周鳳華，程賽博，張宇，張蕾，賈鈺華，趙丹丹，蘇志杰

（南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣州 510515）

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黃連解毒湯通過調(diào)節(jié)性T細(xì)胞產(chǎn)生抗動脈粥樣硬化作用

周鳳華，程賽博，張宇，張蕾，賈鈺華，趙丹丹，蘇志杰

（南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣州 510515）

【摘要】目的 觀察黃連解毒湯（HLJDD）對ApoE-/-小鼠斑塊、炎癥因子及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）的影響。方法 高脂飼料喂養(yǎng)雄性ApoE-/-小鼠建立動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）模型，40只雄性ApoE-/-小鼠隨機(jī)分為：模型組，辛伐他汀組，HLJDD高、中、低劑量組（n=8）。HLJDD灌胃劑量依次為：每日3.5、7.0、14.0 g/（kg ·bw），辛伐他汀灌胃劑量為每日5 g/（kg·bw），另設(shè)8只同齡雄性C57BL/6J小鼠為對照組，喂以普通飼料，連續(xù)給藥16周后處死小鼠。檢測血脂水平，觀察主動脈斑塊形成情況；ELISA法檢測血清炎癥因子水平；流式細(xì)胞術(shù)檢測Tregs數(shù)量；RT-PCR法檢測Foxp3 mRNA水平。結(jié)果 與對照組相比，模型組中主動脈斑塊明顯，TC、TG與LDLC濃度顯著升高，促炎因子超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、白介素-6（IL-6）與腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平顯著升高，而HDL-C、白介素-10（IL-10）、生長轉(zhuǎn)化因子-β（TGF-β）、Foxp3 mRNA水平顯著降低，Tregs數(shù)量減少，二者差異有顯著性（P＜0.01）；HLJDD能顯著縮小主動脈斑塊面積，降低血清TC、TG與LDL-C，并降低IL-6、hs-CRP與TNF-α水平，增加血清HDL-C、IL-10、TGF-β及Foxp3 mRNA水平，并增加Tregs數(shù)量，與模型組相比差異有顯著性（P＜0.01）。結(jié)論 HLJDD可顯著減輕ApoE-/-小鼠主動脈斑塊損傷，可能與增加Tregs數(shù)量，從而降低血清炎癥因子水平有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】動脈粥樣硬化；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；黃連解毒湯；白介素-10；生長轉(zhuǎn)化因子-β；小鼠

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是多數(shù)心腦血管疾病的共同病理基礎(chǔ)，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。目前普遍認(rèn)為，AS是發(fā)生在全身大中彈性動脈的慢性炎癥性病變，免疫反應(yīng)貫穿了AS發(fā)生發(fā)展的全過程。調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞（CD4+CD25+T regulatory cells，Tregs）是一類特殊亞群的T細(xì)胞，主要通過分泌白介素-10與轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）抑制炎癥反應(yīng)。已有研究證實(shí)，Tregs能顯著延緩AS進(jìn)展，但其機(jī)制尚未闡明［1］。

黃連 解毒湯 （HuanglianJieduDecoction，HLJDD）出自《外臺秘要》，主要由黃連、黃柏、梔子、黃芩四味中藥組成，具有清熱解毒之功效。研究表明，HLJDD能顯著調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，對熱毒熾盛型感染性疾病療效較好［2］。中醫(yī)認(rèn)為熱毒是AS的主要病理矛盾，因而清熱解毒法是治療AS性疾病的主要中醫(yī)治法。本研究采用高脂喂養(yǎng)ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠建立 AS模型，主要觀察HLJDD對AS小鼠血脂、斑塊及Tregs的影響，初步探討HLJDD防治AS的藥理機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動物及飼料

6周齡SPF級雄性ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠40只，同周齡C57BL/6J雄性小鼠8只，均由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物公司提供【SCXK（京）2012-0001】。高脂飼料配方：78.85%基礎(chǔ)飼料+ 0.15%膽固醇 +21%脂肪，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供【SCXK（粵）2013-0002】。動物實(shí)驗(yàn)在南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心完成【SYXK（粵）2011-0074】。

