董 穎，欒玉靜，杜鴻雁，常 靖，王瑞花

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體液中測定嗎啡含量的不確定度評定

董 穎，欒玉靜，杜鴻雁，常 靖，王瑞花

（公安部物證鑒定中心，北京100038）

摘要：目的 依據(jù)測量不確定度的評定原則，對不確定度的評定方法進行探討，建立液相色譜-質譜聯(lián)用法測定體液中測定嗎啡含量的不確定度分析方法。方法 采用液相色譜-質譜聯(lián)用儀對體液中嗎啡含量檢測的不確定度進行評定，建立該方法測定體液中嗎啡含量不確定度的數(shù)學模型，確定不確定度來源及分量，選擇合理的評定方法，計算出檢測結果的合成標準不確定度和擴展不確定度。結果 當體液中嗎啡含量為224.3 ng/mL時，其擴展不確定度為5.4 ng/mL，k=2。其中，測量重復性對不確定度的影響最大。結論 采用液相色譜-質譜聯(lián)用法測定體液中嗎啡的含量應嚴格控制實驗條件，要多人多次重復測量。

關鍵詞：法醫(yī)毒物分析；嗎啡；不確定度

毒物分析結果往往成為司法判定的重要依據(jù)，其測量不確定度評定與表示具有重要意義。隨著實驗室認可活動的發(fā)展，越來越多的實驗室都具有了方法確認的程序［1-4］，而測量不確定度的評定是其重要內容之一，但是很多實驗室程序規(guī)定與現(xiàn)實脫節(jié)，不確定度的評定方法比較混亂。本文對體液（指血液或尿液）中嗎啡含量測定方法的不確定度評定進行探討，為定量測定生物體液中嗎啡含量的不確定度評定提供參考模型。

1 材料與方法

1.1 主要儀器及試劑

液相色譜-質譜聯(lián)用儀Waters Xevo TQ MS（Wat-ers，美國）；電子天平Sartotius BP210S（Sartotius，徳國）；所用試劑均為色譜純，水為超純水（18.2W）。

1.2 檢測方法

測量方法參照本實驗室IFSC 04-01-04-2011《生物樣品中嗎啡、單乙酰嗎啡的液相色譜檢驗方法》。取生物體液檢材1mL于15mL具塞試管中，加入乙腈，振蕩、離心，分離有機相，濃縮至干，加1mL甲醇或乙腈溶液定容，0.22μ m微孔有機濾膜過濾，供儀器分析。取相應空白體液1mL，添加100ng嗎啡，按上述操作規(guī)程與檢材平行操作。檢材溶液與添加嗎啡的溶液分別進樣3μ L，峰面積各取平均值，以外標峰面積比較法定量。

2 結果與討論

2.1 數(shù)學模型

液相色譜質譜聯(lián)用法測定體液中嗎啡含量的定量數(shù)學模型為：

式中：w —體液中嗎啡的質量分數(shù)，ng/mL；frep—重復性校正因子；

m—添加嗎啡總量，ng；AT—添加色譜峰面積平均值；

Ai—檢材色譜峰面積平均值；V—檢材量，mL。

式中：m —添加嗎啡總量，ng；—嗎啡標準使用液的濃度，ng/mL；

Vi—移取標準使用液的體積，mL。

2.2 不確定度來源分析及量化合成

從測量過程和數(shù)學模型上分析來源并量化合成。

2.2.1 重復性校正因子freprep引入不確定度u（freprep）

來源于測量方法的重復性。取10份檢材，按照1.2項下處理，10次測量平均值為224.3ng/mL，并根據(jù)貝塞爾公式計算標準偏差為7.15。

來源于標準儲備液的制備和標準儲備液稀釋成標準使用液的過程。

2.2.2.1 標準儲備液

稱取嗎啡純品100mg置于100mL 容量瓶中配制成1mg/mL的溶液。

式中：c1—標準儲備液的濃度，mg/mL ；m1—嗎啡純品的質量，g；

V1— 標準儲備液定容體積，mL。

（1）m1引入標準不確定度u （m1）

（2）V1引入標準不確定度u （V1）1）校準對體積的影響u1（V1）：合格的A級100mL容量瓶，依據(jù)JJG196-2006《常用玻璃量器》，最大允差ΔV1為±0.10 mL，假定為矩形分布，則

