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(雞西市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心食?；遥邶埥?雞西　158100)

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液相色譜-質(zhì)譜法快速測(cè)定小兒清解顆粒中非法添加的氨基比林

隋譯*

(雞西市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心食?；?，黑龍江 雞西158100)

摘要目的：建立快速準(zhǔn)確鑒定小兒清解顆粒中非法添加氨基比林的方法。方法：用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)4種不同廠家小兒清解顆粒中非法添加消腫止痛類化學(xué)藥品氨基比林進(jìn)行篩查，與氨基比林對(duì)照品的一、二級(jí)質(zhì)譜圖進(jìn)行比較。結(jié)果:在樣品質(zhì)譜圖中有3家樣品的圖譜與對(duì)照品有不一致的一級(jí)質(zhì)譜峰與二級(jí)質(zhì)譜峰，1個(gè)廠家的樣品圖譜有與對(duì)照品有一致的一級(jí)質(zhì)譜峰與二級(jí)質(zhì)譜峰。結(jié)論：應(yīng)用液相色譜-質(zhì)譜法可快速準(zhǔn)確鑒定出中藥制劑中是否含有非法添加的氨基比林，并可以準(zhǔn)確計(jì)算添加氨基比林的含量。

關(guān)鍵詞液相色譜-質(zhì)譜法； 小兒清解顆粒； 氨基比林

小兒清解顆粒為棕褐色的顆粒，氣微香，味甜、微苦。主要成分為：金銀花、連翹、地骨皮、青黛(包煎)、白薇、地黃、廣藿香、石膏，具有除瘟解毒、清熱退燒的功效。臨床多用于小兒外感風(fēng)熱火時(shí)疫感冒引起的高燒不退，汗出熱不解，煩躁口渴、咽喉腫痛，肢酸體倦，尤其對(duì)兒童高熱不退效果比較顯著。目前，小兒清解顆粒的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行的是《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。目前，較多家長(zhǎng)對(duì)小兒中藥制劑比較信任，一些非法分子為了牟取暴利，在兒童用藥中非法添加化學(xué)藥物。而非法添加的藥物將會(huì)給兒童身體健康造成較大影響。液相色譜-質(zhì)譜法(liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS/MS)兼具液相的高分辨率，質(zhì)譜的高靈敏性及專屬性，且樣品用量少，分析速度快，應(yīng)用范圍廣，是目前鑒別中成藥及保健品非法添加化學(xué)藥物最有效的分析方法[2-6]。本研究將對(duì)小兒清解顆粒中是否含有氨基比林進(jìn)行篩查，按照《藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件》并參考了一些文獻(xiàn)[7-12]，采用LC-MS/MS技術(shù)鑒定小兒清解顆粒中非法添加的氨基比林，現(xiàn)報(bào)告如下。

1材料

Agilent 6430型三重串聯(lián)四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀(美國(guó)安捷倫公司)；甲醇[賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司,批號(hào)：154027]，乙酸銨(HNO3優(yōu)級(jí)純)、乙酸(H2O2優(yōu)級(jí)純)；實(shí)驗(yàn)用水為超純水(屈臣氏蒸餾水)。對(duì)照品：氨基比林(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100503-200301，含量：100%)；分別取4個(gè)廠家的的藥品：(1)小兒清解顆粒(北京北衛(wèi)藥業(yè)有限責(zé)任公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z11020994，批號(hào)：150117)；(2)小兒清解顆粒(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z11020222，批號(hào)：140107)；(3)小兒清解顆粒(天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司隆順榕制藥廠，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z12020656，批號(hào)：141009)；(4)小兒清解顆粒(貴州福特加制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z20054660，批號(hào)：141211)。所用玻璃器皿均以10%硝酸浸泡24 h以上，用水反復(fù)沖洗，最后用超純水沖洗干凈，陰干備用。