1.2 藥物與試劑

黃連解毒湯水煎劑由黃連、梔子、黃芩、黃柏組成（3∶3∶2∶2），南方醫(yī)院藥劑科代煎；辛伐他汀片購自杭州默沙東公司；血清甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑盒均購自南京建成生物公司；超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、白介素-6（IL-6）與腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、IL-10與TGF-β試劑盒均購自武漢華美生物公司；TRIzol、TaqMan Universal PCR Master Mix、TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit、TaqMan MicroRNA Assays（Takara，日本）購自大連寶生物公司。

1.3 儀器

酶標(biāo)定量測定儀（德國Thermo公司）、低溫高速離心機(jī)（美國Thermo公司）、Leica超低溫冰箱（美國Revco公司）、L420臺式低速自動平衡離心機(jī)（湘儀儀器有限公司）、PL303電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）、SDS電泳系統(tǒng)（北京君意東方有限公司）、Image Station 2000 MM成像系統(tǒng)（美國Kodak公司）、實(shí)時熒光定量PCR儀（德國Roche公司）。

1.4 方法

1.4.1 小鼠分組及AS模型建立

40只ApoE-/-小鼠隨機(jī)分為模型組，辛伐他汀組，HLJDD低、中、高劑量組，每組8只，高脂飼料喂養(yǎng)12周后開始藥物干預(yù)。HLJDD組灌胃劑量依次為每日3.5、7.0、14.0 g/（kg·bw），辛伐他汀灌胃劑量為5 mg/（kg·d），模型組每日給予等體積生理鹽水灌胃，藥物連續(xù)干預(yù)16周。另取8只同周齡C57BL/6J雄性小鼠作為對照組，普通飼料喂養(yǎng)。

1.4.2 標(biāo)本采集及處理

實(shí)驗(yàn)第29周處死小鼠，心臟穿刺采集血液標(biāo)本，離心分離血清，檢測小鼠血脂水平；取主動脈弓制作病理切片，HE染色觀察血管內(nèi)斑塊；另每組取三條主動脈進(jìn)行油紅O染色，觀察整條主動脈的斑塊形成情況；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測各組小鼠Tregs數(shù)量。

1.4.3 ELISA法測血漿炎癥因子水平

分離小鼠血漿，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，分別計算各組小鼠IL-6、hs-CRP、TNF-α、IL-10及TGF-β濃度。

1.4.4 RT-PCR檢測

Foxp3及內(nèi)參引物由上海Invitrogen公司合成純化。Foxp3上游引物序列為5’-ATGAAGAGCCTGCCTT GGTA-3’，下游引物序列為5’-CCAGATGTTGTGGGTGAGTG-3’；β-actin上游引物5’-CTGTCCCTGTATGCCTCTG-3’，下 游5’-ATGTCACGCACGATTTCC-3’。提取血管總RNA，并采用瓊脂糖凝膠電泳檢測其質(zhì)量。合成cDNA：反應(yīng)體系由14 μL模板RNA，2 μL enzyme mix以及5×RT緩沖液4 μL組成，42℃反應(yīng)1 h，95℃反應(yīng)5 min，即可得cDNA。RT-PCR：反應(yīng)體系分別為：cDNA 1 μL、2× PCR反應(yīng)混合物10 μL、引物0.5 μL、H2O 7.5 μL 及20×SYBR 1 μL。95℃反應(yīng) 10 min，再轉(zhuǎn)向（95℃ 10 s、60℃ 1 min）共40個循環(huán)。目的基因與內(nèi)參基因的相對表達(dá)量用2-△△CT表示，重復(fù)3次。

1.5 統(tǒng)計分析

采用SPSS20.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。對符合正態(tài)分布和方差齊性的數(shù)據(jù)，采用one-way ANOVA方法分析；若不符合正態(tài)分布和方差齊性，則采用秩和檢驗(yàn)。檢驗(yàn)顯著性水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 小鼠體重及血脂

實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)對照組小鼠精神最佳，進(jìn)食與活動量均正常，毛色有光澤。而模型組小鼠精神狀態(tài)較差，進(jìn)食量大，活動量小，體重增長最顯著，毛發(fā)稀疏，缺少光澤。藥物干預(yù)組小鼠精神較好，體重增加比模型組小，毛發(fā)有光澤。比較各組血脂水平發(fā)現(xiàn)，模型組TG、TC與LDL-C增高，HDL-C明顯降低，與對照組相比差異有顯著性（P＜0.01，表1）。辛伐他汀與HLJDD各組TG、TC與LDL-C有所降低，相反HDL-C濃度增加，其中，辛伐他汀與HLJDD高劑量組效果最明顯，與模型組相比差異有顯著性（P＜0.01，表1）。提示，HLJDD湯具有ApoE-/-小鼠調(diào)節(jié)血脂的功效。

