埋，制成4μm厚的切片，蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）染色，光鏡下觀察瘤組織細(xì)胞形態(tài)。

1.6qPCR檢測(cè)PCNA、P27 mRNA表達(dá)

Trizol試劑提取各組裸鼠皮下移植瘤組織的總RNA，具體操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。提取后以紫外光度計(jì)測(cè)定其純度并定量。在PCR管中配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，輕輕混勻，室溫放置10 min后移入42℃恒溫槽中，42℃保溫1 h進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后在冰水中冷卻2min，所得反應(yīng)液用于PCR反應(yīng)。引物序列如下：PCNA正向引物為5'-GCCGAGATCTC AGCCATATT-3'，反向引物為5'-ATGTACTTAGAGG TACAAAT-3'；P27正向引物為5'-CCGACGATTCTT CTACTC-3'，反向引物為5'-CTGATAAACAAGGAAA CT-3'；甘油醛 -3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）正向引物為5'-AGAAGGCTGGGGCTCATTTG-3'，反向引物為5'-AGGGGCCATCCACAGTCTTC-3'。取逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物5μl為PCR反應(yīng)模板，反應(yīng)體系為20μl。擴(kuò)增條件：①PCNA。94℃預(yù)變性5min，95℃變性30s，58℃退火30 s，72℃延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)，72℃繼續(xù)延伸5 min。②P27，94℃預(yù)變性5 min，95℃變性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)，72℃繼續(xù)延伸5min。以上循環(huán)進(jìn)行40次，擴(kuò)增完畢后進(jìn)行結(jié)果分析。

1.7免疫組織化學(xué)法檢測(cè)PCNA和P27蛋白的表達(dá)

腫瘤組織置于10%中性甲醛中固定24 h，經(jīng)脫水、透明、滲蠟、石蠟包埋，以4μm厚度連續(xù)切片后行免疫組織化學(xué)染色，方法參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷：在每張切片中隨機(jī)選取6個(gè)不同視野，在高倍鏡下觀察，以此來(lái)評(píng)判腫瘤細(xì)胞染色的著色率。PCNA蛋白陽(yáng)性染色在胞核，P27蛋白陽(yáng)性染色在胞漿，以出現(xiàn)淡黃色至棕黃色顆粒沉著為陽(yáng)性。以高倍鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比為陽(yáng)性表達(dá)率，取6個(gè)視野的平均值。病理結(jié)果均由病理醫(yī)師盲法評(píng)定。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各組不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞活性比較用重復(fù)測(cè)量方差分析，用SNK法進(jìn)行兩兩比較；計(jì)數(shù)資料以率或百分比表示，用χ2檢驗(yàn)，P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組裸鼠腫瘤生長(zhǎng)情況

裸鼠荷瘤生長(zhǎng)結(jié)果表明，對(duì)照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組的腫瘤體積分別為（2195.83± 54.00）、（1 795.48±56.86）、（1 439.50±31.13）和（1 363.40±37.54）mm3。4組體積比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=434.291，P=0.000）。莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組腫瘤終體積與對(duì)照組比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=11.416、27.133和28.303，P=0.000）。4組腫瘤體積抑制率比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=51.591，P= 0.000）。莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組腫瘤體積抑制率與對(duì)照組比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=20.095、41.604和46.761，P=0.000）。

對(duì)照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組的腫瘤重量分別為（1.88±0.09）、（1.51±0.09）、（1.18± 0.02）和（1.05±0.10）g。4組重量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=92.040，P=0.000）。莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組腫瘤重量與對(duì)照組比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.500、16.978和13.795，P=0.000）。4組重量抑制率比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=58.659，P=0.000）。莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組腫瘤重量抑制率與對(duì)照組比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=21.828、38.735和56.657，P=0.000）。見(jiàn)表1、2和圖1。

