林榮榮，丁 苗，曾榮榮，付玉蓉，關(guān)婷婷，李青竹

(吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林132101)

一例豬日本乙型腦炎的診斷

林榮榮，丁 苗，曾榮榮，付玉蓉，關(guān)婷婷，李青竹*

(吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林132101)

豬日本乙型腦炎是由乙型腦炎病毒 (Japanese encephalitis virus，JEV)感染引起，該病原體于1934 年在日本最早發(fā)現(xiàn)，故名日本乙型腦炎，簡(jiǎn)稱乙腦。豬是乙腦病毒主要易感動(dòng)物，帶毒豬是本病的傳染源，臨床上以引起妊娠母豬發(fā)生流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、木乃伊胎，公豬睪丸腫大為特征，少數(shù)豬有神經(jīng)癥狀。現(xiàn)將1例豬日本乙型腦炎的PCR診斷報(bào)道如下，供參考。

1 臨床癥狀

2015年2—3月，吉林某豬場(chǎng)養(yǎng)殖規(guī)模1 000頭，養(yǎng)豬已5年，從2月起陸續(xù)有20余頭妊娠母豬出現(xiàn)流產(chǎn)，偶有胎衣不下，無(wú)其它明顯的臨床癥狀。初步懷疑是細(xì)小病毒病、乙腦、藍(lán)耳病，采集取病、死豬的肝、腸、膀胱、睪丸、腹股溝淋巴結(jié)及全血送本院動(dòng)物檢疫中心診斷。

2 實(shí)驗(yàn)室診斷

2.1 病毒基因組提取 研磨采集的組織病料，提取病毒基因組，操作步驟如下：(1) 10% SDS 25 μL 和20 mg/μL蛋白酶K 5 μL，55 ℃ 消化1.5～2 h。(2)加入酚200 μL，混勻，12 000 r/min 離心10 min ，取上清液。(3)加入氯仿100 μL、酚100 μL，12 000 r/min離心10 min，取上清液。(4)加入氯仿 200 μL，12 000 r/min 離心10 min，取上清液。(5)加入等體積的異丙醇和1/10體積的5 mol/L NaAC室溫20～30 min，13 000 r/min 離心15 min ，倒掉上清液。(6)加入75%乙醇600 μL，7 000 r/min離心5 min ，倒掉上清液，室溫放置晾干，TE (pH 8.0) 20 μL 溶解沉淀，-20 ℃ 保存。按照實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法提取RNA并進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將獲得的cDNA于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 PCR檢測(cè) PCR的反應(yīng)體系為25 μL，1 μL P1/P2(10 pmol/μL)(P1:5’CAATCATGGCAAACGACAAC3’；P2:5’GCTTCCTCGTTGTCGCTCT3’)，3 μL dNTP(2.5 mmol/μL)、10×buffer 2.5 μL、Taq酶0.25 μL、DEPC滅菌水 16.25 μL，反應(yīng)條件為25個(gè)cycle，預(yù)變性 94 ℃ 5 min 后，進(jìn)入循環(huán)94 ℃ 45 s，52～57 ℃ 45 s，72 ℃ 45 s，72 ℃延伸 7 min。1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增條帶。

3 檢測(cè)結(jié)果

將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1 % 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，在750 bp位置發(fā)現(xiàn)目的帶，見(jiàn)圖1，說(shuō)明該豬是由乙腦病毒引發(fā)的疾病。

M:DL-2 000 Marker；1：PPV；2：PRRS；3：JEV；4：陰性對(duì)照?qǐng)D1 PCR檢測(cè)結(jié)果

4 討論

4.1 本病是自然疫源性疫病，許多動(dòng)物和人均可感染，多為隱性感染，病豬是主要的傳染源。流行特點(diǎn)是感染率高，發(fā)病率較低，病死率也低。

4.2 本病具有一定的季節(jié)性，多發(fā)于春末夏初，主要是通過(guò)蚊蟲(chóng)的叮咬傳播，蚊蟲(chóng)既是傳播媒介也是病毒的貯存宿主

5 防治措施

本病的治療無(wú)特殊有效方法。豬發(fā)病后應(yīng)立即隔離，采取鎮(zhèn)靜安神，防止繼發(fā)感染等措施，必要時(shí)可補(bǔ)液治療，同時(shí)應(yīng)做好護(hù)理工作。預(yù)防本病應(yīng)做好以下幾方面工作。

5.1 做好殺滅蚊蠅、除蜱工作，可取得較好的預(yù)防效果，如清理蚊蟲(chóng)孳生地，及時(shí)消滅越冬蚊蟲(chóng)。疏通溝渠，排除積水，并于黃昏時(shí)往圈舍內(nèi)噴灑高效低毒殺蟲(chóng)藥物。

5.2 因地而異，制定切實(shí)可行的免疫方案，給母豬群定期免疫接種可有效預(yù)防和控制該病。免疫注射通常是在蚊蟲(chóng)出現(xiàn)之前，采用日本乙型腦炎弱毒疫苗，種豬群常在每年的2—4月進(jìn)行，后備母豬配種前再免疫接種1次，以后則按常規(guī)每年注射1次。

5.3 科學(xué)管理，合理飼養(yǎng)，提高豬體抵抗力。

2015-12-16

吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院2015大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目(2015109)；吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院青年基金項(xiàng)目(吉農(nóng)院合字[2015]第207號(hào))

林榮榮 (1993 — )，女，動(dòng)物醫(yī)學(xué)專業(yè)在讀本科。

*通訊作者：李青竹(1984 — )，女，博士，主要從事動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)和動(dòng)物疾病診療研究。

S858.28

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1007-1474(2016)02-0036-02