董少杰++孫潔++畢相東

摘要：研究了黃顙魚(yú)（Pelteobagrus fulvidraco）×烏蘇里擬鲿（Pseudobagrus ussuriensis）雜交卵的受精率、孵化率、畸形率、胚胎發(fā)育時(shí)序以及魚(yú)苗破膜后30 d內(nèi)的體長(zhǎng)變化。結(jié)果表明，黃顙魚(yú)×烏蘇里擬鲿正交組和烏蘇里擬鲿×黃顙魚(yú)反交組卵的受精率和畸形率與兩親本自交組并無(wú)顯著差異，黃顙魚(yú)×烏蘇里擬鲿正交組與黃顙魚(yú)自交組受精卵的孵化率無(wú)顯著差異，且均顯著高于烏蘇里擬鲿×黃顙魚(yú)反交組和烏蘇里擬鲿自交組。兩雜交組胚胎發(fā)育時(shí)序分別與各自母本自交組相近。胚后30 d內(nèi)，烏蘇里擬鲿×黃顙魚(yú)反交組和烏蘇里擬鲿自交組魚(yú)苗在體長(zhǎng)方面較其他試驗(yàn)組具有明顯優(yōu)勢(shì)，且前者在破膜后第20天開(kāi)始，體長(zhǎng)顯著超過(guò)后者。

關(guān)鍵詞：黃顙魚(yú)；烏蘇里擬鲿；雜交；胚胎發(fā)育；體長(zhǎng)

中圖分類號(hào)： S961.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2016）05-0313-03

黃顙魚(yú)（Pelteobagrus fulvidraco）、烏蘇里擬鲿（Pseudobagrus ussuriensis）均隸屬于鲇形目鲿科，分屬黃顙魚(yú)屬、擬鲿屬。鲿科魚(yú)類大部分曾是江蘇省境內(nèi)江河湖泊水域的常見(jiàn)經(jīng)濟(jì)魚(yú)類[1]，其中黃顙魚(yú)屬有黃顙魚(yú)（P. fulvidraco）、瓦氏黃顙魚(yú)（P. vachelli）、長(zhǎng)須黃顙魚(yú)（P. eupogon）、中間黃顙魚(yú)（P. intermedius）、光澤黃顙魚(yú)（P. nitidus）[2]。黃顙魚(yú)因其肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美、無(wú)肌間刺且營(yíng)養(yǎng)豐富，深受消費(fèi)者喜愛(ài)[3]，是我國(guó)北方地區(qū)廣泛養(yǎng)殖的重要淡水經(jīng)濟(jì)魚(yú)類。黃顙魚(yú)的生長(zhǎng)速度比較慢，常見(jiàn)個(gè)體質(zhì)量100～200 g，250 g以上即為大個(gè)體，即使在人工飼養(yǎng)條件下長(zhǎng)到125 g左右也需要2年，且其雌魚(yú)個(gè)體規(guī)格遠(yuǎn)小于同齡雄魚(yú)[3]。利用親緣關(guān)系超過(guò)種內(nèi)關(guān)系的親本進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交往往能夠獲得具有雜種優(yōu)勢(shì)的群體[4]。近年來(lái)，為了改良黃顙魚(yú)的生長(zhǎng)性能，國(guó)內(nèi)有學(xué)者利用黃顙魚(yú)和同屬魚(yú)類作為親本進(jìn)行了雜交育種，如黃顙魚(yú)（♀）×瓦氏黃顙魚(yú)（♂）[5]，黃顙魚(yú)（♀）×江黃顙魚(yú)（♂）[6]，雜交卵的受精率或出苗率均不低于自交卵。烏蘇里擬鲿俗稱牛尾巴，主要分布于我國(guó)黑龍江水系，體型較大，最大可達(dá)1 m，且肉質(zhì)鮮美、細(xì)膩，無(wú)肌間刺[7]。邱叢芳等報(bào)道了黃顙魚(yú)（♀）×烏蘇里擬鲿（♂）的雜交試驗(yàn)，指出雜交品種生長(zhǎng)速度較快、成活率較高，該研究證明了黃顙魚(yú)（♀）×烏蘇里擬鲿（♂）雜交的可能性，沒(méi)有提及烏蘇里擬鲿（♀）×黃顙魚(yú)（♂）雜交，該研究使用了黃顙魚(yú)母本10尾，烏蘇里擬鲿父本1尾，共孵化魚(yú)苗543尾，沒(méi)有提供雜交卵的受精率、孵化率、畸形率等數(shù)據(jù)[8]。為了進(jìn)一步確定黃顙魚(yú)×烏蘇里擬鲿雜交是否適合在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用，筆者在邱叢芳等研究[8]的基礎(chǔ)上，開(kāi)展了進(jìn)一步探索。