2.2.2.2 稀釋過程

用100～1000mL可 調 移 液 器 吸 取V2=1mL標準儲備液，置于100mL容量瓶中，稀釋定容。再用100～1000mL可調移液器吸取1mL稀釋液，置于100mL容量瓶中，稀釋定容，制成標準工作液。

（1）100～1000mL可調移液器引入標準不確定度u（V2）

1）校準對體積的影響u1（V2）：已知100～1000mL可調移液器取1000mL樣品時容量允差為±1.0%，取矩形分布，相對標準不確定度為：

將上述V2不確定度分量合成：

（2）100mL容量瓶引入標準不確定度

同u（V1），在重復性校正因子f rep引入不確定度u（f rep）中已考慮，此處不重復計算。

2.2.2.3 合成標準不確定度u（）

2.2.3 生物檢材移取V引入標準不確定度

同u（V2），在重復性校正因子frep引入不確定度u（frep）中已考慮，此處不重復計算。

2.2.4 移取標準使用液Vi引入標準不確定度

同u（V2），在重復性校正因子frep引入不確定度u（frep）中已考慮，此處不重復計算。

2.2.5 合成標準不確定度的計算

表 1 不確定度分量表Table 1 Constituent factors of uncertainty

2.2.6 擴展不確定度的計算

2.2.7 測量結果表示

檢材中嗎啡的含量：（224.3±5.4）ng/mL，k=2

本文以測定體液中嗎啡含量為例，討論了不確定度的主要來源及其各不確定度分量評定方法。分析影響測量不確定度結果的各個因素，比較其對總測量不確定度的貢獻?？梢钥闯觯饕獊碓词菧y量的重復性引起的。因此在嗎啡類案件的檢驗鑒定中，要多人多次重復測量。

參考文獻

［1］ 劉爍，花鋒，唐丹舟，等. 法庭科學實驗室質量控制研究綜述. 刑事技術，2013（2）：3-10.

［2］ 劉爍，董穎，常靖，等. 毒物分析方法的確認.刑事技術，2013（5）：3-6.

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［6］ JJF1001-2011， 通用計量術語和定義.

［7］ JJF1059.1-2012， 測量不確定度評定與表示.

中圖分類號：DF795.1

文獻標識號：A

文章編號：1008-3650（2016）01-0054-03

收稿日期：2014-12-22

基金項目：“十二五”國家科技支撐計劃課題（2012BAK02B02）

作者簡介：董 穎，副研究員，碩士，研究方向為毒物分析。 E-mail： dy@cifs.gov.cn

Evaluation of Measurement Uncertainty for the Determination of Morphine in body Fluids

DONG Ying，LUAN Yujing，DU Hongyan，CHANG Jing，WANG Ruihua （Institute of Forensic Science， Ministry of Public Security， Beijing 100038， China）

ABSTRACT：Objective To evaluate the measurement uncertainty for the determination of morphine content in body fl uids because of its great signifi cance in the fi eld of forensic toxicology. Methods A mathematical model of uncertainty evaluation was designed for the determination results of morphine in body fl uids performed with liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The various sources and quantity of uncertainty were determined by the established mathematical model. A reasonable evaluation method was selected to calculate the combined standard uncertainty and expanded uncertainty. Results The expanded uncertainty of 5.4 ng/Ml （k=2） was derived with 224.3 ng/mL of morphine. The repeatability of detection was regarded as the major source of uncertainty of measurement. Conclusions It is necessary and important to control experimental conditions strictly and perform repeated measurements by different people to ensure the accuracy of the testing results.

KEY WORDS：forensic toxicology；morphine；uncertainty of measurement