覃海龍，宋勝武，云雪林

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萸姜藥效組分對小鼠急性心肌缺血的影響研究*

覃海龍，宋勝武，云雪林*

（貴陽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州貴陽550002）

摘 要：目的：探尋萸姜藥效組分對小鼠急性心肌缺血的影響。方法：以腹腔注射ISO制備小鼠常壓缺氧模型和急性心肌缺血模型，對照丹參片組觀察不同濃度萸姜藥效組分對小鼠耐常壓缺氧與急性心肌缺血的作用；以腹腔注射Pit制備小鼠急性心肌缺血模型，對照硝苯地平片組觀察不同濃度萸姜藥效組分對小鼠急性心肌缺血的作用。結(jié)果：小鼠耐常壓缺氧和ISO致小鼠急性心肌缺血實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，復(fù)方丹參片組能明顯延長小鼠存活時間（P＜0.05）及有效抑制小鼠心電圖S-T段抬高（P＜0.05），萸姜藥效組分的高、中、低劑量對小鼠存活時間無顯著影響（P＞0.05），對小鼠心電圖S-T段無顯著影響（P＞0.05）。Pit致小鼠急性心肌缺血實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，硝苯地平組與萸姜組分高劑量組均能有效抑制小鼠心電圖S-T段抬高（P＜0.05），萸姜組分低劑量組對小鼠心電圖S-T段無顯著影響（P＞0.05）。結(jié)論：萸姜藥效組分對Pit致小鼠急性心肌缺血具有明顯的改善作用。

關(guān)鍵詞：干姜揮發(fā)油；吳茱萸揮發(fā)油；組分；急性心肌缺血；Pit

干姜、吳茱萸是我國傳統(tǒng)常用中藥。干姜、吳茱萸主要功效為溫中散寒［1，2］，現(xiàn)代研究表明有改善心血管的作用［3-5］；古代對于心血管疾病用活血化瘀，回陽救逆等法，現(xiàn)代研究結(jié)果也表明了其中揮發(fā)油和生物堿是這些治法治則的物質(zhì)基礎(chǔ)［4-8］。根據(jù)現(xiàn)代對干姜揮發(fā)油、吳茱萸揮發(fā)油和吳茱萸總生物堿藥理作用的研究結(jié)果，通過組分配伍研究［9-11］，可以降低干姜、吳茱萸藥材自身復(fù)雜性對質(zhì)量控制的影響，有利于研究干姜與吳茱萸藥效組分群的協(xié)同作用、配伍關(guān)系等方面。

但目前單獨(dú)使用干姜揮發(fā)油和吳茱萸揮發(fā)油用于抗急性心肌缺血和擴(kuò)張外周圍血管的研究少見［8］或未見報道，所以本文通過以抗急性心肌缺血和擴(kuò)張微血管作為藥效學(xué)指標(biāo)研究干姜、吳茱萸組分，分別進(jìn)行抗ISO［12-13］、Pit［14-16］致小鼠急性心肌缺血心電圖的影響實(shí)驗(yàn)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試藥

干姜（生產(chǎn)批號20120701，貴陽濟(jì)仁堂藥業(yè)有限公司，貴州興義）；吳茱萸（生產(chǎn)批號20120706，貴陽濟(jì)仁堂藥業(yè)有限公司，貴州湄潭）；干姜、吳茱萸經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥教研室周漢華教授鑒定：干姜為姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的干燥根莖；吳茱萸為蕓香科植物疏毛吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.bodinieri（Dode）Huang的干燥成熟果實(shí)。

硝苯地平片（生產(chǎn)批號120302，山東臨汾寶珠制藥有限公司，規(guī)格：10 mg）；復(fù)方丹參片（批號121004，貴州飛云嶺藥業(yè)有限公司）；鹽酸異丙腎上腺素注射液（ISO，批號101103，上海禾豐制藥有限公司，規(guī)格：2 ml∶1 mg每支）；垂體后葉素注射液（Pit，批號100405，規(guī)格：南京新百藥業(yè)有限公司，0.5 ml∶3單位）；25%烏拉特溶液（上海恒遠(yuǎn)科技有限公司）。