表1 各組小鼠體重及血脂水平（±s，n=8，mmol/L）Tab.1 Body weight and level of blood lipoproteins in the mice

表1 各組小鼠體重及血脂水平（±s，n=8，mmol/L）Tab.1 Body weight and level of blood lipoproteins in the mice

注：與模型組比較，#P＜0.01，與對照組比較，*P＜0.01。Note.Compared with the model group，#P＜0.01；Compared with the control group，*P＜0.01.

組別Groups　　體重/g Body weight總膽固醇TC低密度脂蛋白膽固醇LDL-C高密度脂蛋白膽固醇HDL-C血清甘油三酯TG對照組Control　31.32±2.87#　4.98±0.57#　0.92±0.06#　1.88±0.37#　2.18±0.25#模型組Model　43.85±6.24*　28.65±3.74*　4.33±0.25*　0.31±0.09*　24.01±2.20*HLJDD Low dose　40.49±3.77*　22.65±2.68*　3.21±0.37*　0.56±0.12*　18.79±1.97*HLJDD moderate dose　38.52±5.38*　17.53±3.52#*　1.98±0.34#*　0.83±0.21#*　14.72±1.26#*HLJDD High dose　35.13±4.26#　13.65±3.21#*　1.51±0.26#*　1.29±0.17#*　10.85±1.03#*辛伐他汀組Simvastatin　41.48±4.07*　15.88±1.99#*　1.49±0.31#*　1.25±0.23#*　13.14±0.85#*

2.2 病理形態(tài)學(xué)

對ApoE-/-小鼠整條主動脈進(jìn)行油紅 O染色發(fā)現(xiàn)，對照組小鼠主動脈內(nèi)膜光滑，無明顯斑塊形成，而模型組小鼠主動脈內(nèi)膜出現(xiàn)多處肉眼可見的斑塊，尤其是主動脈弓及分叉處。辛伐他汀及HLJDD組斑塊有所減輕，斑塊占主動脈的比例也顯著低于模型組（P＜0.01，表2與圖1）。主動脈弓處的石蠟切片顯示，辛伐他汀與HLJDD高劑量組斑塊面積顯著小于模型組，差異有顯著性（P＜0.01，表2與圖2）。說明HLJDD與辛伐他汀都能顯著抑制AS斑塊發(fā)展，從而延緩AS進(jìn)程。

2.3 炎癥因子水平

模型組hs-CRP、IL-6與TNF-α水平較對照組顯著升高，辛伐他汀與HLJDD中、高劑量能顯著降低hs-CRP、IL-6與TNF-α水平，與模型組相比差異有顯著性（P＜0.01，表3），HLJDD高劑量組與辛伐他汀組差異無顯著性（P＞0.05）。提示HLJDD具有較好的抗炎作用。

2.4 Tregs數(shù)量及IL-10與TGF-β水平

與對照相比，模型組 Tregs數(shù)量顯著降低，HLJDD中、高劑量組顯著增加了Tregs數(shù)量，差異有顯著性（P＜0.01，表4）。分析各組小鼠IL-10與TGF-β水平發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠IL-10與TGF-β濃度較對照組顯著降低，HLJDD高劑量組顯著提高兩者水平，與其他組相比差異均有顯著性（P＜0.01）。而模型組Tregs表面特異性標(biāo)記物Foxp3 mRNA水平顯著低于對照組，HLJDD能顯著增加Foxp3 mRNA水平，增加 Tregs數(shù)量。提示 HLJDD能增加Tregs數(shù)量，并促進(jìn)其分泌IL-10與TGF-β，發(fā)揮其抗炎作用。

注：A：對照組；B：模型組；C：辛伐他汀組；D：HLJDD低劑量組；E：HLJDD中劑量組；F：HLJDD高劑量組。圖1 各組主動脈斑塊油紅O染色Note.Groups as follows：A：control；B：model；C：simvastatin；D：HLJDD low dose，E：HLJDD moderate dosw；F：HLJDD high dose.Fig.1 Atherosclerotic plaques in the mouse aortas Oil red O staining

圖2 各組主動脈斑塊石蠟切片染色（分組同上，×200）Fig.2 The atherosclerotic plaques in the mice aortas（groups as the above，HE staining×200）

表2 各組小鼠主動脈斑塊面積比例（±s，n=8）Tab.2 Ratios of plaque area in the mouse aortas

表2 各組小鼠主動脈斑塊面積比例（±s，n=8）Tab.2 Ratios of plaque area in the mouse aortas

注：與模型組比較，#P＜0.01，與對照組比較，*P＜0.01。Note.Compared with the model group，#P＜0.01；Compared with the control group，*P＜0.01.

