謝顯莉 張利

（四川省中江縣農(nóng)業(yè)局 四川中江 618100）

丹參中丹參酮IIA的快速提取方法的研究

謝顯莉 張利

（四川省中江縣農(nóng)業(yè)局 四川中江 618100）

本研究對(duì)影響超聲細(xì)胞粉碎法提取丹參酮ⅡA的多個(gè)因素進(jìn)行研究，以丹參飲片作試材，優(yōu)選料液比、乙醇濃度、顆粒大小、超聲時(shí)間、超聲功率五個(gè)工藝參數(shù)。丹參顆粒為60目，提取溶劑為50%乙醇，超聲功率為1000W，超聲時(shí)間4min，丹參酮ⅡA的最高提取率可達(dá)0.5316%；超聲細(xì)胞粉碎法具有提取效率高、時(shí)間短、能耗低的優(yōu)點(diǎn)，是丹參酮ⅡA提取的有效途徑之一。

超聲細(xì)胞粉碎法；丹參飲片；丹參酮ⅡA；工藝參數(shù)；快速提取

引言

中藥丹參為唇形科（Lamiaceae）鼠尾草屬多年生草本植物丹參（Salvia miltiorrhiza）的干燥根及根莖，是我國(guó)傳統(tǒng)中藥材。丹參有效成分中主要包括水溶性的酚酸類成分和脂溶性的丹參酮類成分。其中脂溶性成分存在于丹參根皮中，具有抑菌、抑制血小板聚集、耐缺氧、改善冠狀動(dòng)脈供血等藥理作用[1]，主要是含菲醌類結(jié)構(gòu)的丹參酮類化合物，代表成分為丹參酮I、丹參酮ⅡA和隱丹參酮。丹參中的丹參酮ⅡA含量較高，該成分也是判斷丹參提取物提取效果和丹參藥材品質(zhì)的重要指標(biāo)[2]。由于丹參酮ⅡA對(duì)光不穩(wěn)定，且受熱易分解[3]，因此傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑浸提法存在著有用量大、耗時(shí)長(zhǎng)、工序多、產(chǎn)率低等問題。超聲波提取法具有提取時(shí)間短、無需加熱、產(chǎn)率高、污染少等優(yōu)點(diǎn)[4～5]。超聲細(xì)胞粉碎儀功率高且可調(diào)節(jié)，相比超聲波清洗器能夠顯著縮短提取時(shí)間，探討功率對(duì)其提取率的影響，得出的最適工藝參數(shù)更具可控性。

本研究通過超聲波細(xì)胞粉碎儀從丹參飲片中提取丹參酮ⅡA，以確定最適的提取工藝，旨在為從丹參飲片中提取丹參酮ⅡA提供一個(gè)優(yōu)良、便捷的提取方法，也為合理開發(fā)利用丹參資源開辟一條新的途徑。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

丹參飲片購(gòu)買于四川天然生中藥飲片有限公司。

丹參酮ⅡA對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110766-200518）；乙醇（分析純，成都科龍化工試劑有限公司）。

1.2 主要儀器

JP99-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；UV-3200PC紫外可見分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）；LC-20A高效液相色譜儀系統(tǒng)（日本島津公司），配備SPD-20A型紫外檢測(cè)器、SIL-20A型自動(dòng)進(jìn)樣器、LC-20AB型輸液泵、CTO-10AS型柱溫箱、DGU-20A3型在線脫氣機(jī)；BT-124s分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；FW-100萬能粉碎機(jī)（天津泰斯特儀器有限公司）；HG-9070電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科技有限公司）；Water Purifier實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)（四川沃特爾科技發(fā)展有限公司）。

1.3 丹參酮ⅡA含量測(cè)定

1.3.1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex C18（250mm×4.6mm，5μm，Torrance，USA）；流動(dòng)相：甲醇：水（75：25）；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm；流速：1.0mL·min-1；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL。理論塔板數(shù)按丹參酮ⅡA 峰不低于2000。

1.3.2 供試品溶液的制備

取丹參飲片置于60℃烘箱中干燥至質(zhì)量恒定，粉碎，過篩，儲(chǔ)于干燥器中備用。精確稱取粉末1.000g于50mL具塞的錐形瓶中，加入適當(dāng)濃度、適當(dāng)體積的乙醇，密封稱量溶液總質(zhì)量并記錄，超聲波提取，靜置至室溫，用乙醇補(bǔ)足減失的重量。提取液搖勻、過濾，定容于25.00mL棕色容量瓶中，用孔徑為0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液，待測(cè)[2]。