供試品溶液的制備：取該樣品用研缽研磨樣品后，準(zhǔn)確稱樣品適量(約相當(dāng)于300 mg)置于50 ml容量瓶中，用液相色譜流動(dòng)相溶液40 ml稀釋后，超聲提取10 min，放冷至室溫(25 ℃)用液相色譜流動(dòng)相溶液稀釋至刻度，搖勻，待測(cè)。

2.2對(duì)照品的處理

對(duì)照品溶液的制備:精密稱取氨基比林對(duì)照品50 mg，置于50 ml容量瓶中，加入流動(dòng)相35 ml，超聲10 min使溶解放冷至室溫用液相色譜流動(dòng)相溶液稀釋至刻度，混合均勻，制成儲(chǔ)備液(1 mg/ml)，再用流動(dòng)相使稀釋成200 ng/ml的對(duì)照品溶液搖勻，待測(cè)。

2.3儀器工作條件

2.3.1色譜條件：以十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑(柱頭加裝相同規(guī)格填料的預(yù)色譜柱)；檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm；以含0.02 mol/L乙酸銨-0.1%乙酸的水溶液∶甲醇溶液(V∶V=20 ∶80)為流動(dòng)相。

2.3.2質(zhì)譜的條件:電噴霧離子化源，源電壓5 KV，毛細(xì)管溫度275 ℃，鞘氣流速40 arb，正離子檢測(cè)方式，掃描方式為全掃描一級(jí)質(zhì)譜、全掃描二級(jí)質(zhì)譜，掃描范圍100～1 000 amu。

2.4測(cè)定法

分別精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μl注入液質(zhì)聯(lián)用儀，記錄液相色譜圖、一級(jí)質(zhì)譜圖和二級(jí)質(zhì)譜圖。采用比較供試品與對(duì)照品的色譜圖、一級(jí)質(zhì)譜圖和二級(jí)質(zhì)譜圖的方法進(jìn)行定性分析，確定供試品中添加的化學(xué)成分。如果供試品圖譜成陽(yáng)性結(jié)果再與對(duì)照品圖譜比較后進(jìn)行定量分析，見圖1。

圖1　氨基比林一級(jí)質(zhì)譜圖和二級(jí)質(zhì)譜圖Fig 1　Primary and secondary mass spectrum of amidopyrine

2.5線性關(guān)系考察

精密稱取氨基比林對(duì)照品溶液(每1 ml含1 μg 的溶液)0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 ml分別置于10 ml容量瓶中以流動(dòng)相稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度分別為50、100、200、400、800 ng/ml各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以樣量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程為Y=1.5E+6X+21 409，r=0.998 5，結(jié)果進(jìn)樣量在0.05～8.00 μg/ml時(shí)，峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.6靈敏度考察

取對(duì)照品溶液“2.2”適量，加流動(dòng)相逐步稀釋，按“2.3.1”“2.3.2”項(xiàng)下條件測(cè)定，上述藥物的待測(cè)量在20 ng之間時(shí)，選擇離子監(jiān)測(cè)質(zhì)譜峰信噪比(S/N)在3左右。

2.7精密度考察

在所選定測(cè)試條件下，以濃度為200 ng/ml的氨基比林對(duì)照品溶液為考察對(duì)象，重復(fù)進(jìn)樣6次進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn)，測(cè)得RSD=0.9%，表明該分析方法精密度良好。

2.8加樣回收率考察

準(zhǔn)確稱取樣品小兒清解顆粒(批號(hào)為：140107)0.3 g(3份)，按“2.1”項(xiàng)處理后，按“2.3.1”項(xiàng)條件檢測(cè)后，然后在樣品中按照低、中、高濃度分別加入標(biāo)準(zhǔn)樣品0.05、0.20、0.80 μg，做回收率試驗(yàn)。結(jié)果表明，樣品小兒清解顆粒加標(biāo)回收率分別為89.05%、90.10%、89.89%，RSD為0.4%。