1.2 動物

昆明種小鼠（雌雄各半，體重20-25 g，貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號：SCXK（黔）2012-0001）

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 萸姜藥效組分制作

將干姜揮發(fā)油β-CD包合物、吳茱萸揮發(fā)油β-CD包合物、吳茱萸總生物堿根據(jù)含量、包合率等按干姜、吳茱萸原藥材比例（15∶10）折算出三種組分中藥的劑量，混合均勻，配制成一定濃度的混懸液備用；成人以60 kg體重計，以8倍成人量為中劑量，2倍中劑量為高劑量，1/2倍為低劑量；用藥劑量為0.1 mL/10 g。

2.2 對腹腔注射ISO小鼠耐常壓缺氧的影響

取小鼠72只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，每組12只，分別為干姜、吳茱萸組分（以下簡稱萸姜藥效組分GWZ）高、中、低劑量組、丹參片組、模型組和正常組，各組分別按表1中的試藥和相應(yīng)劑量以0.1mL/10g灌胃給藥，每天1次，連續(xù)18天。末次給藥后40 min，萸姜藥效組分（GWZ）高、中、低劑量組、丹參片組和模型組小鼠按0.05 ml/10 g腹腔注射ISO（0.1 mg/mL），正常組小鼠按0.05 ml/10 g腹腔注射NS，20 min后分別將各組小鼠逐只放入盛有10 g鈉石灰的250 ml廣口瓶中（每瓶一只），在瓶口涂抹凡士林以保證廣口瓶密閉，蓋上瓶蓋后立即開始計時，觀察小鼠表現(xiàn)，記錄小鼠的存活時間（以小鼠呼吸停止作為缺氧死亡時間）。結(jié)果見表1。

表1 萸姜藥效組分對小鼠耐缺氧的影響（±s）Tab.1 The effect of composition of Yu-Jiang on mice of normobaric hypoxia

表1 萸姜藥效組分對小鼠耐缺氧的影響（±s）Tab.1 The effect of composition of Yu-Jiang on mice of normobaric hypoxia

注：與模型組比較，*P＜0.05，有顯著性差異

組別　　動物數(shù)（只）劑量（mg/kg）存活時間（秒）GWZ高劑量組8　410　866.0000±102.01821 GWZ中劑量組　9　210　857.7778±142.11771 GWZ低劑量組　9　100　874.2222±110.65914丹參片組　10　150　1153.4000±257.77216*模型組　10　等容量　NS　768.3333±49.18079正常組　10　等容量　NS　912.0000±191.31729*

與模型組比較，萸姜藥效組分的高、中、低劑量對存活時間無顯著影響，而丹參片能明顯延長存活時間，正常組小鼠存活時間長于模型組。

2.3 對ISO致急性心肌缺血小鼠心電圖的影響

取小鼠72只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，每組12只，分別為萸姜藥效組分高、中、低劑量組、丹參片組、模型組和正常組，按表2中的試藥和相應(yīng)劑量以0.1 mL/10g對小鼠灌胃給藥，每天1次，連續(xù)18天。末次給藥40 min后，以25%烏拉坦按0.1 mL/10g給小鼠腹腔注射給藥，麻醉，麻醉小鼠仰臥固定于鼠臺上，連接生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，記錄正常心電圖（II導(dǎo)聯(lián)），待心電圖穩(wěn)定后，萸姜藥效組分高、中、低劑量組、丹參片組、模型組以ISO（0.1 mg/mL）按0.05 mL/10 g給小鼠腹腔注射給藥，正常組按0.05 mL/10 g給小鼠腹腔注射NS，記錄注射后5 min內(nèi)S-T段的平均高度，并與注射ISO前心電圖比較，以S-T段高度變化程度表示心肌缺血的程度。結(jié)果見表2。

表2 萸姜藥效組分對ISO小鼠心電圖的影響（±s）Tab.2 The effect of composition of Yu-Jiang on the mice GWZ of ISO

表2 萸姜藥效組分對ISO小鼠心電圖的影響（±s）Tab.2 The effect of composition of Yu-Jiang on the mice GWZ of ISO