1材料與方法

1.1親魚(yú)來(lái)源

試驗(yàn)用親魚(yú)均由天津藍(lán)科水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司提供。黃顙魚(yú)雌魚(yú)20尾，體質(zhì)量（320±10） g，雄魚(yú)6尾，體質(zhì)量（110±5） g；烏蘇里擬鲿雌魚(yú)20尾，體質(zhì)量（200 g±17） g，雄魚(yú)6尾，體質(zhì)量（302±15） g。試驗(yàn)魚(yú)體格健壯，無(wú)外傷，性腺發(fā)育成熟度良好。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)分為正交組（組合Ⅰ）：黃顙魚(yú)（♀）（10尾）×烏蘇里擬鲿（♂）（3尾）；反交組（組合Ⅱ）：烏蘇里擬鲿（♀）（10尾）×黃顙魚(yú)（♂）（3尾）；黃顙魚(yú)自交組（組合Ⅲ）：黃顙魚(yú)（♀）（10尾）×黃顙魚(yú)（♂）（3尾）；烏蘇里擬鲿自交組（組合Ⅳ）：烏蘇里擬鲿（♀）（10尾）×烏蘇里擬鲿（♂）（3尾）。

1.3催產(chǎn)

催產(chǎn)激素選用絨毛膜促性腺激素（HCG）+促黃體素釋放激素類似物（LRH-A2）+馬來(lái)酸地歐酮（DOM）。注射劑量：HCG 3 000 IU/kg、LRH-A210 μg/kg、DOM 3 mg/kg。雌魚(yú)采用2次注射法，第一針注射催產(chǎn)激素總量的25%，第二針注射余下的催產(chǎn)激素，2次注射時(shí)間間隔12 h；雄魚(yú)一次注射，與雌魚(yú)第二次注射同步進(jìn)行，注射劑量為雌魚(yú)的50%。第二次注射16 h后，達(dá)到效應(yīng)時(shí)間。

1.4人工授精

采用濕法受精。進(jìn)入效應(yīng)期后，解剖雄魚(yú)，取出精巢。將精巢剪碎并置于燒杯中，用7‰生理鹽水稀釋精液。將雌魚(yú)卵子擠入另一干燥的燒杯中，加入精液稀釋液并立即快速、充分?jǐn)嚢?，使精卵充分接觸、受精。將受精卵置于聚乙烯網(wǎng)片上，放入孵化池中孵化。孵化溫度24.5～26.5 ℃，其間不間斷充氣。魚(yú)卵孵化后，將網(wǎng)片撤出。待魚(yú)苗體色由透明轉(zhuǎn)至淺黑色開(kāi)始添加生物餌料，每天換水，保持水質(zhì)清新。

1.5受精率、孵化率、出苗率、畸形率計(jì)算方法

采用王衛(wèi)民等的方法[5]計(jì)算受精率、孵化率、出苗率、畸形率，并略作修改。從人工授精后的卵中抽取300粒卵，分為3個(gè)平行組，每組包括100粒卵。將每組卵分別放置在3個(gè) 5 000 mL 燒杯中靜水孵化，孵化過(guò)程中不間斷充氣，達(dá)到原腸晚期后計(jì)算每組卵的總數(shù)、受精卵，挑出受精卵，按組分別放入3個(gè)5 000 mL燒杯中繼續(xù)充氣孵化。魚(yú)苗破膜后計(jì)數(shù)魚(yú)苗總數(shù)、畸形魚(yú)苗數(shù)。計(jì)算公式如下：

受精率= 受精卵粒數(shù)檢查卵總數(shù)×100%；（1）

孵化率= 出膜魚(yú)苗數(shù)受精卵總數(shù)×100%；（2）

畸形率= 畸形魚(yú)苗數(shù)出膜魚(yú)苗總數(shù)×100%。（3）

1.6胚后發(fā)育

繁殖魚(yú)苗在養(yǎng)殖桶中培育，魚(yú)苗破膜48 h后，每隔1 d測(cè)量并記錄魚(yú)苗體長(zhǎng)。

1.7數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。使用SPSS 13.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，選用Duncan法進(jìn)行多重比較，進(jìn)行數(shù)據(jù)顯著性檢驗(yàn)。使用Excel 2007軟件繪制圖形。