主動脈弓Aortic arch/%對照組Control　0　0模型組Model　33.19±5.35*　42.73±8.62*HLJDD低組HLJDD low dose　18.43±6.72*　28.65±2.68#*HLJDD中組HLJDD moderate dose　14.26±4.22#*　20.36±4.82#*HLJDD高組HLJDD high dose　10.37±3.43#*　15.94±3.57#*辛伐他汀組Simvastatin　17.50±4.03#*　33.18±5.44*組別Groups主動脈Aorta/%

表3 各組小鼠血清炎癥因子水平（±s，n=8，ng/mL）Tab.3 The levels of serum inflammation factors in the mice

表3 各組小鼠血清炎癥因子水平（±s，n=8，ng/mL）Tab.3 The levels of serum inflammation factors in the mice

注：與模型組比較，#P＜0.01，與對照組比較，*P＜0.01。Note.Compared with the model group，#P＜0.01；Compared with the control group，*P＜0.01.

組別Groups　hs-CRP　IL-6　TNF-α對照組Control　132.73±6.22#　159.62±8.93#　55.08±4.36#模型組Model　296.52±10.43*　427.58±15.33*　163.24±7.56*HLJDD低組Low dose HLJDD　233.71±7.58*　379.32±18.44*　134.39±7.27*HLJDD中組Moderate dose HLJDD　198.52±9.34*　291.49±13.26#*　118.71±5.74#*HLJDD高組High dose HLJDD　166.13±6.73#　213.70±15.63#　73.51±8.23#辛伐他汀組Simvastatin　158.32±9.07#　186.53±10.19#　82.45±6.35#

表4 各組小鼠Tregs數(shù)量及IL-10與TGD-β水平（±s，n=8，ng/mL）Tab.4 The serum levels of IL-10，TGFβ and Tregs in the mice

表4 各組小鼠Tregs數(shù)量及IL-10與TGD-β水平（±s，n=8，ng/mL）Tab.4 The serum levels of IL-10，TGFβ and Tregs in the mice

注：與模型組比較，#P＜0.01，與對照組比較，*P＜0.01。Note.Compared with the model group，#P＜0.01；Compared with the control group，*P＜0.01.

組別Groups　Tregs/%　IL-10　TGF-β　Foxp3/β-actin對照組Control　9.64±0.59#　295.34±12.66#　421.26±18.65#　0.38±0.09#模型組Model　4.85±0.27*　98.16±15.48*　148.37±10.59*　0.16±0.05*HLJDD低組Low dose HLJDD　5.57±0.42*　132.53±8.62*　230.19±17.72*　0.20±0.05*HLJDD中組Moderate dose HLJDD　6.99±0.36#*　198.49±13.82#*　331.82±11.46#*　0.25±0.06#*HLJDD高組High dose HLJDD　8.76±0.48#　261.73±15.25#　378.15±15.67#　0.34±0.04#辛伐他汀組Simvastatin　8.19±0.37#*　234.58±10.93#*　362.91±18.18#　0.28±0.07#*

3 討論

本研究以高脂飲食喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠復(fù)制AS模型，以HLJDD高中低劑量連續(xù)干預(yù)小鼠16周，檢測小鼠血脂、主動脈斑塊、炎癥因子水平及Tregs數(shù)量與功能。通過分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們得出以下結(jié)論：（1）HLJDD能顯著降低 ApoE-/-小鼠 TC、TG與LDL-C水平，增高HDL-C水平，具有顯著調(diào)節(jié)血脂水平的作用；（2）HLJDD能顯著縮小主動脈處的斑塊面積，降低小鼠血清炎癥因子 hs-CRP、IL-6與TNF-α水平，通過抗炎機(jī)制來延緩AS斑塊進(jìn)展；（3）ApoE-/-小鼠 Tregs數(shù)量顯著降低，IL-10與TGF-β分泌減少，HLJDD顯著增加Tregs數(shù)量，促進(jìn)Tregs分泌IL-10與TGF-β，從而起到抗炎作用。