注：與模型組比較，*P＜0.05，有顯著性差異

組別　　動物數(shù)（只）劑量（mg/kg）造模后△T （mv）GWZ高劑量組9　410　0.0200±0.00667 GWZ中劑量組　7　210　0.0233±0.01118 GWZ低劑量組　9　100　0.0245±0.00820丹參片組　12　150　0.0100±0.00816*模型組　12　　等容量　NS　0.0275±0.00707正常組　12　　等容量　NS　0.0178±0.00441*

萸姜藥效組分高、中、低劑量組對ISO致小鼠急性心肌缺血心電圖S-T段改變均無顯著影響，而丹參片組明顯縮小ISO致小鼠急性心肌缺血心電圖S -T段的改變程度。（見圖1、圖2、圖3、圖4）

圖表1a 高劑量組心電圖　注射　ISO前Fig.1a The ECG of high dose group of Yu-Jiang pre-injection ISO

圖1b 高劑量組心電圖　注射　ISO后Fig.1b The ECG of high dose group of Yu-Jiang post-injection ISO

圖　2a 低劑量組心電圖　注射　ISO前Fig.2a The ECG of low dose group of Yu-Jiang pre-injection ISO

圖2b 低劑量組心電圖注射　ISO后Fig.2b The ECG of low dose group of Yu-Jiang post-injection ISO

圖3a 空白組心電圖　注射　ISO前Fig.3a The ECG of blank group of Yu-Jiang pre-injection ISO

圖　3b 空白組心電圖　注射　ISO后Fig.3b The ECG of blank group of Yu-Jiang post-injection ISO

圖4a 陽性組心電圖　注射　ISO前Fig.4a The ECG of positive group of Yu-Jiang pre-injection ISO

圖　4b 陽性組心電圖　注射　ISO后Fig.4b The ECG of positive group of Yu-Jiang post-injection ISO

圖5a 高劑量組心電圖　注射Pit前Fig.5a The ECG of high dose group of Yu-Jiang pre-injection Pit

2.4 對Pit致急性心肌缺血小鼠心電圖的影響

取小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組12只，分別為萸姜藥效組分高、低劑量組、硝苯地平組、模型組和正常組，按表3中的試藥和相應(yīng)劑量以0.1 mL/10 g對小鼠灌胃給藥，每天1次，連續(xù)18天。末次給藥40 min后，以25%烏拉坦按0. 1 mL/10 g給小鼠腹腔注射給藥，麻醉，麻醉小鼠仰臥固定于鼠臺上，連接生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，記錄正常心電圖（II導(dǎo)聯(lián)），待心電圖穩(wěn)定后，萸姜藥效組分高、中、低劑量組、硝苯地平組、模型組以Pit （0.1 mg/mL）按0.05 mL/10 g給小鼠腹腔注射給藥，正常組按0.05 mL/10 g小鼠腹腔注射NS，記錄注射后5 min內(nèi)S-T段的平均高度，并與注射Pit前心電圖比較，以S-T段高度變化程度表示心肌缺血的程度。結(jié)果見表3。

圖5b高劑量組心電圖　注射Pit后Fig.5b The ECG of high dose group of Yu-Jiang post-injection Pit

圖6a 低劑量組心電圖　注射Pit前Fig.6a The ECG of high dose group of Yu-Jiang pre-injection Pit

表3 萸姜藥效組分對Pit小鼠心電圖的影響（±s）Tab.3 The effect of composition of Yu-Jiang on the mice GWZ of Pit

表3 萸姜藥效組分對Pit小鼠心電圖的影響（±s）Tab.3 The effect of composition of Yu-Jiang on the mice GWZ of Pit

注：與模型組比較，*P＜0.05，有顯著性差異

組別　　動物數(shù)（只）劑量（mg/Kg）造模后△T （mv）GWZ高劑量組　9　530　0.0000±0.0039*GWZ低劑量組　10　210　-0.0039±0.0024硝苯地平　9　130　-0.0038±0.0043*模型組　10　　等容量　NS　0.0200±0.0082正常組　12　　等容量NS　0.0104±0.0052*