2結(jié)果與分析

2.1受精率、孵化率、畸形率

如圖1所示，黃顙魚(yú)×烏蘇里擬鲿正交、烏蘇里擬鲿×黃顙魚(yú)反交、黃顙魚(yú)自交、烏蘇里擬鲿自交的受精率分別為（92.67±1.53）%、（89.33±3.97）%、（92.33±3.51）%、（91.67±3.21）%，各試驗(yàn)組間差異不顯著。黃顙魚(yú)×烏蘇里擬鲿正交試驗(yàn)組與黃顙魚(yú)自交試驗(yàn)組受精卵孵化率分別為（79.67±2.08）%、（81.33±3.51）%，二者之間差異不顯著，但均顯著高于黃顙魚(yú)×烏蘇里擬鲿反交試驗(yàn)組和烏蘇里擬鲿自交試驗(yàn)組。黃顙魚(yú)×烏蘇里擬鲿正交、烏蘇里擬鲿×黃顙魚(yú)反交、黃顙魚(yú)自交、烏蘇里擬鲿自交試驗(yàn)組幼苗畸形率分別為（6.00±2.00）%、（5.33±2.08）%、（4.67±0.58）%、（4.33±1.53）%，各試驗(yàn)組間差異不顯著。

2.2雜交卵和自交卵的胚胎發(fā)育

如表1所示，相同孵化條件下，黃顙魚(yú)自交卵發(fā)育時(shí)長(zhǎng)最久（約65 h 15 s），黃顙魚(yú)×烏蘇里擬鲿正交卵次之（約60 h 10 s），烏蘇里擬鲿自交卵發(fā)育時(shí)長(zhǎng)最短（約50 h 53 s），黃顙魚(yú)×烏蘇里擬鲿反交卵發(fā)育時(shí)長(zhǎng)與烏蘇里擬鲿自交卵相近，較之略長(zhǎng)（約51 h 23 s）。各試驗(yàn)組受精卵的發(fā)育時(shí)序有差異，雜交組受精卵與母本自交受精卵發(fā)育時(shí)序相接近。

2.3胚后30 d內(nèi)體長(zhǎng)變化

如圖2所示，除了在孵化后第22天黃顙魚(yú)自交組與烏蘇里擬鲿自交組魚(yú)苗體長(zhǎng)相近外，在孵化后第2天至第30天，黃顙魚(yú)×烏蘇里擬鲿反交組和烏蘇里擬鲿自交組魚(yú)苗體長(zhǎng)均顯著高于黃顙魚(yú)×烏蘇里擬鲿正交組和黃顙魚(yú)自交組魚(yú)苗。孵化后第18天之前，黃顙魚(yú)×烏蘇里擬鲿反交組和烏蘇里擬鲿自交組魚(yú)苗體長(zhǎng)差異不顯著，自孵化后第20天起直到試驗(yàn)結(jié)束（第30天），前者魚(yú)苗體長(zhǎng)極顯著大于后者。各試驗(yàn)組魚(yú)苗出膜后30 d內(nèi)的體長(zhǎng)增長(zhǎng)均呈典型的指數(shù)函數(shù)關(guān)系（表2）。

3結(jié)論與討論

3.1黃顙魚(yú)和烏蘇里擬鲿雜交在生產(chǎn)上的可行性

遠(yuǎn)緣雜交是雜交育種中應(yīng)用較多的一種獲得具有優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀雜交后代的方式，它是指種間、屬間乃至親緣關(guān)系更遠(yuǎn)的生物類型之間的雜交[6]。黃顙魚(yú)與烏蘇里擬鲿為同科異屬，前者生長(zhǎng)速度較快，但個(gè)體較小，后者個(gè)體較大，對(duì)環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)，但生長(zhǎng)速度相對(duì)較慢。王明寶等對(duì)黃顙魚(yú)（P. fulvidraco）與瓦氏黃顙魚(yú)雜交技術(shù)進(jìn)行了研究，指出雜交后代生長(zhǎng)速度快、形態(tài)特征好，當(dāng)年可達(dá)到125 g/尾[3]。蔡永祥等研究了江黃顙和烏蘇里擬鲿雜交，得到了大量魚(yú)苗，指出二者的屬間雜交在育種實(shí)踐中是可行的[9]。本研究結(jié)果表明，黃顙魚(yú)與烏蘇里擬鲿正交組卵和反交組卵的受精率、畸形率與親本自交組并無(wú)顯著差異。孵化率方面，雜交組與母本自交組相近，證明了兩者屬間雜交在實(shí)踐中的可行性。黃顙魚(yú)的核型為24 m+14 sm+10 st+4 t[10]，烏蘇里擬鲿的核型為24 m+18 sm+10 st[10-11]，兩者二倍染色體數(shù)（2n）均為52，核型相近。王祖熊等認(rèn)為，雙親間的染色體組型越相近，雜交親和性越強(qiáng)且成功概率也越高[12]。本研究結(jié)果符合這一觀點(diǎn)。