免疫反應(yīng)貫穿于AS全過程，并在其中起到重要作用，通過調(diào)節(jié)免疫功能可起到防治 AS的功效［3］。Tregs是一類特殊類型的T細(xì)胞，在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)平衡及控制自身免疫性疾病的進(jìn)展中具有重要作用。ApoE-/-小鼠體內(nèi)Tregs的數(shù)量和功能均明顯低于正常C57BL/6J小鼠，而且隨著AS的進(jìn)展，Tregs的數(shù)量及其特異性標(biāo)志物Foxp3的表達(dá)、分泌的TGF-β水平都顯著下降［1，4］。ACS患者人群外周血中Tregs的數(shù)量也明顯低于健康人群，而且Tregs數(shù)量的降低伴隨人類AS發(fā)生和發(fā)展的各個階段［5，6］。因此，內(nèi)源性Tregs的數(shù)量和功能降低與AS的發(fā)生關(guān)系密切。在ApoE-/-小鼠中給予Tregs治療可有效阻止小鼠斑塊內(nèi)T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤，顯著降低斑塊面積，從而阻止早期AS形成［7］。本實(shí)驗(yàn)中，模型組Tregs數(shù)量顯著低于對照組，而由其分泌的IL-10及TGF-β水平也顯著降低，這與文獻(xiàn)結(jié)果一致，說明AS小鼠體內(nèi)呈現(xiàn)低水平的Tregs。而HLJDD高劑量可顯著增加Tregs數(shù)量，促進(jìn)其分泌抗炎因子IL-10及TGF-β，從而減輕AS斑塊的炎癥反應(yīng)，延緩AS斑塊進(jìn)展。這些結(jié)果都提示，對維持體內(nèi)免疫穩(wěn)態(tài)起重要作用的Tregs同樣可以在抗AS方面發(fā)揮重要作用，通過提高體內(nèi)Tregs的數(shù)量和功能，可有效抑制T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，最終逆轉(zhuǎn)AS斑塊進(jìn)程［8］。

雖然AS的病理機(jī)制十分復(fù)雜，但學(xué)者們普遍認(rèn)為AS是一種慢性炎癥性疾病，炎癥反應(yīng)是AS斑塊形成、發(fā)展和最終破裂的關(guān)鍵環(huán)節(jié)［9］。炎癥的作用主要依賴于炎癥細(xì)胞的浸潤和促炎因子如TNF-α、IL-6、hs-CRP等的產(chǎn)生和釋放。效應(yīng)性T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞直接參與AS的炎癥過程，產(chǎn)生大量促炎因子，而Tregs抑制T細(xì)胞的活化及其從外周組織向AS斑塊的遷移［10］。TNF-α、IL-6與hs-CRP等促炎因子無論在AS病人或ApoE-/-小鼠血清中均呈現(xiàn)較高的水平，它們也是炎癥的血清標(biāo)記物，通過檢測其濃度可快速了解機(jī)體炎癥反應(yīng)的程度。而主要由Tregs分泌的IL-10與TGF-β具有顯著的抗炎作用，能有效抑制由促炎因子所激發(fā)的炎癥反應(yīng)，維持體內(nèi)免疫功能的正常與穩(wěn)定。IL-10可抑制IL-1、IL-6、TNF-α、ICAM-1等炎癥因子的合成和釋放，并促進(jìn)其他抗炎因子的產(chǎn)生。IL-10在AS的形成和穩(wěn)定性方面起到重要的保護(hù)作用，IL-10的缺失可加速AS的發(fā)展，促進(jìn)血栓形成和斑塊不穩(wěn)定［11］。LDLR-/-小鼠體內(nèi)過表達(dá)IL-10后，小鼠體內(nèi)AS病變則受到明顯抑制［12］。TGF-β信號通路的抑制則會誘導(dǎo)T細(xì)胞的活化及向Thl、Th2細(xì)胞分化，相應(yīng)降低Tregs的細(xì)胞數(shù)量，減少其表面Foxp3的表達(dá)，同時減弱Tregs的抑制功能［13］。因此，TGF-β在維持Tregs的數(shù)量和功能方面也發(fā)揮了關(guān)鍵作用。研究表明，TGF-β抑制斑塊內(nèi)炎癥細(xì)胞的浸潤，促進(jìn)膠原的合成和平滑肌細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑；反之，TGF-β信號通路的缺失則加重斑塊內(nèi)炎癥反應(yīng)，促進(jìn)膠原降解，從而誘導(dǎo)斑塊不穩(wěn)定［14］。