GWZ高劑量組和硝苯地平組明顯縮小ISO致小鼠急性心肌缺血心電圖S-T段的改變程度，而GWZ低劑量組對Pit致小鼠急性心肌缺血心電圖S-T段改變均無顯著影響。（見圖5、圖6）

圖6b 低劑量組心電圖　注射　Pit后Fig.6b The ECG of high dose group of Yu-Jiang post-injection Pit

3 結(jié)果與討論

小鼠腹腔注射ISO后，可造成小鼠急性心肌缺血。［12，13］本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明各組小鼠腹腔注射ISO前后，小鼠ST-T段均出現(xiàn)改變，T波有顯著高聳，供試藥品組與空白對照組進(jìn)行比較，組分中藥的高、中、低劑量組均不能明顯抑制心肌ST-T的抬高，無顯著性差異，即不能對小鼠急性心肌缺血產(chǎn)生保護(hù)作用。在缺氧實(shí)驗(yàn)中，組分中藥高、中、低劑量組與空白組相比（P＞0.05）無顯著性差異，即不能對小鼠缺氧產(chǎn)生保護(hù)作用。所以干姜、吳茱萸組分對ISO心電圖沒有明顯的影響，即不能對小鼠急性心肌缺血產(chǎn)生保護(hù)作用。

Pit大劑量使用可收縮血管［14-16］，可造成小鼠出現(xiàn)急性心肌缺血。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明各組小鼠腹腔注射Pit注射液前后，小鼠ST-T段均出現(xiàn)改變，T波顯著高聳。與空白對照組比較，組分中藥高、低劑量組均能明顯抑制心肌ST-T的抬高，有顯著性差異，說明干姜、吳茱萸組分中藥對Pit致小鼠心肌急性缺血具有一定的緩解作用。

硝苯地平具有擴(kuò)張血管的作用［17］，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)萸姜藥效組分對Pit致急性心肌缺血小鼠心電圖的影響，表明萸姜藥效組分具有擴(kuò)張血管的作用，為其作用機(jī)制的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

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云雪林（1968-），男，蒙古族，內(nèi)蒙古呼和浩特人，教授。主要研究方向：中藥與民族醫(yī)藥方劑配伍規(guī)律研究。

中圖分類號：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-6125（2016）02-0027-05

收稿日期：2016-03-15

基金項(xiàng)目：貴州省教育廳科研課題重點(diǎn)項(xiàng)目：“萸姜藥效組分方劑配伍研究”（項(xiàng)目編號：黔教科第2010048號）。

作者簡介：覃海龍（1988-），男，貴州興義人，助教、碩士。主要研究方向：中藥及民族醫(yī)藥方劑研究。

Research on the effect of composition of Yu-Jiang on AMI mice

QIN Hai-long，SONG Sheng-wu，YUN Xue-lin*
（Pharmaceutical College of Guiyang college of TCM，Guiyang 550002，China）

Abstract：Objective：To seek the effect of composition of Yu-Jiang on AMI mice.Methods：By intraperitoneal injection of ISO to mice model of normobaric hypoxia and AMI.The effect of mice of normobaric hypoxia and AMI verified the different concentration of the components of Yu-Jiang comparison with Salvia Tablets.By intraperitoneal injection of Pit to mice model of AMI，comparing with Nifedipine Tablets research the different concentration of the components of Yu-Jiang on the mice model of AMI.Results：The results of the two tests showed that compound danshen tablets group can obviously prolong the survival time of mice（P＜0.05），significantly inhibit the rise of ECG S T segment（P＜0.05），Yu-Jiang groups had no obvious effect on the survival time of mice（P＞0.05），and they were not significant impact for ECG（P＞0.05）.The test of AMI mice caused by Pit showed that both the group of Nifedipine Tablets group and high dose group of Yu-Jiang can significantly inhibit the rise of ECG S T segment（P＜0.05），low dose group of Yu-Jiang was not significant impact for ECG（P＞0.05）.Conclusion：The composition of Yu-Jiang have obvious positive effects on the mice model of AMI caused by Pit.

Key words：volatile oil from Dried Ginger；volatile oil from Fructus Evodia；composition；AMI；Pit