張可　齊遵利　戎海新

摘要：為評價光合細(xì)菌在羅非魚養(yǎng)殖過程中使用效果的生物學(xué)指標(biāo)，本試驗(yàn)設(shè)計在養(yǎng)殖羅非魚的水體里添加不同濃度的光合細(xì)菌，通過測定羅非魚酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、溶菌酶（LZM）五種免疫酶活性指標(biāo)，探討在養(yǎng)殖水體里添加光合細(xì)菌對羅非魚的免疫酶活性及生長性能的影響。結(jié)果表明：添加光合細(xì)菌的濃度為10⁴cfu/mL的魚血清的ACP活性顯著高于其他組，光合細(xì)菌的濃度為10⁵cfu/mL的魚血清的AKP活性顯著高于其他組，光合細(xì)菌的濃度為10³cfu/mL的魚血清AST活性顯著高于其他組，光合細(xì)菌的濃度為10⁴cfu/mL和105 cfu/mL添加組的魚血清ALT活性顯著高于其他組，光合細(xì)菌的濃度為10⁴cfu/mL的魚血清的LZM活性顯著高于其他組，且實(shí)驗(yàn)組顯著高于對照組。為推廣光合細(xì)菌在羅非魚養(yǎng)殖過程中提高免疫功能提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：光合細(xì)菌；羅非魚；免疫酶活性

1材料及方法

1.1試驗(yàn)動物

本試驗(yàn)以羅非魚為試驗(yàn)對象，挑選體質(zhì)健壯、體表無傷的羅非魚，平均每條羅非魚的重量為15g左右。

1.2試驗(yàn)設(shè)計

本試驗(yàn)于河北農(nóng)業(yè)大學(xué)渤海校區(qū)實(shí)驗(yàn)育苗室內(nèi)進(jìn)行，水族箱規(guī)格為100 cm×60 cm×50 cm，試驗(yàn)前將水族箱和實(shí)驗(yàn)所用器具用高錳酸鉀浸泡消毒24 h。水體體積為100 cm×60 cm×35 cm，并充分曝氣24 h后將魚放入水族箱中。共16個水族箱，每個水族箱里放25尾魚。待魚適應(yīng)環(huán)境以后開始投喂飼料并正式試驗(yàn)。

試驗(yàn)分為5個處理組，每個試驗(yàn)組設(shè)3個平行，每個水族箱中飼養(yǎng)25尾羅非魚，養(yǎng)殖水體分別添加濃度10³cfu/mL的光合細(xì)菌、10³cfu/mL的光合細(xì)菌、10⁴cfu/mL的光合細(xì)菌、10⁵cfu/mL的光合細(xì)菌、10⁴cfu/mL的光合細(xì)菌，對照組不添加光合細(xì)菌。

1.3日常管理

每天投食兩次，上午8：30、下午14：30各投喂一次，投喂量以多數(shù)魚不攝食為準(zhǔn)。試驗(yàn)期間不換水，每天上午清洗過濾棉。試驗(yàn)期間定時觀察羅非魚的生長及健康狀況，定期往水體里添加菌以保持水體菌的濃度。

1.4試驗(yàn)處理

實(shí)驗(yàn)開始后，在實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)的第30 d采樣，采樣時取其血液，用肝素鈉潤洗注射器后抽取2～3mL的血液，放置冰箱冷凍條件下12 h，然后離心，3 500 r/min離心15 min，取上清液待測。

免疫指標(biāo)的測定為酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、溶菌酶（LZM），均為南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測定，具體操作按其說明書進(jìn)行。采用SPSS19.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，運(yùn)用ANoVA單因素進(jìn)行方差分析及Duncans多重比較對實(shí)驗(yàn)所得出的結(jié)果進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，顯著水平為P<0.05。