我們的結(jié)果也顯示，ApoE-/-小鼠血清TNF-α、IL-6與hs-CRP水平顯著高于正常的C57BL/6J小鼠，提示ApoE-/-小鼠體內(nèi)存在較高水平的炎癥反應(yīng)。HLJDD與辛伐他汀均能顯著降低小鼠炎癥因子水平，辛伐他汀的抗炎效果明顯優(yōu)于中藥HLJDD，但HLJDD調(diào)節(jié)Tregs數(shù)量及功能的作用顯著優(yōu)于辛伐他汀，說明HLJDD抗AS功效部分是通過對Tregs的調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)的，但HLJDD如何調(diào)控Tregs數(shù)量及功能尚需要進(jìn)一步研究。

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【中圖分類號】Q95-33

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1005-4847（2016）03-0233-06

Doi：10.3969/j.issn.1005-4847.2016.03.003

［基金項目］國家自然科學(xué)基金（No.81403339）；廣東省自然科學(xué)基金博士啟動項目（No.2014A030310150）；廣東省中醫(yī)藥管理局科研項目（No.20141186）

［通訊作者］周鳳華（1986-），女，講師，博士學(xué)位，從事缺血性心血管疾病的中醫(yī)藥防治研究。Email：wendyzhou515@126.comaortic plaques were much larger in the model group，and the levels of TC，TG，LDL-C，IL-6，hs-CRP，and TNF-α were significantly higher than those in the control group（P＜0.01 for all）.Meanwhile，the levels of HDL-C，IL-10，TGF-β and Foxp3 mRNA were much lower than those in the control group（P＜0.01 for all），and the Tregs numbers were less than that in the control group（P＜0.01）.HLJDD regulated the blood lipids in ApoE-/-mice and decreased the levels of IL-6，hs-CRP，andTNF-α，however increased the levels of IL-10，TGF-β and Foxp3 mRNA.At the same time，it increased Tregs number in the ApoE-/-mice.Compared with the model group，the difference was statistically significancet （P＜0.01）.Conclusions HLJDD can significantly alleviate the aortic plaque damages in ApoE-/-mice.It may be related to the up-regulation of Tregs，which can lead to decrease the expression of serum pro-inflammatory factors such like IL-10，hs-CRP and TNF-α.

Corresponding author：ZHOU Feng-hua，Email：wendyzhou515@126.com

［收稿日期］2015-12-08

Anti-atherosclerotic effect of a Chinese medicine，Huanglian Jiedu Decoction，mediated by regulatory T cells

ZHOU Feng-hua，CHENG Sai-bo，ZHANG Yu，ZHANG Lei，JIA Yu-hua，ZHAO Dan-dan，SU Zhi-jie
（School of Traditional Chinese Medicine，Southern Medical University，Guangzhou 510515，China）

【Abstract】Objective To study the effect of a Chinese medicine，Huanglian Jiedu Decoction（HLJDD），on atherosclerotic plaque，inflammatory factors and regulatory T cells in ApoE-/-mice.Methods High fat diet was given to ApoE-/-mice to establish an atherosclerosis model.40 male ApoE-/-mice were randomly divided into five groups：model group，simvastatin group，low，moderate and high dose HLJDD groups（n=8）.HLJDD was intragastrically administered in a dose of 3.5，7.0，or 14.0 g/（kg·bw）once dailg for 16 weeks.The dose of simvastatin was 5.0 g/（kg·bw）.Another 8 male C57BL/6J mice were taken as control group.At the end of the 29-week experiment，all of the mice were sacrificed.The aortic plaques，level of blood lipids，inflammatory factors，Tregs number and the level of Foxp3 mRNA were detected and analyzed by ELISA，flow cytometry and RT-PCR，respectively.Results Compared with the control group，the

【Key words】Atherosclerosis；Regulatory T cells；Huanglian Jiedu Decoction，Chinese medicine；IL-10；TGF-β；Mice