王　金，王　芳，王小平，白吉慶，胡錦蘋，黎　丹，王亞恒

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)，咸陽　712046)

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產(chǎn)地對連翹葉中木脂素和黃酮類成分含量的影響

王金，王芳，王小平*，白吉慶，胡錦蘋，黎丹，王亞恒

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)，咸陽712046)

摘要：目的比較產(chǎn)地對連翹葉中木脂素類成分和黃酮類成分含量的影響。方法采用高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地連翹葉中蘆丁、連翹酯苷A和連翹苷的含量，以4 mL·L-1冰醋酸-乙腈為流動相，梯度洗脫，檢測波長為277 nm，柱溫為25 ℃，流速為1.0 mL·min-1。結(jié)果不同產(chǎn)地連翹葉中蘆丁、連翹酯苷A和連翹苷的含量差異較大。黃酮類成分，以湖北和陜西產(chǎn)的連翹葉中蘆丁含量較高，高達(dá)1.1% 以上；木脂素類成分，以湖北、陜西和河南產(chǎn)的連翹葉中連翹酯苷A和連翹苷含量較高，分別高達(dá)3.0%和1.0%以上。而江西產(chǎn)的連翹葉中蘆丁、連翹酯苷A和連翹苷的含量普遍較低。結(jié)論產(chǎn)地對連翹葉中木脂素類成分和黃酮類成分的含量影響顯著。

關(guān)鍵詞：連翹葉；蘆??；連翹酯苷A；連翹苷；產(chǎn)地

連翹葉為木犀科植物連翹Forsythiasuspense(Thunb.) Vahl的干燥葉;夏、秋季采收，鮮用或曬干;具有清熱解毒之功效[1];與連翹的化學(xué)成分基本相同[2-3]。連翹葉資源豐富，在我國陜西、河南、河北和山西等地常用連翹嫩葉制成保健茶飲用，具有良好的保健價值。現(xiàn)代藥理研究表明，連翹葉具有保肝、抑菌、降血糖、抗氧化、抗衰老和抑制癌細(xì)胞增殖等多種生物活性[4-11]，具有廣闊的開發(fā)前景。本實(shí)驗(yàn)以蘆丁、連翹酯苷A和連翹苷的含量為指標(biāo)，對不同產(chǎn)地連翹葉中木脂素和黃酮類成分的含量進(jìn)行比較，為連翹葉的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1儀器101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京科偉永興儀器設(shè)備有限公司)；賽多利斯BT125D型雙量程電子分析天平(賽多利斯股份有限公司)；戴安UltiMate 3000 全自動高效液相色譜儀(賽默飛世爾科技有限公司)。

1.2試藥連翹苷(批號110821-200711)、蘆丁(批號080-9705)、連翹酯苷A(批號111810-201103)均由中國藥品生物制品檢定研究院提供；連翹葉分別在同一時期采集于山西、江西、河南、湖北和陜西等地，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)白吉慶副教授鑒定為木犀科植物連翹Forsythiasuspense(Thunb.) Vahl的葉；液相用乙腈為色譜純；水為純化水；冰醋酸等試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1藥材處理將采摘的連翹葉在60 ℃干燥至水分低于10.0%，取出，備用。

2.2對照品溶液的制備分別精密稱取連翹苷對照品2.00 mg、蘆丁對照品 2.70 mg和連翹酯苷A對照品4.75 mg，置于25 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.3供試品溶液的制備取連翹葉粉末(過四號篩)0.3 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇15 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取40 min，冷卻至室溫，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4連翹葉中連翹苷、蘆丁和連翹酯苷A的分析色譜條件：采用HPLC法。色譜柱為Hypersil GOLD C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);4 mL· L-1冰醋酸-乙腈為流動相。梯度洗脫(0～8 min，10%～15%乙腈；8～18 min，15%～22%乙腈；18～25 min，22%～40%乙腈；25～30 min，40%～95%乙腈；30～35 min，95%～95%乙腈)。流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為277 nm，柱溫為25 ℃。理論塔板數(shù)按照連翹酯苷A計(jì)算應(yīng)不低于5 000。分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液適量，在上述色譜條件下進(jìn)樣，色譜圖見圖1。

圖1對照品和樣品的HPLC圖

A.對照品；B.樣品；1.蘆??；2.連翹酯苷A； 3.連翹苷

Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances and samples

A.reference substances； B.sample；1.rutin；2.forsythiaside A； 3.phillyrin

分別精密吸取上述對照品溶液1，2，4，5，7，8和10 μL，注入液相色譜儀，按照上述色譜條件分析測定，每個體積進(jìn)樣2 次，記錄各對照品的峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以對照品質(zhì)量(μg)為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y蘆丁=11.462X-0.196 2，r=0.999 9；Y連翹酯苷A=8.199 2X-0.018 9，r=0.999 9；Y連翹苷=6.914 3X+0.037，r=0.999 9。結(jié)果表明，蘆丁在0.108～1.08 μg、連翹酯苷A在0.19～1.90 μg、連翹苷在0.08～0.80 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5方法學(xué)考察

2.5.1精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述對照品溶液5 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果蘆丁、連翹酯苷A和連翹苷峰面積的RSD分別為1.08%，1.13%和1.09%，表明儀器精密度良好。