2試驗(yàn)結(jié)果

2.1水體添加光合細(xì)菌對羅非魚血清中酸性磷酸酶（AOP）活性的影響

添加光合細(xì)菌的濃度為10⁴cfu/mL的魚血清的ACP活性顯著高于其他組（P

2.2水體添加光合細(xì)菌對羅非魚血清中堿性磷酸酶（AKP）活性的影響

添加光合細(xì)菌的濃度為10⁵cfu/mL的魚血清的AKP活性顯著高于其他組（P<0.05），且實(shí)驗(yàn)組顯著高于對照組。

2.3水體添加光合細(xì)菌對羅非魚血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性的影響

添加光合細(xì)菌的濃度為10³cfu/mL的魚血清AST活性顯著高于其他組（P<0.05），且實(shí)驗(yàn)組顯著高于對照組。

2.4水體添加光合細(xì)菌對羅非魚血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性的影響

添加光合細(xì)菌的濃度為10⁴cfu/mL和10⁵cfu/mL添加組的魚血清ALT活性顯著高于其他組（P<0.05），且實(shí)驗(yàn)組顯著高于對照組。

2.5水體添加光合細(xì)菌對羅非魚血清中溶菌酶（LZM）活性的影響

添加光合細(xì)菌的濃度為10⁴cfu/mL的魚血清的LZM活性顯著高于其他組（P<0.05），且實(shí)驗(yàn)組顯著高于對照組。

3結(jié)論

酸性磷酸酶（ACP）是動物體內(nèi)重要的調(diào)控酶，它可以直接參與血細(xì)胞的包囊和吞噬作用，并能幫助殺死及吞噬病原體。在整個實(shí)驗(yàn)過程中，10⁴cfu/mL添加組中ACP的活性最高，且添加組明顯高于對照組，因此ACP可以作為評價動物免疫功能的指標(biāo)。

堿性磷酸酶（AKP）普遍存在于動植物體內(nèi)，是重要的調(diào)控酶，可直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移與磷酸脂的代謝，可為ADP磷酸轉(zhuǎn)化形成ATP提供更多的必需無機(jī)磷酸，也是動物體內(nèi)重要的解毒體系?？勺鳛樵u價甲殼動物免疫功能的指標(biāo)。在整個實(shí)驗(yàn)過程中，10⁵cfu/mL添加組中ACP的活性最高，且添加效果最為明顯，因此ACP可以作為評價甲殼動物的免疫功能指標(biāo)。

谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）是一種重要的氨基轉(zhuǎn)移酶，廣泛存在于動物組織細(xì)胞中。當(dāng)血清中AST的活性升高或組織內(nèi)AST的活性降低時，即表明動物機(jī)體的肝臟、心臟等內(nèi)臟器官發(fā)生損傷。AST活性變化也是反映肝細(xì)胞受到損傷的主要敏感指標(biāo)。在整個試驗(yàn)階段，10³cfu/mL添加組的羅非魚血清中AST活性最高，顯著高于其他組（P<0.05），且實(shí)驗(yàn)組顯著高于對照組。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）是催化谷氨酸與丙酮酸之間的轉(zhuǎn)氨作用，在肝臟內(nèi)的活力最大的一種酶。存在于很多器官中，對肝臟的蛋白質(zhì)代謝起到樞紐的作用，攝人的糖類、脂肪及其他營養(yǎng)物質(zhì)經(jīng)由轉(zhuǎn)氨基作用轉(zhuǎn)變?yōu)樗璧鞍踪|(zhì)，而轉(zhuǎn)氨基作用最重要的就是需要谷丙轉(zhuǎn)氨酶的催化作用。在整個試驗(yàn)階段，10⁴cfu/mL和10⁵cfu/mL添加組的魚血清ALT活性顯著高于其他組（P<0.05），這兩個添加組無明顯差異（P>0.05），實(shí)驗(yàn)組顯著高于對照組（P<0.01）。

溶菌酶（LZM）是一種堿性蛋白酶，廣泛存在于動物體內(nèi)的某些淋巴組織和體液中。LZM活性的高低，可作為衡量水產(chǎn)動物免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)之一，在一定程度上也能反映出動物機(jī)體的非特異性體液免疫的狀態(tài)。當(dāng)血清中LZM活性提高時，機(jī)體的免疫能力也會相應(yīng)提高。在本試驗(yàn)中，10⁴cfu/mL添加組魚血清的LZM活性最高，且實(shí)驗(yàn)組的溶菌酶活性顯著高于對照組。