1.3.3 樣品測(cè)定

將樣品供試液注入高效液相色譜儀，在色譜條件下進(jìn)行分析，測(cè)得的峰面積代入相應(yīng)線性方程，并轉(zhuǎn)化為濃度單位，并按照以下方程計(jì)算樣品中丹參酮ⅡA的提取率。

式中：Y為丹參酮ⅡA的提取率（%）；C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到丹參酮ⅡA的濃度（μg·mL-1）；N為丹參酮ⅡA的稀釋倍數(shù)；V為供試品溶液的總體積（mL）；m為丹參飲片粉末質(zhì)量。

1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取乙醇濃度（A）、顆粒大小（B）、超聲時(shí)間（C）、超聲功率（D）為因素，以丹參酮ⅡA的提取率為指標(biāo)，進(jìn)行L9（34）正交設(shè)計(jì)。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用正交設(shè)計(jì)助手Ⅱ（專業(yè)版）處理，以優(yōu)選出丹參飲片中丹參酮ⅡA的最佳提取工藝。

2 結(jié)果和分析

在料液比固定為1：10的試驗(yàn)條件下，L9（34）正交試驗(yàn)與分析結(jié)果見表1，方差分析結(jié)果見表2。四因素的極差結(jié)果（表1）表明，影響超聲波提取丹參酮ⅡA提取率的主次因素為：B（顆粒大小）>A（乙醇濃度）>C（超聲時(shí)間）>D（超聲功率），最適提取工藝條件為A1B3C2D2。乙醇濃度對(duì)提取效率影響雖然較大，但由于乙醇濃度為40%和50%時(shí)，提取效率相差不大，考慮到試劑的回收利用，乙醇濃度為50%較為合適。綜合以上分析結(jié)果，以丹參酮ⅡA的提取率為考核指標(biāo)，確定實(shí)際生產(chǎn)工藝條件為A2B3C2D2，即丹參顆粒為60目，提取溶劑為50%乙醇，超聲功率為1000W，超聲時(shí)間為4min。

表1 L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果

表2 方差分析

由于此最佳試驗(yàn)組合未出現(xiàn)在九次試驗(yàn)方案中，經(jīng)驗(yàn)證后丹參酮ⅡA的提取率可達(dá)0.5316%。

3 結(jié)論與討論

超聲細(xì)胞粉碎法提取丹參飲片中丹參酮ⅡA的最適工藝參數(shù)為乙醇濃度50%，顆粒大小60目，超聲時(shí)間4min，超聲功率1000W。該結(jié)果與張瓊引[6]報(bào)道的結(jié)論：以70%乙醇提取4次，30min/次有所差異，主要原因可能在于其使用的是超聲波清洗器，功率較低，而本研究采用超聲細(xì)胞粉碎法提取丹參酮ⅡA，顯著減少提取時(shí)間，并考察了超聲功率對(duì)丹參飲片中丹參酮ⅡA提取率的影響。因此，本研究可為丹參飲片中丹參酮ⅡA的快速提取及含量分析評(píng)價(jià)提供方法參考。通過驗(yàn)證，超聲細(xì)胞粉碎法提取丹參飲片中丹參酮ⅡA取得了較好的效果。

[1]高玉貴，宋玉梅，楊友義，唐冀雪，劉文富.丹參酮的藥理[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，1979，14（2）：75～82.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015.

[3]林恒標(biāo)，林恒寬.丹參酮ⅡA 的穩(wěn)定性研究[J].中醫(yī)研究，2005，18（8）：16.

[4]畢躍峰，賈陸，張小娟，孫孝麗，劉宏民.不同提取方法對(duì)丹參中丹參酮ⅡA和丹酚酸 B 含量測(cè)定的影響[J].藥物分析雜志，2009，29（7）：1209～1212.

[5]Dong J，Liu YB，Liang ZS，Wang WL.Investigation on ultrasound-assisted extraction of salvianolic acid B from Salvia miltiorrhiza root[J].Ultrasonics Sonochemistry，2010，17：61～65.

[6]張瓊引，顧燕.超聲法提取丹參藥材中丹參酮ⅡA的工藝優(yōu)化[J].中南醫(yī)學(xué)，2009，12（7）：918～919.

R284

A

1005-7897（2016）10-0097-02

2016-5-10

謝顯莉，女，四川中江人，農(nóng)藝師，從事經(jīng)濟(jì)作物技術(shù)推廣工作。