2.5.2穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液(陜西省銅川市)，在0，2，5，8，10，12，15和20 h 分別進(jìn)樣3 μL，測得蘆丁、連翹酯苷A和連翹苷峰面積的RSD分別為0.99%，0.82%和0.56%，表明供試品溶液中各待測成分在20 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一連翹葉粉末(陜西省銅川市，過四號篩)0.3 g，5份，精密稱定，按照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣3 μL，結(jié)果蘆丁、連翹酯苷A和連翹苷含量的RSD分別為1.04%，1.27%和1.51%。表明重復(fù)性良好。

2.5.4加樣回收率實(shí)驗(yàn)稱取6份已知含量的同一連翹葉粉末(陜西省銅川市，過四號篩)0.15 g，精密稱定，分別加入適量的蘆丁對照品、連翹酯苷A對照品和連翹苷對照品。按照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定，結(jié)果見表1。

表1連翹葉中蘆丁、連翹酯苷A、連翹苷加樣回收實(shí)驗(yàn)

Tab.1 Recovery test of rutin，forsythiaside A and phillyrin inForsythiasuspensaleaves

分析成分取樣量/g樣品中含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%蘆丁0.150101.761.613.3397.750.150041.761.613.3196.550.150151.761.613.3095.850.150211.761.613.3598.920.149981.751.613.2995.360.150011.761.613.3297.2096.941.34連翹酯苷A0.1501013.5212.0225.5299.800.1500413.5212.0225.4999.580.1501513.5312.0225.4699.250.1502113.5312.0225.5399.830.1499813.5112.0225.2797.840.1500113.5212.0225.56100.1799.410.83連翹苷0.150104.894.239.0999.290.150044.894.239.0899.050.150154.894.239.0498.110.150214.904.238.9996.690.149984.894.239.0598.350.150014.894.239.1199.7698.541.11

2.6結(jié)果精密吸取上述供試品溶液適量，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果見表2。

表2不同產(chǎn)地連翹葉中主要成分含量測定結(jié)果

Tab.2 The contents of lignan and flavonoid constituents ofForsythiasuspensaleaves from different origins

(n=3)

3討論

本實(shí)驗(yàn)采用不同的提取溶劑和提取方法，對供試品溶液的制備方法進(jìn)行考察，結(jié)果顯示，采用甲醇超聲提取40 min，蘆丁、連翹酯苷A和連翹苷的提取率較高。故本實(shí)驗(yàn)采用甲醇超聲提取40 min。通過對流動相的選擇，比較了甲醇-水、甲醇-4 mL·L-1冰醋酸溶液、4 mL·L-1冰醋酸-乙腈和乙腈-水的不同體系的等度和梯度洗脫，結(jié)果以4 mL·L-1冰醋酸-乙腈作為流動相，梯度洗脫時，所得色譜圖基線平直，各待測成分的色譜峰分離度良好。

課題組研究發(fā)現(xiàn)，連翹葉中的木脂素類成分和黃酮類成分的含量和連翹葉的外觀顏色密切相關(guān)，當(dāng)連翹葉的顏色鮮綠時，上述成分的含量較高，當(dāng)連翹葉因沒有及時干燥而褐變時，上述成分的含量降低，且含量降低的程度與連翹葉的褐變程度呈正相關(guān)。這可能與連翹葉中存在的某種酶有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。

測定結(jié)果表明，不同產(chǎn)地連翹葉中蘆丁、連翹酯苷A和連翹苷的含量差異較大。湖北和陜西產(chǎn)的連翹葉中蘆丁、連翹酯苷A和連翹苷的含量較高，分別高達(dá)1.0%，4.0%和1.0%以上，約為江西和山西產(chǎn)的連翹葉10倍以上。為了確保連翹葉的質(zhì)量，必須建立連翹種植基地，而本研究為種植基地的選擇提供了依據(jù)。

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基金項(xiàng)目：科技部項(xiàng)目(編號：11C26216103652)；工業(yè)和信息化部項(xiàng)目(編號：[2012]369號)； 陜西省科技廳項(xiàng)目(編號：2014K14-01-01)

作者簡介：王金，女，碩士研究生

*通信作者：王小平，女，博士后，教授，碩士研究生導(dǎo)師

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.04.002

中圖分類號：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1004-2407(2016)04-0334-03

(收稿日期：2015-12-11)

Effect of the origin on the content of lignan and flavonoid constituents of Forsythia suspensa leaves

WANG Jin，WANG Fang，WANG Xiaoping*，BAI Jiqing，HU Jinping，LI Dan，WANG Yaheng

(Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China)

Abstract:Objective To compare the contents of lignan and flavonoid constituents of Forsythia suspensa leaves from different origins.Methods HPLC was used to determine the contents of rutin，forsythiaside A and phillyrin of Forsythia suspensa leaves from different origins.The mobile phase was 4 mL·L-1glacial acetic acid-acetonitrile，the detection wavelength was 277 nm，the column temperature was 25 ℃,and the flow rate was 1.0 mL·min-1．Results The contents of rutin，forsythiaside A and phillyrin were significantly different in Forsythia suspensa leaves from different origins.As for the contents of flavonoids，the contents of rutin in Forsythia suspensa leaves from Hubei and Shaanxi were more than 1.1%.As for the contents of lignan，the contents of forsythiaside A and phillyrin in Forsythia suspensa leaves from Hubei，Shaanxi and Henan were as high as 3.0% and 1.0%.The contents of rutin，forsythiaside A and phillyrin were generally low from Jiangxi.Conclusion The origin has a significant impact on the contents of lignan and flavonoid constituents of Forsythia suspensa leaves.

Key words：Forsythia suspensa leaves；rutin；forsythiaside A；phillyrin；origin