表1　各組的腫瘤體積、重量比較 （n=5±s）

表1　各組的腫瘤體積、重量比較 （n=5±s）

注：1）與對(duì)照組比較，P<0.05；2）與莪術(shù)醇組比較，P<0.05

組別　移植瘤平均重量/g對(duì)照組　2195.83±54.00　1.88±0.09莪術(shù)醇組　1795.48±56.861）　1.51±0.091）腫瘤終體積/mm3氟尿嘧啶組聯(lián)合用藥組1439.50±31.131）1363.40±37.541）2）1.18±0.021）1.05±0.101）2）F值　434.291　92.040 P值　0.000　0.000

2.2各組腫瘤細(xì)胞活性情況（MTT結(jié)果）

重復(fù)測(cè)量的方差分析結(jié)果顯示，各組腫瘤細(xì)胞活性與處理方式及時(shí)間都有關(guān)系。各組間細(xì)胞活性不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F組間=21.582，P組間=0.000）；各組細(xì)胞隨時(shí)間延長(zhǎng)活性逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F時(shí)間=340.020，P時(shí)間=0.000）；不同處理措施和時(shí)間之間存在交互作用（F交互=4.061，P交互=0.000）。見(jiàn)表3。

表2　各組的腫瘤體積和腫瘤重量抑制率比較（n=5，%）

2.3PCNA、P27 mRNA在各組裸鼠胃癌組織中的表達(dá)

qPCR結(jié)果顯示，各組PCNAmRNA的相對(duì)表達(dá)量不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=102.272，P=0.000）。莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組裸鼠胃癌移植瘤組織中PCNAmRNA的相對(duì)表達(dá)量均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.668、6.692和14.189，P= 0.006、0.000和0.000）。各組P27 mRNA的相對(duì)表達(dá)量不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=35.163，P=0.000）。莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組P27 mRNA的相對(duì)表達(dá)量均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= -5.065、-7.837和9.334，P=0.000）。

圖1　各組裸鼠皮下移植瘤情況

表3　各組腫瘤細(xì)胞活性情況 （n=5±s）

表3　各組腫瘤細(xì)胞活性情況 （n=5±s）

注：?與對(duì)照組比較，P<0.05。F組間=21.582，P組間=0.000；F時(shí)間=340.020，P時(shí)間=0.000；F交互=4.061，P交互=0.000

組別0h 24h 48h 72h對(duì)照組　0.129±0.023　0.236±0.045　0.512±0.056　0.702±0.051莪術(shù)醇組　0.131±0.019　0.232±0.041　0.416±0.068?　0.623±0.058?氟尿嘧啶組　0.126±0.020　0.238±0.037　0.382±0.069?　0.562±0.061?聯(lián)合用藥組　0.128±0.021　0.234±0.050　0.358±0.067?　0.519±0.082?

圖2　P27蛋白在各組腫瘤組織中的表達(dá) （免疫組織化學(xué)法×400）

各組PCNA蛋白的相對(duì)表達(dá)量不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=177.139，P=0.000）。莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組PCNA蛋白表達(dá)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=10.835、23.333和24.741，P=0.000）。各組P27蛋白的相對(duì)表達(dá)量不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=541.010，P=0.000）；莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組P27蛋白的相對(duì)表達(dá)量均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-12.623、-19.194和-25.839，P=0.000）。見(jiàn)圖2、3和表4、5。

圖3　PCNA蛋白在各組腫瘤組織中的表達(dá) （免疫組織化學(xué)法×400）

表4　各組PCNA和P27 mRNA的表達(dá)情況 （n=5±s）

表4　各組PCNA和P27 mRNA的表達(dá)情況 （n=5±s）

注：1）與對(duì)照組比較，P<0.05；2）與莪術(shù)醇組比較，P<0.05；3）與氟尿嘧啶組比較，P<0.05

組別PCNAmRNA P27mRNA對(duì)照組　1.0015±0.0682　1.010±0.1746莪術(shù)醇組　0.8673±0.04521）　1.8307±0.31751）F值　102.272　35.163 P值　0.000　0.000氟尿嘧啶組聯(lián)合用藥組0.7553±0.04601）0.5327±0.02841）2）3）2.0274±0.23191）2.5566±0.32681）2）