2.9測(cè)定結(jié)果

小兒清解顆粒中非法添加的氨基比林化學(xué)成分的測(cè)定:分取研磨好的小兒清解顆粒批號(hào)為：140107、141009、140107、141211共4份(n=4，按“2.1”“2.2”“2.3.1”“2.3.2”的項(xiàng)下方法，測(cè)定編號(hào)為樣1，樣2，樣3，樣4的樣品中，結(jié)果比較供試品與對(duì)照品的色譜圖、一級(jí)質(zhì)譜圖和二級(jí)質(zhì)譜圖的方法進(jìn)行定性分析，確定前3個(gè)供試品中未添加化學(xué)成分氨基比林。后1個(gè)樣品中含有氨基比林的含量成陽(yáng)性，樣品規(guī)格為：1袋10 g，經(jīng)定量分析后測(cè)得氨基比林含量為1.38 μg/g，不符合規(guī)定。

3討論

隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步與發(fā)展，不斷更新的檢測(cè)技術(shù)將使假劣藥物無(wú)藏身之地。多年的檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)證明，正確應(yīng)用儀器及方法對(duì)檢驗(yàn)摻偽藥物非常重要[13-17]，檢驗(yàn)人員應(yīng)熟練掌握檢驗(yàn)儀器的操作。

該質(zhì)譜檢驗(yàn)為有對(duì)照品的儀器檢驗(yàn)，在保留時(shí)間一致的情況下，且在該陽(yáng)性樣品圖譜并無(wú)雜質(zhì)干擾，則無(wú)需查看出峰所對(duì)應(yīng)的棒狀圖。如果該陽(yáng)性樣品圖譜出峰多，且雜質(zhì)分離不開，打出棒形圖譜能更好的分辨出氨基比林峰。

本研究對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)[18]使用的流動(dòng)相進(jìn)行了相應(yīng)的調(diào)整。原標(biāo)準(zhǔn)流動(dòng)相為0.02 mol/L乙酸銨-0.1%乙酸的水溶液∶乙腈(V∶V=30 ∶70)，將乙腈調(diào)整為甲醇。雖然乙腈的洗脫能力強(qiáng)于甲醇，且黏度小、傳質(zhì)快，但是乙腈的價(jià)格相對(duì)昂貴，毒性也較強(qiáng)。相關(guān)資料報(bào)道，用甲醇做流動(dòng)相，紫外波長(zhǎng)須設(shè)在>230 nm，乙腈則>210 nm。在本試驗(yàn)中，波長(zhǎng)為280 nm，不超限，而且用甲醇替代乙腈后，經(jīng)過(guò)更改流動(dòng)相的比例，峰型效果很好，未影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。故采用該檢驗(yàn)方法能更好的應(yīng)用LC-MS/MS技術(shù)鑒定出小兒清解顆粒中非法添加的氨基比林。

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Liquid Chromatogram and Mass-spectrography for Rapid Determination of Illegally Added Amidopyrine in Pediatric Qingjie Particles

SUI Yi

(Food, Supplements and Cosmetics Room, Jixi Food and Drug Testing Center, Heilongjiang Jixi 158100, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish a rapid accurate identification method of illegally added amidopyrine in pediatric Qingjie particles. METHODS: Illegally added acetanilide detumescence chemical drug amidopyrine from four different companies were screened by liquid chromatogram(LC) and mass-spectrography(MS), and reference substance of secondary mass spectra were compared. RESULTS: In the sample mass spectrum, there were three samples were not consistent with the reference substance of primary and secondary mass spectrum peak, and a manufacturer of sample pattern was consistent with the reference substance of primary and secondary mass spectrum peak. CONCLUSIONS: Application of LC and MS method can accurately identify whether Chinese medicine preparations contains illegal added amidopyrine, and the content of aminopyrine can be calculated accurately.

KEYWORDSLC and MS; Pediatric Qingjie particles; Amidopyrine

2方法與結(jié)果

2.1樣品處理

中圖分類號(hào)R985

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1672-2124(2016)06-0798-03

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.06.029

(收稿日期：2016-01-12)