3.2雜交與自交卵胚胎發(fā)育和胚后30 d體長(zhǎng)變化比較

本研究結(jié)果表明，黃顙魚(yú)與烏蘇里擬鲿正交組和反交組胚胎發(fā)育時(shí)序均介于父母本自交組之間。前者發(fā)育時(shí)長(zhǎng)約為60 h 10 s，較母本自交組約提前5 h，較父本自交組約延遲9 h；后者發(fā)育時(shí)長(zhǎng)約為51 h 23 s，較母本自交組約延遲0.5 h，較父本自交組約縮短14 h。雜交卵在胚胎發(fā)育過(guò)程中會(huì)發(fā)生“偏母遺傳”現(xiàn)象，即雜種的胚胎發(fā)育速度受到細(xì)胞質(zhì)因子的調(diào)控，胚胎發(fā)育的時(shí)序介于父母本之間，并偏向于各自母本胚胎發(fā)育時(shí)間[7，13]。本研究結(jié)論與上述觀點(diǎn)相符。因條件所限，本研究?jī)H觀測(cè)了魚(yú)苗破膜后30 d內(nèi)的體長(zhǎng)變化。結(jié)果表明，黃顙魚(yú)×烏蘇里擬鲿正交組魚(yú)苗與黃顙魚(yú)自交組體長(zhǎng)差異不顯著。烏蘇里擬鲿×黃顙魚(yú)反交組和烏蘇里擬鲿自交組魚(yú)苗在體長(zhǎng)方面較其他試驗(yàn)組具有明顯優(yōu)勢(shì)，且前者自破膜后第20天開(kāi)始，體長(zhǎng)顯著超過(guò)后者。

參考文獻(xiàn)：

[1]王明華，蔡永祥，陳校輝，等. 烏蘇里擬鲿、瓦氏黃顙魚(yú)雜交與自交子代生長(zhǎng)性能比較[J]. 水產(chǎn)科學(xué)，2013，32（1）：50-54.

[2]張國(guó)松，侯新遠(yuǎn)，尹紹武，等. 黃顙魚(yú)屬（Pelteobagrus）魚(yú)類遺傳多樣性的研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（3）：174-179.

[3]王明寶，陳強(qiáng)，陳耀炳，等. 黃顙魚(yú)與瓦氏黃顙魚(yú)雜交技術(shù)研究[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2012（24）：273，278.

[4]樓允東. 魚(yú)類育種學(xué)[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2001.

[5]王衛(wèi)民，嚴(yán)安生，張志國(guó)，等. 黃顙魚(yú)♀與瓦氏黃顙魚(yú)♂的雜交研究[J]. 淡水漁業(yè)，2002，32（3）：3-5.

[6]樓允東，李小勤. 中國(guó)魚(yú)類遠(yuǎn)緣雜交研究及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用[J]. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2006，13（1）：151-158.

[7]秦欽，梁丹妮，王明華，等. 雜交鲿（烏蘇里擬鲿♀×瓦氏黃顙魚(yú)♂）胚胎發(fā)育的研究[J]. 南京師大學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2012，35（3）：81-86.

[8]邱叢芳，王彬，余祥勝. 黃顙魚(yú)♀×烏蘇里擬鲿♂苗種繁殖養(yǎng)殖試驗(yàn)[J]. 科技信息，2009（4）：314.

[9]蔡永祥，陳友明，陳校輝，等. 江黃顙（Pelteobagrus vachelli）和烏蘇里擬鲿（Pseudobagrus ussuriensis）雜交F1代形態(tài)差異[J]. 湖泊科學(xué)，2011，23（2）：264-270.

[10]洪云漢，周暾. 鮠科九種魚(yú)的核型研究[J]. 動(dòng)物學(xué)研究，1984，5（增刊2）：21-28，85-86.

[11]薛淑群，尹洪濱. 黃顙染色體組型的初步分析[J]. 水產(chǎn)學(xué)雜志，2006，19（1）：11-13.

[12]王祖熊，張錦霞，靳光琴. 魚(yú)類雜交不親和性的研究[J]. 水生生物學(xué)報(bào)，1986，10（2）：171-179.

[13]夏仕玲，余來(lái)寧，吳作文. 魚(yú)類卵細(xì)胞質(zhì)對(duì)胚胎發(fā)育速度的調(diào)控[J]. 淡水漁業(yè)，1990，18（3）：17-18.郭霄峰，向建國(guó)，李煙亮，等. 湘江野生鳡消化道早期發(fā)育及食性轉(zhuǎn)化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，44（5）：316-318.