表5　各組PCNA和P27蛋白的表達(dá)情況 （n=5±s）

表5　各組PCNA和P27蛋白的表達(dá)情況 （n=5±s）

注：1）與對(duì)照組比較，P<0.05；2）與莪術(shù)醇組比較，P<0.05；3）與氟尿嘧啶組比較，P<0.05

組別PCNA蛋白P27蛋白對(duì)照組　0.7356±0.0226　0.3367±0.0236莪術(shù)醇組　0.5694±0.02581）　0.5106±0.01981）F值　177.139　541.010 P值　0.000　0.000氟尿嘧啶組聯(lián)合用藥組0.4405±0.01701）0.4017±0.02901）2）0.6028±0.02011）0.7167±0.02291）2）3）

3　討論

胃癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，但我國(guó)早期胃癌僅占所有胃癌患者的10%左右[6]。由于早期胃癌無(wú)明顯癥狀及缺乏特異性的篩選指標(biāo)，因此多數(shù)患者就診時(shí)已處于中晚期，手術(shù)效果不佳或失去手術(shù)機(jī)會(huì)。此時(shí)，以化療為主的綜合治療對(duì)提高患者的生存期起著重要的作用，氟尿嘧啶等嘧啶類藥物是胃腸道等多種腫瘤治療的一線藥物，用其化療有許多毒副作用，使得患者難于耐受而放棄或不能堅(jiān)持治療。因此，尋找減輕化療毒物作用、提高生活質(zhì)量的方法或藥物就有著重要意義。中藥提純物作為胃癌治療的輔助用藥已廣泛應(yīng)用于臨床，可減輕化療毒副作用，提高患者生存質(zhì)量，對(duì)化療藥具有增效增敏作用。

莪術(shù)醇是中藥莪術(shù)的主要有效成分，已被證實(shí)對(duì)多種疾病的治療有效。研究表明，莪術(shù)醇能明顯抑制結(jié)腸癌、肺癌、胃癌、骨肉瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)[2-5]。但該類研究以體外實(shí)驗(yàn)為多，有關(guān)莪術(shù)醇體內(nèi)治療胃癌的效果研究還不多見(jiàn)。本研究中筆者對(duì)莪術(shù)醇體內(nèi)抑制胃癌生長(zhǎng)的作用機(jī)制進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，莪術(shù)醇對(duì)裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，莪術(shù)醇作用后腫瘤的體積和重量都受到明顯抑制，說(shuō)明莪術(shù)醇有明顯的抗癌效果。結(jié)果還發(fā)現(xiàn)莪術(shù)醇和氟尿嘧啶聯(lián)合應(yīng)用效果更為顯著，提示莪術(shù)醇與氟尿嘧啶在胃癌治療中可能具有協(xié)同作用，在臨床聯(lián)合應(yīng)用莪術(shù)醇和氟尿嘧啶有望提高化療效果。

為探討莪術(shù)醇抑制胃癌生長(zhǎng)的機(jī)制，筆者進(jìn)一步檢測(cè)各組腫瘤組織中PCNA、P27的表達(dá)情況。PCNA合成量在細(xì)胞周期的G1期逐漸增加，到S期達(dá)高峰，G2期開(kāi)始下降，與細(xì)胞DNA的合成密切相關(guān)，在細(xì)胞增殖周期中起著重要作用，其表達(dá)量與DNA合成量變化一致，是直接反映細(xì)胞增殖能力的指標(biāo)[7]。P27可以與周期素依賴性蛋白激酶結(jié)合，對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)行調(diào)控，為重要的細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)控因子，其缺失與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有著重要關(guān)系[8]。本研究結(jié)果顯示，莪術(shù)醇作用后可以明顯抑制PCNA的表達(dá)，同時(shí)促進(jìn)P27表達(dá)，提示莪術(shù)醇可能通過(guò)調(diào)控上述基因而抑制胃癌生長(zhǎng)。但腫瘤的生長(zhǎng)機(jī)制復(fù)雜，本研究?jī)H檢測(cè)莪術(shù)醇作用后兩種基因的改變，且沒(méi)有進(jìn)行深入的機(jī)制研究，這是明顯不足的，需要進(jìn)一步的深入研究確定莪術(shù)醇抗胃癌的具體機(jī)制。

本研究顯示莪術(shù)醇可以抑制裸鼠胃癌移植腫瘤的生長(zhǎng)，且與氟尿嘧啶具有協(xié)同作用，其機(jī)制可能莪術(shù)醇與下調(diào)PCNA而上調(diào)P27基因有關(guān)。本研究為莪術(shù)醇胃癌應(yīng)用提供一定依據(jù)，但本研究?jī)?nèi)容較為簡(jiǎn)單，還有待進(jìn)一步的分子實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)驗(yàn)予以證實(shí)。

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（申海菊編輯）

中圖分類號(hào)：R 735.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.13.001

文章編號(hào)：1005-8982（2016）13-0001-06

收稿日期：2015-12-28

*基金項(xiàng)目：國(guó)家自然基金面上項(xiàng)目（No：81372580）；河北省中醫(yī)藥管理局項(xiàng)目（No：2014145D）

［通信作者］李勇，E-mail：li_yong_hbth@126.com；Tel：0311-86095678

Effect of curcumol combined with fluorouracil on growth of gastric cancer implantation tumor in nude mice and expressions ofPCNA andP27genes*

Dong Wang1，Li-qiao Fan1，Xi-zhong Ma1，Yong Li1，Qun Zhao1，Bi-bo Tan1，Zhi-dong Zhang1，Ping Cui2
（1.The Third Department of General Surgery，the Fourth Affiliated Hospital，Hebei Medical University，Shijiazhuang，Hebei 050011，China；2.Division of Medical Affairs，Hebei General Hospital，Shijiazhuang，Hebei 050051，China）

Abstract:Objective To observe the effect of curcumol combined with fluorouracil（FU）on subcutaneous transplantation tumor tissues of gastric cancer cells in nude mice.Methods The implantation tumor model was built by subcutaneous inoculation of human gastric cancer cell line BGC823 in nude mice.The tumor-bearing mice were randomly divided into control group，curcumol group，F(xiàn)U group and combination group（curcumol combined with FU）.Data of tumor volume and weight of each group were collected.Expressions ofPCNAandP27genes in tumors of the 4 groups were detected with qPCR and immunohistochemistry.Results The tumor volume was significantly smaller and the tumor weight was significantly lower in the 3 experimental groups than in the control group（P＜0.05）.Compared with the curcumol group，the tumor volume was significantly smaller and the tumor weight was significantly lower in the combined group（P＜0.05）.The volume and weight of the tumors had no significant differences between the FU group and the combined group（P＞0.05）.The expression of thePCNAin the experimental groups was significantly lower than that in the control group（P＜0.05）.Compared with the curcumol group and the FU group，the expression ofPCNAin tumor tissues of the combined group significantly decreased（P＜0.05）.The expression of theP27in the 3 experimental groups was significantly higher than that in the control group（P＜0.05）. Compared with the curcumol group，the expression ofP27in the combined group significantly increased（P＜0.05）. There was no significant difference inP27mRNA of tumor tissues between the combined group and the FU group（P＞0.05）.The positive percentages of p27 protein in the 3 experiment groups were significantly higher than that in the control group（P＜0.05）.Compared with the curcumol group and the fluorouracil group，the positive percentages of PCNA protein in the combined group was significantly higher（P＜0.05）.Conclusions Curcumol combined with FU could inhibit the growth of subcutaneous transplantation tumor of human gastric cancer cells in nude mice，which might be related to regulation ofPCNAandP27genes.

Keywords:curcumol；gastric cancer；subcutaneous transplantation tumor of nude mice；proliferating cell nuclear antigen；P27